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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Western 할때 단백질을 VEGF를 쓰시는 분 설명 부탁드립니다.
western 왕 초보  | 2005.12.23 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
지금 고분자공학을 전공하는 대학원생인데요 이번에 western을 하게 되었습니다. 단백질은 VEGF를 쓰고 있는데요. VEGF를 가지고 SDS page 로 했는데 띠가 나오지 않아서 western을 하는데요 이쪽으로 전공한게 아니라서 정말 하나도 모르겠습니다.
VEGF를 가지고 Western을 하신 분이 있으시면 자세한 답변 부탁 드리겠습니다.*^^*
#western
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jz  |  2005.12.23    
primary ab.와 secondary ab.를 어떤걸 사용하셨는지 궁급하군요.
western 왕 초보  |  2005.12.23    
primary ab는 rabbitimmunoaffinity purified lgG를 썼구요 secondary ab는 Anti-Rabbit lgG HRP를 썼습니다.
jz  |  2005.12.23    
target protein: VEGF ?

primary ab.: rabbit immunoaffinity purified lgG

secondary ab.: anti-rabbit IgG HRP

란 말씀이죠?
글만 봐선 사용하신 실험목적과 material에 대해 파악이 안됩니다만,

primary가 VEGF의 IgG를 detection 하는 것 같은데요.
anti VEGF가아닌걸 보면,,,
두 가지가 specific하게 binding하는 건지 모르겠군요.
그리고 species도 살펴보시고요.

전성규  |  2005.12.23    
말씀하신 내용만 가지고는 정확히 어떤 내용인지 모르겠습니다.


1. 사용하신 VEGF 는 직접 만드신 건가요 아니면 구입하신 건가요...?

2. SDS-PAGE 로 확인이 안된다고 하셨는데, 한 lane 에 load 한 양이 얼마였나요...?

3. Western Blot 이 안된다는건 뭐 익숙하지 않아도 그럴 수 있으니 좀 익숙해지시면

나올겁니다 (역시 이때도 얼마를 loading 하셨나요..?)



--> 이메일로 주시면 더 빨리 대답해드릴 수 있을거 같네요



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