|
| 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR |
|
 |
|
|
 |
100 bp PCR product electrophoresis |
|
|
|
|
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의) |
Sorry for english, i cannot write korean right now.
But i can read korean with this computer, so please write the answer in korean. ^^
My PCR product length is about 100 bp.
1. which percent of agarose sel is suitable?
2. in electrophoresis, which volt? how long?
3. does BPB dye go faster than 100 bp PCR product?
4. My primer is 25-mer. If there is primer-dimer,can i see primer-dimer in this gel? If yes, when should i quit the electrophoresis not to lose this band? Does BPB dye go faster or slower than primer-dimer?
Thank you, Have a nice weekend. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
|
 |
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다. |
|
|
|
|
|
|
|
|
아마도 agrose보다는 polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)를 권하고 싶은데요...
만일 PCR product를 gel상에서 회수할 목적이 아니라 확인만 하실것이라면...
PAGE가 확인이 쉬울듯 합니다.
PAGE라면 25mer의 primer pair도 영동상으로 확인 가능하구요...
자세한 방법은 molecular cloning (CSH)을 참조하시면 자세히 나와 있습니다.
Buffer와 electric field condition을 비롯해 BPB와 XC의 영동 위치도....
음...더 자세한 것을 원하면 메일을 주세요...성실히 답변 드리죠..
그럼. 역시 Good luck
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1. 1% gel이상 2% 이하
2. 5 v/cm, 30 min
3. 조건에따라 약간씩 다름.. 그러나 더 빠르지는 않고 정상적인 조건에서는 약 300 bp와 같이 감
4. 아마도 확인 되지 안을것 같음 . PCR primer band는 맨 밑에 끌려서 잘 확인이 안될것 같음..
good luck!! |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100bp 사이즈의 DNA를 확실히 구분하시려면 2% Nusieve 나 Metaphor agarose를 사용하시는 것이 좋을 것입니다. 일반agarose일 경우 아마 dimer랑 구분이 명확히 되지는 않지만 보이긴합니다.
다음은 dye의 migration information입니다. 참조하세요.
PCR product가 100bp일경우 2~3% agarose에서 서로 겹치게 되겠죠...
DNA size migration with sample loading dyes
---------------------------------------------------------------
Agarose conc.(%) Xylene cyanol Bromophenol blue
---------------------------------------------------------------
0.5-1.5 4-5 kb 400-500 bp
2.0-3.0 750 bp 100 bp
4.0-5.0 125 kb 25 bp
---------------------------------------------------------------
voltage는 적당히 설정하시면 됩니다. dye가 왠만큼 내려갈 정도로요..
1.0% agarose에서는 보통 50~100V로 15~20분정도 전기영동을 하구요.
그 이상에서는 1시간 정도 합니다. 물론 이런 시간 조건은 전압이나 agarose 농도에 따라 달라집니다.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
 |
|
 |
 SPEED
강시
 실험조아
 enen
나는야학부생
Choip
친절하게살자
새슬
|
|
|
 스카이
느림보
Ip Man
아라곤
개그
Lucid
절대교주
겨우살이
|
|
|
|
|
|
실전 실험 프로토콜 101
랩노트
