> Native gel electrophoresis 에 대해 좋은 의견과 충고 부탁드립니다.
> Ion exchange 후에 SDS-PAGE 에서 단백질 밴드가 선명하게 잘 보였는데...
> 원하는 단백질의 활성을 측정할려고 Native electrophoresis 를 수행하였습니다.

--> 어떤 활성을 측정하시려고 하시는데 굳이 native gel 을 거셔야 하나요...?
gel 상에서 활성을 꼭 확인하셔야 하나요...?
아니면, 다른 실험적 확인을 위해 native gel 을 거셨나요...?


>그런데 SDS-PAGE에서는 잘 보였던 밴드가 Native 에서는 잘 보이지 않아요. 무슨 이유일까요?
> 물론 농도는 똑같이 했구요.
> 모든 밴드가 잘 안보이는게 아니고.....제가 원하는 밴드는 선명하지 않고..하지만 다른 밴드는 잘 보이는것도 있습니다.

--> 무슨 의미인지 언뜻 이해가 가질 않는군요...
일단 정제를 하셔서 SDS_PAGE 를 수행하셨다면 native gel 에서 다른 밴드가
보이면 안되는 것이구요....

완전히 정제가 안 된 상태라면...
님이 원하는 밴드가 어떤 것인지 확인하실수가 없을 텐데요...
말하자면, SDS-PAGE 에서 50 kda 짜리 단백질이었다고 하더라도,
native 에서 그렇지는 않은 것이니까요...
즉, 50 kda 의 dimer protein 이라면...
SDS-PAGE 에서는 그대로 50 kda 가 나오게 되나,
Native gel 에서는 100 kda 로 나타나게 됩니다....
그 중에서 만약 dimer 를 이루지 못한 것이 있다면...
native gel 에서는 밴드가 50 과 100 모두에서 나오게도 되지요....

또한 size 가 동일한 contaminant 단백질이 만약 섞여 있었다면
SDS-PAGe 에서는 확인이 되지 않으나, native gel 에서는 확인이 됩니다...
Native gel 에서는 size 에 의해서만 단백질이 이동하는 것이 아니고,
구조적 특징, 그리고 net charge 에 따라서도 다르게 움직이므로,
명확히 확인하기가 쉽지 않습니다....

마지막으로,
Native gel 에서 명확한 band pattern 을 확인하시길 원한다면...
가능한 낮은 volt 에서 오랜 시간 running 하시는 것이 좋으며,
cold room 에서 over night 정도를 권해드립니다....


> 좋은 의견 부탁드립니다.
> 그리고 혹시나 SDS-PAGE 후에 SDS를 제거한후에 활성을 측정할수도 있나요?

--> 가능합니다...
님의 단백질이 refolding 이 잘되는 단백질 계열이라면...
running 후 중화 용액 등에서 SDS 를 완전히 제거하고 나서 실험하실 수도
있습니다....


> 또 SDS-PAGE 후에 SDS를 제거하고 원하는 밴드를 elution 할수있는 kit가 있나요?

--> Elution 을 할 수 있는 기계를 amersham phamarcia 등에서 판매하고 있습니다...
그러나, 매우 고가이므로 그냥 손으로 하시길 권해드립니다...

그 방법은 제 많은 노력이 들어간 노하우이므로....^^;
메일 주시면 답장해드리겠습니다...



그럼, 좋은 결과 얻으시길....