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질문 H2DCFDA를 이용해서 ROS를 FLOW CYTOMETRRY로 측정 하였습니다
연구생  | 2011.03.21 20:17
H2DCFDA를 이용해서 ROS를 FLOW CYTOMETRRY로 측정 하였습니다. 그런데 Control과 H2O2를 400마이크로몰을 24hr처리한 결과 크게 차이가 없습니다. h2dcfda를 처리한 control과 처리하지 않은 control을 비교하면 h2dcfda를 처리하면 흡광 FLH-1에서 측정하면 오른쪽으로 Shft가 되었는데 왜그런가요? 그리고 control과 h2o2를 처리한 군과 왜 차이가 거의 없는것일까요?
실험방법은 a549cell을 이용해서 처리가 끝난 다음.
1. PBS로 2번 washing후 1%FBS가 포함된 배지를 넣고 10마이크로몰 H2DCFDA를 30MIN배양합니다.
2. PBS로 1번 washing후 Trypsin을 4분 처리후 1%FBS가 포함된 PBS를 10ml가지 채워서 400G 에서 5MIN spin down 후 위에 것은 버리고 다시 1%FBS가 포함된 PBS를 10ml가지 채워서 400G 에서 5MIN spin down 후 위에 것은 버리고 ice에 박은 후 flow cytometry이용 해서 FLH-1에서 측정하였습니다.
저는 차이점은 BLACK WELL을 쓰지 않았고 또한 RED phenol이 포함된 배지를 사용하였습니다.
문제점이 무엇일까요?조언부탁드립니다.
#H2DCFDA
 
#ROS
 
#FLOW CYTOMETRRY
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