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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Bax를 웨스턴 했는데..이상합니다..
올챙이학생  | 2009.11.05 12:44
첨부파일 파일첨부: 4.jpg (115 KB)
이미지 첨부파일
웨스턴으로 Bax를 확인하려고 하는데..
band가 자꾸 두개가 나옵니다.
웨스턴 data를 첨부하였는데, 세차례 반복해서 확인하였습니다.
data에서 보면 아랫부분의 band가 Bax 같습니다.
그런데 26kDa 위에 band가 항상 히는데 그것이 어떤 것인지 너무 궁금합니다.

Bax는 santa cruz 제품이고 polyclonal Ab이며, Bax의 size는 23kDa입니다.

poly라서 band가 뜨는건 이해하겠는데, 그것도 너무 선명하게 항상 나오니까
좀 이상하네요. 거기다 4개의 cell 중에서 하나만

ECL로 detection할때 처음에는 밑에 band만 진하게 나왔다가
detection 시간이 5분 정도되면 위에 band가 진하게 나옵니다.

제가 여기서 궁금한것은..
첫째, 위에 뜨는 band가 어떤 것인지 알 수 있는 방법이 있는지.
둘째, band도 저렇게 진하게 힐 수 있는 것인지.
셋째, Bax와 Bcl-2는 역관계라서, Bax가 많으면 Bcl-2는 감소하고 Bax가 적으면 Bcl-2가
        많아지는 것으로 알고 있습니다. data에서 보면 밑에 밴드에서 진하게 나오면 위에 밴드
        가 감소해서 나오는 것을 볼 수 있습니다. 따라서 혹시 Bcl-2가 히는 것이 아닌지요?
        Bcl-2는 28kDa이라서 위치만 봤을 때는 비슷한 듯 합니다. 따라서 Bax Ab를 사용했는데,
        Bcl-2 같은 것이 힐 수도 있는 것나요? (Bcl-2 Ab로 WB를 해봤는데, 잘 안나옴니다.)



#Bax
 
#western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리propadrum  |  2009.11.05   
4개의 sample이 각각 다른cell line인건가요?
저정도는 non-specific라고 봐야 할거 같긴한데,,
위쪽의 밴드의 양이 각각 다르네요
(다른 cell line이라고 하면,, non-specific binding이 각각 다를 수도 있겠지만요)

저 non-specific band를 identification하는 건 쉽지는 않을 것 같네요,,

전 cell signaling 것을 사용했었는데, pattern이 완전 같진 않지만,,
얘도 위쪽으로 non-specific band가 있긴하네요,,^^;

암튼,, 저도 잘 모르겠네요 ㅠㅠ

올챙이학생  |  2009.11.05   

cell은 모두 brain tumor(glioma) cell이구요.
1번 cell은 U373
2번 cell은 U373 cell에 내성을 유도한 cell

3번 cell은 U251
4번 cell은 U251 cell에 내성을 유도한 cell입니다.

여기서 저는 내성을 유도한 cell에서 Bax가 적을 것이라고 예상하고 했는데,
오히려 Bax가 많았습니다. 그런데 이상하게 그 위의 band가 감소하더라구요

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