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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 PCR reagent 관련
피씨알  |  2006.10.27 09:21
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
요새 PCR로 genotyping을 하는데 어떨때는 나오고 어떨때는 안나오고 의욕상실이네요. 근데 가만 생각해볼때 시약을 새로 다 바꾸면 나올때가 있거등요 그래서 제가 시약 관리를 잘못해서 그런게 아닐까 생각하는데..

DMSO
dNTP
primer
H2O
Templetes
Taq

를 어떻게 관리하시는지요...제가 하는 방법을 적자면

DMSO 는 실온에 그냥 두고 있구요

dNTP는 4가지를 섞어서 -20 에 보관하다 필요할때 녹여서 쓰고 다시 넣어두고, mixture를 만든다음에 ice에 빨리 꽂아놓을때도 있지만 몇분 아니기 때문에 실온에 둘때도 있어요

H2O는 3차수를 쓰고 있고

Primer는 역시 -20에 보관하다가 쓸때 녹이고 다쓰면 -20

Templetes는 -4에 보관하다 쓸때 실온에 그냥 두고 쓰고 다시 넣어두고

있습니다.. 이전 사람이 genotyping 하던 프로토콜 그대로 따르는데 왜 안되는지 될때도 있고 안될때도 있고 미치겠네요 Sample 문제라고 생각될때도 있는데

tail lysis를 와 proteinase K를 넣어서 하루 overnight시켜요 그걸 팁으로 끌어들이구요. 그다음 에타놀 넣어서 센트리퓨 워싱워싱 근데 나중에 H2O로 희석을 시킬때 보면 불순물이 많네요..proteinase K가 오래된거라고 프로토콜보다 2배 비율로 넣어주는데 그래도 가끔 보면 꼬리가 안녹아 있는게 있습니다..그것도 문제인가요..그래서 제가 손가락으로 톡톡쳐서 풀기도 하는데 그게 문제가 될 수 있나요? 아무튼 가능성 있는 코맨트 무엇이든 부탁드립니다..헬프미~
#PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리김승훈  |  2006.10.29   
일단은 PCR의 조건을 이야기해 주시는것이 더 나을것이라고 생각됩니다.

reagent가 의심이 가신다면 하나씩 바꿔보시는것도 좋지만 제 생각에는 PCR 조건이 약간 될수도 안될수도 있는 그런 조건인것이 아닌가 싶습니다.
한마디로 매우 민감한 조건으로 설정이 되신것이 아닌가 싶네요.

저라면 먼저 PCR조건중에 annealing Tm을 조절해 보고 MgCl2농도를 조절해 보고 cycle을 조절해 보겠습니다.

그럼 좋은결과 얻으세요~
피씨알  |  2006.10.30    
답변감사합니다....피씨알이 이렇게 어려운 건지 몰랐네요..
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