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ppt 를 보고 수정합니다.
제한효소의 U (unit) 은 단위시간내에 제한효소가 자를수 있는 양을 나타냅니다. 질문에 plasmid 와 insert DNA 를 얼마나 사용했는지 나오지 않았지만 mole 수로 따졌을 때 2 : 3.5 의 비율이겠지요.
digestion 의 경우는 double digestion 을 생각했는데 Ava I 과 Kpn I 을 따로 쓴듯 하군요.
Kpn I 을 사용할 경우는 조교가 1 cut 이랬으니 5.1 kb 에서 나오는것이정상입니다.
Ava I 은 2 cut 이랬으니 HA sequence 에서 Ava I site 의 위치를 파악한 후 그 사이의 길이를 파악하시면 됩니다. 만약 HA 시퀀스안에 200번, 800 번 위치에 Ava I site 가 있다면 그 길이는 600 bp 이므로 600 bp , 4.5 kb 의 두가지 밴드가 나오겠지요.
linear form 으로 생각해본다면..
ㅡㅡㅡㅡㅡ BamH I ㅡ Kpn I ㅡㅡㅡAva ㅡㅡㅡㅡㅡ Ava I ㅡㅡㅡㅡㅡBamH I ㅡㅡㅡㅡ
. HA시작-------------------------------HA끝
이렇게 되겠지요.
vector와 insert DNA의 molar비는 66ng:106ng으로 사용했어요. 조교샘이 정해준대로 한거라...
피피티 파일에서 콜로니6번이 ligation이 된걸로 확인되네요. 자세한 설명 감사합니당.