실험 Q&A Microbiology > Yeast
pcr시 컨탐과 pcr 조건 궁금합니다
레벨1 리즈sS
저는 이제 대학원을 진학하게되서 아주 초보입니다;
다른게 아니라 여태 잘 되어 오던 pcr 과 cloning 이 되지 않아서
너무 답답하고 해서 이렇게 질문하게 되었습니다.
1. pcr 시 프라이머에 넣는 물이 컨탐이 되었을 경우에도 원밴드가 깔끔하게 제 사이즈에 딱 맞게 나올수도 있는건지 궁금합니다.
2. pcr 을 하고 젤을 봤을때 밴드가 적어도 5개이상 나오는 경우가 있었는데
DMSO 첨가도 하고 온도도 변화를 주었지만 여전히 pcr 은 되지 않고 있습니다.
primer 를 다시 짜야 하는걸까요?
또, 아예 밴드가 나오지 않는 경우도 있어요;;;
워낙 크기가 작은것들이라 , primer 짜는것도 한계가 있는데다가 domain 정보도 없어서
저한테는 디게 힘드네여, ㅠ primer 잘 짜는 법 도 알려주시면 정말 감사하겠습니다.
3. transformation 후에 colony 를 따서 miniprep 후에 일루션을 보면 투명하지 않고
흐릿한 색을 띄고 insert 도 없습니다. 제 생각엔 컨탐이 된거 같은데 대체 어디서 컨탐이 되었는지 알수가 없습니다. 엔자임도 새로 썼고 팁도 멸균한지 얼마 되지 않은것을 썼고, 다만 miniprep kit 만 실험실원들과 함께 쓰구요;;
miniprep kit 은 아무 문제가 되지 않는다고 생각됩니다 , 왜냐면 이미 그전에 컨탐이 되었기 때문에 LB 상에서 대장균보다 더 많이 자라는게 아닐까요?
제 생각엔 plate 상에서 대장균과 별 다른게 없었으므로 yeast 인것 같습니다.
primer 에 컨탐된 물을 넣었을때 이러한 현상이 생길수도 있나요?
제발 알려주세요,,,,ㅠㅠ
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