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BioLab 이은열 교수
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조회 6962  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 endothelial cell 형광염색 하는 방법
알my3158  | 2010.07.14 14:24
안녕하세요
formalin-fixed 후 파라핀 섹션을 뜬 심근조직에서 endothelial cell marker를 형광염색을 통하여 보려고 합니다

제가 사용하여 본 시약은  vWF (DAKO, abcam), isolectin (invitrogen)이고
normal 한 방법으로는 염색이 잘 안되어서 지인 및 논문에 나온 방법들 을 시도해 보아도 안됩니다
논문 사진으로는 EC lining이 동그랗고 예쁘게 잘 나오던데
전...조직 내 뜨문뜨문 점 점으로 나오기는 하는데, 동그란 혈관 모양은 아무리 봐도 없어요 ㅠ
심지어는 혈관 부분에는 전혀 염색이 안되는 경우도 많았습니다

제가 시도해 본 방법은 아래와 같습니다
- antibody 농도별: vWF (DAKO 제품과 abcam 제품,각각 1:100, 1:200 dilution), isolectin (invitrogen, 1:20 ~ 1:200 dilution)
- deparaffinization: 60 도 xylene 사용
- antigen retrival: proteinase, trypsin, sodium citrate (microwave), or tris/EDTA (microwave)
- 위의 방법 각각 및 조합

참고로, 위의 어떠한 방법을 사용하더라도 smooth muscle actin 형광염색은 잘 됩니다
또한 위의 방법으로 형광이 아닌 histo 염색을 하였을 때는 EC lining이 잘 보입니다

심근조직이 아닌 다른 조직으로라도 형광염색에 성공하신 분들 계시면, 조언 부탁드려요~
감사합니다

#endothelial cell staining
 
#혈관내피세포
 
#염색 staining
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
유전자  |  2010.07.15    
안녕하세요.

저는 내피세포를 키우고 있는 연구원입니다.

저도 셀에 형광염색을 해야 하는데 제가 처음이라 하는 방법을 잘 모릅니다.

혹시 실험방법에 대하여 좀 알려주실 수 있으신가요?

셀을 키워 놓고 정작 확인은 못하고 있습니다. 전에 있던 연구원이 구두로만 알려주고 그만둬서 혼자라 막막하기도 하고요.

하루하루가 막막하고 답답하기만 합니다.

같은 연구원으로서 정말 미안하고 죄송하지만 프로토콜좀 알려주실수는 없는지요.

알려주시면 고맙겠습니다.

zxzzzz  |  2010.07.15    
leejs1981@hanmail.net 여기로 연락주세요! protocol 보내드릴께요!!!
알arumong  |  2010.07.16   

저도 현재 endothelial cell을 형광 염색하기 위해 노력하고 있는 1인 입니다.
저는 CD31(DAKO), vWF(DAKO) 로 염색을 해봤는데..
역시나.. 논문 처럼.. 이쁜 EC lining이 나오지는 않네요...;;
저도 동일한 sample에서 Thrombomodulin염색이나 핵 염색은 매우 잘 되는데..
왜 CD31(DAKO), vWF(DAKO)은 염색이 잘 안되는 지.. 궁금할 뿐 입니다.
모델로 삼고 있는 논문 저자에게 직접 연락해서 protocol확인 까지 받았는데..
안되는 건 동일하네요..;;;
도대체.. 뭐가 문제인지... 흠...
혹시.. 연구해 보시다가 알게 되시면..
저에게도 좀 알려주세요..ㅠㅠ
arumong@hanmail.net으로 연락부탁드릴게요!!
저도 알게 되면.. 연락 드리도록 하겠습니다^^
멋진 답변 달아드리고 싶은데.. 그러지 못해 죄송하네요.ㅠㅠ

알djfuqekwlsWk  |  08.08 05:28  
안녕하세요! 정말 오래 전 글이라 답변이 달릴지도 잘 모르겠지만 저도 같은 어려움으로 너무 오랜기간 진행이 되질 않아 연락 남기게 되었습니다ㅠㅠ 혹시 조직에서 cd31 형광 염색에 성공하셨다면 조언해주실 수 있으실까요? 저도 aSMA는 확인이 잘 되는데 CD31 이 안되고 있습니다..정확히는 조직 전체적으로 염색이 되어 특정 EC lining 이 확인되지 않는 것 같아요..혹시라도 보신다면 답변 부탁드립니다!!! 정말 간절합니다..ㅠㅠ
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