안녕하세요~ 293 T세포로 실험을 하고있는 학생입니다. 1. cell counting을 하고 12 well 에 셀을 24시간 둔 뒤에 H2O2를 처치하는 실험을 하려고 할때요. H2O2를 처치하고 12 well에 붙어있는 세포를 떼어낼때도 트립신으로 떼어내야하는건가요? 만약 그렇다면 트립신의 양은 얼마정도를 넣어야하는지요?
2. H2O2를 처치하는 방법을 실험방 선생님께서 12well 에 셀을 24시간 둔뒤, 미디어를 제거하고 원하는 H2O2와 미디어를 섞에서 1ml처치하라고 애기하시던데요. 제가 미리 만들어놓았더니 시간이 지나니 배지의 색이 무색으로 바뀌었습니다. 미리 만들어서 보관하면 안되는 건가요? 실험을 할때마다 그때그때 만들어야하는지요?
3. 다른 농도의 H2O2를 처치하고 시간이 지난뒤에 세포의 viability를 보려고 할때 트립판 블루로 살펴보는 방법은 괜찮을까요?
저도 마찬가지로 설명드릴 것이 없기는 한데, 2번이 좀 신경쓰이네요.. 만약 배지의 색이 중요하다면 H2O2 와 배지 섞을 때, phenol red 없는 배지 사용하시길 바랍니다. 그리고 H2O2는 원래 섞어 두면 안됩니다. pH는 완충제라는 개념이 존재하지만 산화환원에는 그러한 물질이 없습니다. 즉 H2O2가 무작위적으로 배지를 산화시키기 때문에 배지가 이미 변했다고 보시면 됩니다.
1.12well에서 세포를 왜 분리시키는 이유가? mtt를 위해서라면 떼실이유가 없을테고 다시 동결을 그걸로 시키실리는없고....cellculture petri dish 기준은 2ml입니다. 2.배지 뚜껑을 열어노셨나여????? 산소와 RPMI가 만나면 빨갱이에서 희미해집니다. 관리를 잘못 하신듯. 3. 생존을 보기 위해서 트립판블루를 사용?? 걍 현미경으로 보심이..cell counting하실껀가여? ;;
강시
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