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버들붕어
(비회원)
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06.09.27 18:16
대장균에서 얻은 다소 순도가 좋지않은 단백질로 항체를 만들어,
님이 하실려고 하는대로 동물세포에 대해 사용한다면 경험상, 큰 문제는 없습니다.
다만, 제가 알기로는 항체를 만들 때 100 ug 이상의 단백질을 마우스 등의 동물에 투여하는 걸로 아는데....
좀 많이 힘들 겁니다.
일단 정제되지 않은 crude 상태에서 걸었던 gel에서 대략적이지만 100 ug 정도를 가늠하기도 다소 힘들고, 또 양이 많아지면 다른 잡밴드와 겹쳐질 확률도 더 커지는 겁니다.
하지만, 동물세포에서 발현된 단백질에 대해서라면 가능할 것도 같은데.....
저는 70 %의 성공률로 생각됩니다. (어디까지나 제 생각입니다.)
항체 만드는 일은 긴 여정이라, 그 뒤 실패할 수도 있기에 좀 신중히 결정하셔야...
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paradise4275
(비회원)
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06.09.27 20:56
님께선 Gel에서 원하는 size에서 발현된 protein band를 잘라낸뒤에
녹여서 사용하겠단 말씀같은데요..
저같은 경우엔 antibody를 만들때에는 4L배양된 Ecoli에 GST tagging된
protein을 넣고 IPTG induction하는 방법을 사용하고 있습니다.
GST tagging을 이용하여 단백질정제할 경우 순도좋게 많은 양의 protein을
(약2mg/ml) 정제할수 있는 장점이 있습니다...
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protein
(비회원)
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06.09.28 16:32
지금
his-tag으로 정제하고 있는데요..
이 방법과 동일한 방법으로 다른 protein도 발현시켜 정제 잘 했는데
유달리 지금 위에 쓴 저놈의 protein만 잘 정제가 안되네요...
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오리백숙
(비회원)
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06.09.28 19:30
다른 종류의 target protein을 발현, 정제는 용이 했다는점...
현재 문제의 target protein이 eukaryotic protein 일것 같다는점...
혹시, 발현된 His-target protein이 inclusion body를 형성해서 정제가 안된것일지도 모르겠네요..만약에 그렇다면 inclusion body용 정제 방법이 따로 있기는 한데...(책에 나와 있습니다..)..
답변이 되었는지 모르겠네요...그쪽일을 해본지..언...3,4년 되어서요...^^;;..
혹시나, 다른 문의 사항이 있다면 메일 주세요..(yhkawk@paran.com)