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 전체 > Molecular Biology-DNA > DNA Modification
조회 5087  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Dh5a expression test 질문입니다.
초짜  | 2010.07.31 20:34
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
단백질을 발현시키고자 pet41 vector에 gene을 집어넣고, dh5a에서 iptg를 이용해

induction을 주었습니다. 일반적인 wild type의 gene과 아미노산을 하나씩만을 바꾼

mutation된 gene두개를 각각 vector에 집어 넣었습니다.

따라서 총 3개의 gene을 발현시키고자 하는데,

mutation된 gene하나만 발현이 안되는 것 같습니다.

Dh5a가 발현용이 아닌 건 알고 있는데 하나만 발현이 안되니 이상하네요...ㅜㅜ

아미노산 서열 하나 바뀐게 원인이 될 수 있나요??

vector에 들어간 insert는 제대로 들어갔습니다...
#dh5a
 
#expression
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2010.08.01   

혹시 gel사진 볼 수 있을까요?
E.coli DH5a는 pET41의 발현 host가 아닙니다.
pET41은 T7 promoter를 이용하는 벡터라서 T7 RNA polymerase가 있는 host에서만 발현됩니다.
DH5a에서 발현된 자체가 좀 이상한겁니다.
혹시 엉뚱한 밴드를 induction된걸로 봇긴게 아닌지요?

초짜  |  2010.08.01    

아~ 감사합니다. 원래 발현이 안돼야 정상이군요.

근데 2개는 dh5a를 가지고 western을 했는데 원밴드로 잡히네요...사이즈도 맞고요

1차 안티바디가 상한 것일까요??

수정시  |  2010.08.02    
DH5a에서도 발현됩니다.
지나가다  |  2010.08.02    

누가 발현된다고 하나요?
그건 발현이 아니라 leaking입니다. western을 해야만 겨우 잡히는 이유겠죠.

잘못된 지식은 본인만 망치는 것이 아니라 다른 사람도 망하게 합니다.

개구리animanga  |  2010.08.02   

T7 promoter downstream의 gene이 E.coli RNA polymerase에 의해 leaky expression이 되나요?

저도 밴드가 잡힌다는 것 자체에 의구심이 드는군요. 균주가 DH5alpha가 아닌 것 아닌가요?

(antibody와는 별개의 문제입니다)

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