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제 경우에는....pcr 기기가 바뀌어도 잘 안될때 있더라구요!
저도 첨엔 어처구니가 없더라구요... 하지만,,정말 그랬어요.
그리고 희미 하게 라도 밴드가 잡히면...
그 밴드를 elution 해서 re-pcr 이라도 해서 사용 하심이...
그리고..혹~~~~taq이 보관상 부주의로 이상 할 수 있으니....
다른 control 로 실험 해 보시구요!!!
질문을 보아하니 쉽게 될것 같기도 한데.. 먼저 안나온 사진이라도 봐야 자세히 알수 있을 거 같네요.
product size가 크다는 것을 알고 있으시면서 왜 72도에서 30초로 하는지 알수없군요.
65도에서 30초 72도에서 1분 30초 하셔야 할것 같습니다.
그리고 DNA양이 너무 많습니다.
반으로 줄여서 시도해 보세요.
전체 volum이 50보다는 20으로 해 보시는 것도 괜찮을 듯합니다.
지나가다 제 경험으로 답변해 봤습니다.
잘 나오길 바랍니다.
위의 피씨알님 의견에 동의 합니다..
Annealing 시간을 30초 정도 주시고 Elongation 시간을 polymerase종류에 따라 다르긴 하지만
일반적으로 잘 쓰이는 taq을 예로 들면 1kb/1분.. 줘라고 메뉴얼 상으로 나와 있습니다.
2,5kb이시면 2분30초 정도 주시면 될거 같네여
아 그리고 gDNA의 경우 Denaturation 시간도 좀 높게 주는 경우도 있던데.. 조건 바꾼뒤에 안되시면 이거 한번 올려보심이..