실험 Q&A Cell Biology > Transfection
Cell에서 분리해낸 각 fraction에서 존재하는 Ca2+을 측정하는 방법
초보연구자 (비회원)
저는 연구하는 유전자와 칼슘 binding 도메인을 제거시킨 무턴트 타입을 Transfection 시킨후 cell에 Ca2+을 넣어준 후 sampling하여 각 Fraction분리하여 상대적인 Ca2+의 존재량을 비교하는 실험을 하려고 합니다. 분리하고자하는 각 Fraction은 membrane, Cytosolic protein, ER, Neuclear fraction입니다. Ca2+은 45 Ca2+ radioisotope을 이용하려고 합니다.
현재 ER fraction을 보다 간편하고 효율적으로 분리해낼 Kit 선정을 두고 고민중에 있습니다. 일반 Kit들을 보아하니 cell에서 분리해낼 경우 상당히 많은 cell수가 필요로 하던데요.(ex. SIGMA ER0100- > hera cell 2x10^8개를 기준입니다.)
제가 Transfection한 cell을 사용하여 분리해내야하는 만큼 너무 많은 수는 문제가 될것 같습니다.
그리고 효과적으로 분리해낸 후 Ca2+측정은 어떻게 해야할지 고민입니다.
beta-counter로 측정을 하려고 생각중인데 괜찮을지 고민됩니다.
고수 여러분의 자세한 코멘트 및 Kit 추천 부탁드립니다.
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