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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 8491  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western blot strippig 후 blocking을 안했을때..
갈길이구만리  | 2010.11.26 17:06
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

western blot을 하는데 stripping 후 blocking을 잊고 안했습니다.

원래 붙였던 것은 myc Ab이고 2nd Ab는 rabbit이구요.

나오면 안될 곳에서 나와서 strippting했습니다.

그런데 blocking을 잊고 안 한 것 같아서요.

다시 붙인 것도 myc Ab이고(다른 제품) 2nd Ab는 mouse입니다.

그런데 또 나오면 안될 곳에서 다시 나왔는데 혹시 stripping 후 blocking을 안해서 전에 붙인 것 까지 나온 것일까요??

 

stripping이 항체를 떼는 역할을 한다고 알고 있는데 그러면 blocking을 안 했다고 하더라도 그 전의 것이 남아있으면 안되지 않나요?? 2nd Ab도 다른데..

 

휴 바보같은 실수해놓고 이런 질문 올리고 있으니까 민망하네요...

답변해시면 감사하겠습니다.

 

#western
 
#stripping
 
#blocking
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대왕개구리강시  |  2010.11.26   
멤브레인에는 단백질이 붙습니다.
SDS-PAGE 젤을 멤브레인에 tranfer하면 젤의 단백이 멤브레인으로 옮겨가며, 단백밴드가 없는곳은 빈곳으로 남습니다.
항체도 단백입니다.
항원과 결합도 하지만 멤브레인의 단백밴드가 없는 공간 어디에라도 붙어서 백그라운드가 기커멓게 나옵니다.
blocking은 transfer된 단백이 없는 빈 공간을 nonspecific한 BSA나 유단백으로 코팅해서 항체가 아무데나 붙지 못하게 해주는 역할을 합니다.
stripping후에 blocking을 안하면 백그라운드에 항체가 붙을 가능성이 있습니다.
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