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질문 pBBR122_broad host range vector cloning 실험 하신분...
알박주용  |  2010.06.10 18:24
첨부파일 파일첨부: pBBR122pBHR1_설명서.pdf (677 KB)

안녕하세요.

제가 이번에 받아서 실험을 진행해야할 벡터가 바로... pBBR122 입니다.

다름 아니라. 제가 공대다 보니까 생물쪽에 많이 약한대요...

그 동안 cloning 실험을 pET-21a 로 해봐서... 새로운 벡터 시스템에 대해 어떻게 적응할지 몰라서 이렇게 도움을 요청합니다.

질문사항으로는...

1. 벡터 맵에는 특별히 따로 promoter가 없는것 같은데... 그렇다면 제가 따로 넣어줘야 하는건가요? 그리고 혹시 이 때 저는 광합성 균주 (Rhodobacter sphaeroides)에서 발현을 할 예정인데요. 거기에 맞는 promoter를 해야하는건가요? 아니면 따로 벡터에 맞는 프로모터가 있는건가요?

2. XL1-blue 라는 호스트(아마도 E.coli) 에 있던 pBBR122를 추출했는데...
  같이 추출한 pET-21a에 클로닝된 플라스미드 양보다 반절 정도로 낮은 농도로 추출되었는데
  이 벡터의 경우는 low copy 인가요? high copy 벡터라고 해야는지요?
  홀직히 low 와 high copy 벡터라는 개념을 제가 잘 모르겠습니다.
  따로 설명서에는 내용이 적혀있지 않은것 같습니다.

3. pBBR122는 broad host range vecter 라고 써있는데요.. 그렇다면 cloning 후의 타겟유전자의 발현에는 아무런 이상없이 잘 발현되어 working하는지요?
혹시 cloning 했는데.. 발현안하면.. 말짱꽝일 것 같아서..

질문이 조금 많은 것 같은데요..

혹시 벡터에 대한 내용은 첨부파일에 함께 올리겠습니다.
실험해보신분과 아시고 계시는 분.... 부탁드립니다.

                   박주용올림.

3.


 

#pBBR122
 
#broad host range
 
#cloning
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