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 전체 > Chemical biology > Extraction/Concentration
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질문 Anaerobic상태에서의 Ni-NTA를 이용한 효소 정제 질문입니다
알sys8709  | 2010.06.10 19:26
안녕하세요
효소발현을 하고있는 대학원생입니다

제가 발현하려는 효소의 N-terminal에 His-tag을 붙혀서 발현하여 Ni-NTA column을 이용하여 농축을 해보았는데요. 발현하려는 효소가 산소에 민감하게 반응하여 망가지는 터라 anaerobic glovebox에서 실험을 하였더니 전혀 정제가 되지 않았습니다.
농축하기 전의 셈플로 발현여부는 western blot을 이용하여 확인하였습니다.
신기한것은 anaerobic glovebox가 아닌 outdoor 상태에서는 정제가 잘 되는 것입니다.

균주는 BL21을 이용하였고요
정제는 큐아젠의 Ni-NTA Fast start kit을 이용하였으며,
anaerobic상태라는 것만 제외하고는 메뉴얼대로 진행하였습니다
큐아젠 한국지사에 연락해보니 anaerobic한 조건에서 농축한 실험사례는 보고된게 없어 모르겠다고 하네요

문제가 뭘까요?;;
혹시 저와 같은 경험이 있으시거나
anaerobic한 상태에서 효소 정제를 해보신 경험이 있으신분 계신가요?
도와주세요.............. ㅠ_ㅠ
#Ni-NTA
 
#expression
 
#anaerobic
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리animanga  |  2010.06.10   

purification이 안 된다는 건가요, 아니면 concentration이 안 된다는 건가요?

꽃개구리Kozmoj  |  2010.06.11   
Quagen 에서 그러던가요?
anaerobic 조건에서 정제 농축한 실험 사례가 보고된게 없다고?
거짓말 하지 말라고 하세요.

google 에서 "anaerobic protein purification ni-nta" 로 검색해 보세요.
관련 "실험", "보고" 가 수두룩 뻑뻑하게 나옵니다.

몇 개 논문 찾아 보시고, 분인의 실험방법과 뭐가 다른지 비교해 보세요.

그리고,
윗 분이 질문하신 것 처럼 "정제"를 말씀하시는 것인지 "농축"을 말씀하시는 것인지 모호하네요.
마치 "농축"이라고 하셨는데, "정제"를 의미하는 듯한 느낌도 드네요.
알sys8709  |  2010.06.11   
답변해 주셔서 감사합니다 ^_^
셈플을 정제하면서 농축도 되는지라 제가 말을 애메하게 했네요 죄송합니다;
큐아젠에 속았군요;; 귀찮아서 대충 '그런사례가 없어서 모르겠다'고 했나 봅니다.

말씀해주신 대로 찾아보니 대부분 assay만 Anaerobic에서 하고 정제는 aerobic 이네요 ㅠ
다시 잘 찾아보겠습니다
감사합니다
개구리animanga  |  2010.06.11   

윗분이 알려주신대로 구글에서 치면 첫 페이지에 바로 관련 내용이 나오는데요..;;

http://www.pnas.org/content/103/26/9779.full

anaerobic chambaer에서의 his-tag purification입니다.
참조하세요

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