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 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
조회 3785  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 DNA fragmentation 확인 실험 - 왜 안 되죠??
DNA  | 2005.12.14 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

세포 내 apoptosis를 일으킬 것으로 예상되는 물질을 처리한 후

genomic DNA를 분리하여 DNA fragmentation 정도를 전기영동을 통해 알아보는데,

전혀 처리한 물질에 대한 영향이 나타나지 않네요..

positive control로 staurosporin(?)을 사용하였는데

이 경우에도 전혀 DNA 절단이 보이지 않아요.

control에 비해 약간 끌리는 경향은 있는데, 이 정도로는 아닌 거 같구..

뭐가 문제일까요??

혹시 DNA fragmentation을 볼 때에는 genomic DNA를 뽑는 것과 다른 방식으로

DNA를 뽑아야 하는 건가요??

처음하는건데.. 흑.. 모르겠어요..

답변 부탁드려요~~ 도와주세요..^^
#DNA fragmentation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
Choi.  |  2005.12.14    
DNA fragmentation assay 할때 DNA pre. 방법은 따로 있습니다..
일반 genomic DNA prep. 과의 원리는 비슷하긴 한데 저는 방법을 달리 해서 실험 하였습니다.
fagmentation을 유도하는 것은 쉬울지 몰라도, DNA fragmentation 후 gel 상에서 fragmentation 을 확인하는 것이 결코 쉬운 일이 아니듯이 sample prep. 과정 또한 다르다고 봅니다.

도움이 될것 같으면 메일 주세요. 도움이 될런지 모르지만 나름대로 정성이 들어간protocol 정도는 드릴 수 있을 것 같습니다.
김선오  |  2005.12.14    
gDNA를 뽑는 방법은 다른 방법과 다른점은 없습니다.
단지 님께서 처리하신 농도와 시간이 적절치 않아서 apoptosis가 아직 일어나지
않았나 의심이 갑니다. 그 조건을 찾는게 더 시급하다고 봅니다.
비싼 스타리오스포린?보다 우선 H2O2를 사용해서
님께서 gDNA 뽑는 단계가 이상이 없음을 확인을 해 보시면 어떨까요
그리고 몇%의 젤에서 달렸는지요? 너무 % 낮으면 잘 안보입니다.

DNA  |  2005.12.14    
농도와 시간은 이전에 저희 실험실의 선배가 했던 조건으로 처리하였습니다.
농도는 시료마다 약 50~100 ng/ml로 처리했고, positive control은 100 ng/ml을
처리하였습니다. 그리고 시간은 18시간과 24시간을 했구요.
그런데 저희 선배는 FACS를 이용해서 실험을 하였는데, 그 때에는 결과가 나왔습니다.
FACS와 직접 gDNA를 분리하여 확인하는 것과는 차이가 있는지요?
그리고 gel은 1.5% agarose gel을 사용하였습니다.
제가 실험한 상황은 위와 같습니다.
혹시 더 조언해 주실 내용이 있으시면 해 주세요~^^


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