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 전체 > Chemical biology > Extraction/Concentration
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질문 refolding 후 protein degradation 이유는 뭘까요
궁금이  | 2010.04.12 18:42
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
his tag fusion protein을 정제하고 있는데요 8M urea를 사용하여 denaturation 시켰습니다.
그런 후 정제를 하였구요... SDS-PAGE 상에서 많은 양의 protein이 정제 된것을 확인하였습니다.
그래서 투석막을 통해서 dialysis를 시켰습니다. aggregation 되지도 않았구요 투석이 잘됐다고 생각을 했는데  농축을 시킨 후 다시 SDS-PAGE를 한 결과 정제되었던 protein이 하나두 없었습니다. degradation으로 밖에는 결론이 안나오는데요....
degradation이 일어나는 이유는 뭔가요? 또 degradation을 막으려면 어떻게 해야하나요
(dialysis와 농축은 4도씨에서 진행하였습니다.)



더불어 한가지 더 물어보고 싶은데요
cell을 8M urea로 resuspension 한 후 sonication 하고 centrifugation 하여 supernatant만 모았습니다. 당장 정제를 할 수 없는 상황이라면 몇도에서 얼마간 보관할 수 있나요/.?
#refolding
 
#degradation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리TX  |  2010.04.13   
Degradation을 막는 방법으로는, dialysis 할때 protease inhibitor를 사용하는 겁니다..

Denature 시킨 상태에서도 그리 오랫동안 보관은 되지 않는 것 같습니다. (제 경험상)
물론 샘플마다 차이가 나겠지만, 대략 4도시 보관시 1주일 정도..?? 참고만 하시길..

His-tag인 경우 dialysis 보다는 on-column refolding 방법을 적극 추천합니다.


궁금이  |  2010.04.13    
잘들었습니다.
그런데 한가지 더 물어볼게 있는데요...
protein inhibitor를 넣으라고 하셨잖아요...
근데...정제하고 있는 것이 proteinase입니다.
이럴 경우 inhibitor를 사용하면....활성을 잃게 되는거 아닌가요???
이끼  |  2010.05.10    

8M urea는 4도씨에서 결정이 생겨 저도 잘 안됬던 기억이...

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