실험 Q&A Chemical biology > Extraction/Concentration
엘피스님... 도와주세요..
레벨2 cryingnut9
제가 질문을 이상하게 해서 그런가 답변이 달릴때도 있고 없을떄도 있어서 엘피스님께 지명해서 질문드린점 먼저 양해를 구합니다^^
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제가 CHO cell(부착배양으로)을 이용하여 목적단백질(당단백질)를 만들고 있는데요 일정수준까지 세포를 혈청배지에서 배양후 적정 시점에 도달하면 무혈청배지로 교체하여 발현액을 1일~5일차 까지 회수하고 있습니다. 각 회차별 발현액 회수액은 냉장실(5도씨)에서 보관후 5일차 완료되는 시점에 농축(한외여과)->>CM컬럼을 하게 됩니다.
질문1) 각 회차별로 회수된 발현액이 농축공정이 들어가기전 냉장실에 일정기간 방치되
게 되는데 Protease에 의한 목적단백질이 냉장조건에서 분해(활성저하)될수 있
나요? (최대5일정도방치)
예로 4일차쯤에는 목적단백질의 발현량이 최대치에 도달하지만 세포는 서서히 사멸곡선을
그리게 되어 일정부분 발현액내에 Protease가 분비된다고 가정하고 있습니다.
질문2) 만약 냉장조건에서도 분해가 된다면 하루마다 바로 회수후 당일 농축->CM컬럼
공정을 진행하게 된다면 Protease에 의한 영향을 최소화 하며 수율(활성)을
높일수 있을까요???
질문3) 실 예로 1일~5일차 발현액을 냉장보관조건에서 시간별(24간격-72까지 관찰)
Protease에 의한 추이변화를 확인하기 위해 ELASA 측정해보았는데 개연성이
없이 나왔습니다.
실험디자인 오류라고 단정지었는데요....protease에 의한 영향을 확인할수 있는 좀더
정확한 분석법이 있으면 조언부탁드립니다...
p.s 지정해서 질문드린점 죄송합니다~~ 넘 답답해서 브릭에 힘을 얻고자 합니다.
아시는 만큼 부탁드려요~
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