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조회 9177  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 MTT assay에서 MTT 농도..
MTT  |  2006.09.12 14:46
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
현재 MTT를 final 1mg/ml로 사용하고 4시간 후 DMSO를 처리합니다.

그런데..

suspension cell에 drug을 treat 하는 실험이라서

MTT를 처리하기전 media+drug을 제거할수 없는 상황입니다.

그래서 drug이 제거되지 않은 상태로 MTT를 treat하려고 하는데요

이 경우에 drug의 effect time(time 별로 effect를 보고 있습니다.)을

MTT 넣는 순간 최소화하기 위해서

MTT의 농도를 올려서 cytotoxicity를 최대로 하는게 가능한지 궁금해요

MTT의 농도를 올리면 cell이 1mg/ml로 줬을때 보다 바로 죽겠죠?

그리고 4시간까지 두지 않아도 되는지 궁금합니다.
#MTT
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이흠..  |  2006.09.12   
정확히 그 시간만 drug를 처리하고 싶으신거 같은데 배지를 제거하지 않는이상 방법이없네요. MTT의 경우 살아있는 세포의 미토콘드리아의 기질이 되어 fomazan이 형성되는 원리를 가지는 실험인데 그것으로 cytotoxicity하게 한다는게 좀.. MTT 시약의 처리같은 경우는 1시간 정도만 해도 되기때문에 그정도 시간은 drug처리 시간에서 무시하는게 대부분입니다. 그 후 MTT lysis buffer 를 통해 Cell을 녹여서 관찰하는 방법이 무난합니다. 이상 허접한 답변이였습니다.
개구리김승훈  |  2006.09.13   
suspension cell에서 MTT는 하기 힘들죠. 그래서 제가 아는분은 MTS를 사용합니다. 또는 MTX요. cell에 따라서 좀 다른 결과를 내는거 같은데 이 두가지는 suspension cell에서 sceretion 형태로 내는거라 cell lysis하지 않고도 사용이 가능하다고 합니다.
저도 사용해 보지 않아서 정확히는 말씀을 못 드리겠구요.
sigma시약이니 한번 찾아보세요.
사용은 쉽더라구요.
chobo  |  2006.09.13    
역시 약재의 독성실험에서 mtt처리시간은 배제해야한다고 생각되네요. 보통 24시간을 보지 않나요? suspension cell의 경우는 나중에 lysis가 문젠데요. 저는 96well plate를 3000rpm정도로 15분 centrifuge해서 파이펫으로 일일이 150ul씩을 덜어내고 DMSO를 처리햇는데요. 핸들링에 따라 오차가 많아서 비추구요. 아래분이 언급한 suspension cell용 kit를 사용하시는게 좋을듯 싶네요.
wst-1  |  2006.09.16    
저희는 wst-1이란 물질을 사용하는데요 처리후 그냥 바로 측정해두 되요~

MTT처럼 DMSO로 녹이는 과정 없이요~^^

mtt보다는 조금 비싸긴하지만 더 간편하고 측정도 잘되요~^^
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