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질문 식물잎Genomic DNA추출 및 plasmid DNA 추출실험
스윗하트  | 2010.03.16 11:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
식물체잎에서 Genomic DNA추출(추출키트 사용)하여 전기영동으로 밴드를 확인하고자 합니다. 또한 bacteria에서 plasmid DNA추출하여 전기영동하여 밴드를 확인하고자 하는데,
(정확한 사이즈를 알고자 하는것보다는 전기영동 방법 및 식물과 박테리아의 DNA추출 및 대략적인 사이즈를 확인하고자 하는것, 고등학교실험이라 정확치 않아도 상관없어요..)

1. 사이즈마커를 어떤것을 사용할지 모르겠구요,

2. 또한 bacteria를 어떤것을 사용해야 할지 모르곘어요..
업체에서 구입하여 사용하여야 하는것인지 아님 아무거나 사용해도 되는것인지요..)

3. loading 시간은 얼마나 해야 하는지도 모르겠어요..

전체적인 실험에 대한 주의사항이나 의질문에 대한 답변 부탁드립니다.
#0804
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2010.03.16   
식물에서 gDNA추출하면 대략 20-200kb 크기로 조각납니다.
험하게 다르면 gDNA의 크기는 줄어들고 부드럽게 하면 큰 조각을 얻을 수 있습니다.
gDNA를 agarose gel에서 보려면 gel을 0.5% 정도로 하면 좋지만 gel % 가 줄어들면 약하기 때문에 취급에 주의해야합니다.
20-200kb 크기 gDNA는 일반적인 agarose gel에서 이상적으로 분리되지 않고 그냥 덩어리져서 보이므로 크기를 정확히 보는것은 불가는하며 의미가 없습니다.
마커는 lambda DNA/HindIII cut을 사용하면 젤 큰 bamd가 23kb 정도 됩니다.
이걸 사용하면 될것 같네요.
45kb lambda DNA concatemer(45, 90, 135kb, ...) 마커도 사용할 수 있지만 일반적인 agarose gel에서는 사용의 의미가 없습니다. 분리가 안되나까요.

세균의 플라스미드는 대장균의 것을 사용하면 됩니다.
주위에 대학실험실이나 연구소에 가실 수 있으면 E. coli 에 pUC19나 그 밖에 알려진 plasmid가 들어있는 것을 좀 달라고 하면 됩니다.
pUC19는 크기는 작으나 cell 내의 copy 수가 많아서 정제가 편합니다.

전체적인 실험 내용은 주위의 대학실험실에가셔서 함 상의를 하는것이 좋겠습니다.
실험은 간단하나 준비해야할것이 많습니다.
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