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질문 MTT assay에서 죽은 cell들이 발색이 되요ㅠ.ㅠ
MTT 왕 초보  |  2010.09.14 23:04
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
처음으로 MTT assay를 시도해본 대학원 생입니다.
제 실험은 HepG2 cell에 IL-6를 treat해서 cell이 죽는 condition,
즉 control set을 잡는 실험을 하고 있어요

분명히 3일 treat후에 cell이 모두 떠서 미디어에 둥둥 떠다니는걸 확인하고,
MTT시약을 10X로 만든 것을 media에 넣었습니다. (IL-6 treat하지 않은 cell은 멀쩡히 살아 있었습니다)

그런데, 분명히 죽은 cell이 있는 well에서(IL-6 treat중인 media에, 배지갈지 않고,) MTT를 넣자마자
진한 노란색 발색이 났고,
37도에서 한시간 동안 발색후에 조심히 MTT가 들어있는 media를 제거 후
DMSO를 넣어주었습니다.

그 결과, 다 죽은 것을 현미경으로 확인한 well에서 더 진한 보라색 발색을 봤어요.

제가 알기로는 MTT 발색은 살아 있는 cell에서 더 진하게 발색이 되는걸로 아는데
제 결과는 완전히 반대로 나왔어요.

죽은 cell은 다 걷어내고 MTT를 넣었어야 했나요? ㅠㅠ
어떻게 결과가 거꾸로 나왔는지
고수님들의 조언 부탁드립니다 ~~~꾸벅.
#MTT assay
 
#IL-6
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리째진빤쓰  |  2010.09.15   

저도 몇번인가 이런 경험이 있었습니다.

그래도, 제가 있던 실험실에선 MTT이외의 방법으로 실험을 할 수 없는 상황이라서

방법을 찾다가 찾다가

글쓴이께서 마지막에 적어주신 것 처럼 죽은 세포는 다 걷어 내었습니다.

MTT는 분명, 이론상 살아있는 세포에만 반응을 하는데,,,말이죠

이상하더라구요, 결국, 정확한 결론은 내리지 못했지만

또한, 살아있는 세포라는 것! 즉, 늙어서 죽기 직전의 세포도 포함합니다.

세포의 활성이 거의 끝난 녀석들이죠-

그래서 제가 실험 할때에는, 떠있는 세포 또는, 늙어서 떨어지려는 세포 들까지도

최대한 제거 하기 위해서

MTT시약을 넣기전 배지를 빼고, PBS로 세척후 다시 미디어로 세척을 해주었습니다

그다음 MTT시약을 넣고 인큐베이팅 한 후 DMSO,, 뒤는 같을듯 하네요

저도 그 이상의 조언이랄까,,는 무리네요

아는게 한계가 있어서요-

그럼 잘 해결하시길 바랍니다-

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