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질문 간 적출 시 관류하고 포르말린 고정에 관해서요 제발 급합니다.
논문 실험 중이네요  | 2009.11.06 16:06
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
실험 관련 질문 드려요

이제 간 독성 rat 실험을 하는데요

담주에 쥐를 부검해야 하는데 제가 간 독성 쪽으로 쥐 실험은 처음이라

간 문맥에서 관류를 해야하는데 어케하는지를 잘 몰라서요

그리고 간 형태를 관찰하려고 하는데요 다른 과정은 다른 기관에 맡기로 했는데 포르말린

고정은 햐서 맡겨야 해서요

일반적으로 포르말린에 고정한다고 하면은 10% 포르말린에 간 조직을 담궈두면은 돼는

건가요 아니면 간 조직으로까지 침투 시키기 위해 인젝션 시켜야 하는지요 아니면

다른 방법이 있는지요

저는 보통 지방이나 근육쪽으로만 쥐 실험을 해서 형태적으로 보고 관류하고 이런거는 첨이라

잘 모르겠습니다

빠른 답변과 함께 자세히 알려주세요
#간
 
#포르말린 고정
 
#간 문맥 관류
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
백민우  |  2009.11.06    
전에 마우스 뇌를 관찰할때 쓰던 방법인데 이게 동일하게 적용되는지는 잘 모르겠습니다.
뇌를 꺼내서 고정시키기 전에 전처리를 하는건데 먼저 복강쪽을 해부해서 간문맥으로 흐르는 혈관을 절게해서 출혈을 일으킵니다. 거의 동시에 실린지를 이용하여 고정액(4% paraformaldehyde solution)을 심장을 통해 주입하면 혈관을 통해 고정액이 흐르면서 일차 고정을 한 후 뇌를 해부해서 다시 고정액에 담궈뒀던 기억이 납니다. 아마 간도 마찬가지로 전 처리를 하면 고정이 될것 같은데 그렇게 한것과 그냥 간을 떼어 고정액에 담근것과의 차이는 잘 모르겠습니다.
개구리쥐잡이  |  2009.11.10   
굳이 관류 안하셔도 될듯한데... 그래도 궁금해하시니 답변을...
간 문맥으로 관류하는것이 그닥 쉬운편은 아닙니다. 안해보셨으면 어려우실수도 있습니다
우선 18G catheter 를 사용할줄 아시면 편합니다 없으시면 같은 18G needle이나 22G needle 을 사용하셔도 됩니다만.. 쥐 크기에 따라 사이즈는 좋으실데로...하실때 마스크는 착용하시는것이 좋을듯..
관류하실때 쥐는 죽이면 안됩니다. 마취를 하셔야 됩니다
마취상태에서 흉곽을 양 옆으로 절개하여 심장을 보이게 합니다. 가운데로 절개하면 절대 안됩니다..ㅋㅋ 그뒤 복부를 절개하여 문맥을 확실하게 드러내신다음 needle 이나 catheter 를 문맥에 삽관하고 고정액이 든 주사기를 연결하세요 단. needle 을 통해서 혈액이 흘러나오는것을 확인해야 됩니다.( needle 을 삽관하기전에 문맥에 실을 걸어서 삽관 후 needle 을 꽉 묶어주시면 편합니다) 공기 들어가면 안좋으니까요. 주사기 연결하시고 우선 복부 하대정맥을 절단하여 방혈을 하세요 (이건 꼭 필요한 과정은 아닙니다만..) 웬만히 방혈되었다 싶으면 forcep 으로 하대정맥을 결찰한다음 고정액을 천천히 주사하세요 압력이 너무 크면 안됩니다 주사기는 적당한 것으로 쓰세요.  조직들이 좀 부풀기 시작하면 우심방 혹은 상대정맥을  절개하세요  그러면 혈액이 고정액과 섞여서 우심방을 통해 빠져나갑니다 동시에 조직들은 고정이 되죠.
심장을 통해서 관류해도 되긴 합니다만 그러면 Rat 의경우 많은양의 고정액과 시간이 소요됩니다
관류하기가 어렵거나 해야될 특별한 이유가 없으시다면 PBS 에 빨리washing 하신 후에 고정액에 그냥 담가두셔도 됩니다. 고정액은 10% formalin 이나 buffered neutral formalin 을 쓰시면 무난합니다. 앞 분 말씀대로 만들기가 좀 번거롭지만 4%paraform aldehyde 쓰셔도 됩니다.
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