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낮은 volt로 천천히 runing 하세요.
계속 그럼 젤을 사서 쓰세요
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biodean
(비회원)
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01.08.31 00:00
SDS-PAGE시 똑바로 내려가지 않는 이유는 앞분들이 말씀을 잘해 주신거 같고요.... running시에 buffer의 온도를 체크해 보시는것도 도움이 될것 같습니다. 온도가 너무 많이 올라가면 smiling현상이 나타나거든요....그럼.....good luck...!!
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젊은마빡
(비회원)
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01.08.31 00:00
1. 첫번째 경우로서 혹시 빈칸을 두고 전기영동을 하신 것이 아닌지 모르겠습니다. 제 경우에서는 그랬으니까요... comb를 빼고 난 후 생기는 홈(well;?)에 loading 하실때 sample이 몇개 안된다고 sample만 넣지 마시고 빈칸에도 같이 buffer와 loading dye 를 넣어 완전히 홈을 채우고 전기영동 해보세요. 빈칸이 있으면 band가 휘더라구요.
2. 두번째 경우로 sep. gel 만드실 때 수평을 유지하지 않았을 지도 모르겠군요. 하지만 이 경우는 아닐 것 같은데... 제 경우에서는 sep gel 을 넣고 약 1 ml의 증류수를 천천히 넣어서 편평하게 만들었습니다. 섞이지는 않구요 (대부분의 실험하시는 분들이 이렇게 하시리라 생각됩니다.) 완전히 굳으면 증류수만 따라내고 paper로 내면을 살짝 닦고 stack. gel을 넣어 굳히면 편평하게 되리라 생각됩니다.
3. 세번째로 바닥 부분의 백금선을 건드리시지는 않았는지요. 임의로 건드려서 휘었거나 제 위치가 아닌 경우에 band가 휩니다.
4. bric에서 답변 올린 것 같이 loading 양을 일정하게 맞추세요. 괜히 한 sample의 protein 농도가 적다고 다른것에 비해 2-3 배 부피를 넣게 되면 문제가 생기지요.
실험 잘 하세요...^^
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bric
(비회원)
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01.08.31 00:00
안녕하세요. 생물학정보센터입니다.
일단 사용하시는 전체적인 프로토콜에 대해 모르는 상태고 정확한 문제점이 무엇인지
몰라서 그에 대한 답변도 정확하지 않을수 있습니다.
다음사항을 한번 체크해 보시는게 어떨지?...
1) 각 sample의 loading양이 비슷한가?
2) 사용하는 buffer는 fresh한가?
3) buffer 또는 gel을 만들때 SDS를 빠뜨린건 아닌가?
4) 평평한 곳에서 실험을 수행하는가? (gel 굳힐때나, running시)
5) 전압은 일정하게 걸리는가?
도움이 되셨길 바랍니다.