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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 죽은 cell이...
cell  |  2003.11.12 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
cell culture 초보입니다.
PBS로 2번 washing 후 현미경으로 관찰을 하면
cell이 아닌 작고 동그란 죽은 cell이 많이 보입니다.
1*PBS를 사용하구요
25T에 키우고 있는데요, 3ml 넣고 washing 하거든요
washing을 세번 해두 같구요,
PBS 양을 많이 해도 변화가 없어요
PBS를 넣고, 상하좌우로 많이 흔들어줘도 떨어지지 않습니다.
어떻게 해야 할지...
이대로 stock을 하면 당연히 좋지 않겠죠?

cell culture 고수님들의 짧은 답변 부탁드립니다.
이 겨울이 무지 춥군요...
#cell culture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
이규철  |  2003.11.12    
글들 잘 읽었습니다. 답변하신 분의 내용과 질문하신 내용들을 보니까 adhesion cell인듯 합니다.

일단 cell split을 하는 방법은 제 경험으로 미루어 세포의 생사에 크게 영향을 주지 않습니다. 즉 PBS washing이 한번이냐 두번이냐, 세포를 떼어낸 후 원심분리를 하여 media washing or PBS washing을 하느냐 아니면, 바로 media로 분주를 하느냐 등등.

일단 세포 배양한 후 세포 분주를 하기전에 세포의 상태가 건강하였는가가 중요하구요, 세포가 건강한 상태임에도 불구하고 PBS로 세척후 Trypsin-EDTA를 처리하여 주어도 세포가 잘 떨어지지 않는다면, 일단 세포배양기 (37도, 5% CO2)에 1분정도 넣었다가 배양용기를 탁탁 쳐서 세포를 떼어 보세요.

또한 세포를 단지 관찰만 하시고 죽었다 판단마시고, tryphan-blue exclusion assay를 하여 정확한 cell counting을 하여 세포의 생존율을 조사해보세요.

그리고 세포 상태가 안좋아지는 이유는 아시겠지만, 적당한 분주비율을 유지 못하여 세포수가 너무 적다거나, 세포수가 많은 상태에서 너무 오래 배양하였다거나 하는 경우 등이 있습니다. 잘 떨어지던 세포가 잘 안떨어지는 경우는 오래 배양한 경우 그런 경우가 흔합니다.

모쪼록 좋은 조건 잡으셔서 건강한 세포 상태 유지시키시고, 좋은 실험 결과 얻으세요.
kks  |  2003.11.12    
아 참 계대하구 나면 원래 동그래 보여요 얼마간 cell들이 attach되도록 놔두어야 제 모습을 찾지요 바로 계대하구 모양이 바뀌었다구 다 죽은게 아니예요
cell  |  2003.11.12    
단지 media만 갈아주고 현미경으로 관찰을 했거든요
attach가 잘 되는 cell이구요
mail 주소 올려주시면 안 될까요?
kks  |  2003.11.12    

subculture를 말씀하는거 같은데 PBS로 두번 washing 하면 되고 잘 흔들어서 죽은 cell들을 washing 한 후(attatch 되는 cell 인가?) trypsine-EDTA 처리하여 떨군 후 new-tube에 넣고 centrifuge(2000rpm 5min)하고 new mediafh 1회 세척(해도 되고 안해도 되고)한 후 알맞게 깔아 주면 되요.
계대 후 하루 정도 기른 후 현미경으로 확인 해서 죽은 cell이 많이 보이면 잘 흔들어서 media를 갈아요 그러면 subculture 후 죽은 cell을 처리할 수 있어요
만약에 그래도 자꾸 죽으면 그건 cell이 건강하지 못하거나 아님(혹시 transfection 한건 아니죠? : transfection하면 계속 죽은 cell이 보일 수 있음) 오염 됐을 경우를 들 수 있겠네요 그것두 아님 media가 잘 못 되었을 수도......
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