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질문 chloramphenicol amplification 해보신분께 여쭤봅니다
prep  |  2009.09.11 10:21
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
일반적인 plasmid처럼 해보면 prep이 되지 않는 plasmid가 있습니다

low copy라고는 하는데요

이런경우 chloramphenicol 을 사용하여 prep을 해보신분 계시면

경험담 부탁드립니다
#prep
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리봄비  |  2009.09.11   

chloramphenicol을 사용하는 이유는

대장균을 배양할 때 chloramphenicol을 낮은 농도로 투여하면

copy 수를 늘려주는 효과가 있기 때문인데요

chloramphenicol을 써도 mini prep으로는 한계가 있기 때문에

저같은 경우는 midi prep을 사용했을 때  잘 나왔습니다.

대왕개구리강시  |  2009.09.11   
chloramphenicol(CM) 로 증폭되는 플라스미드가 있고 그렇지 않는 plasmid가 있습니다.
CM은 ColEI (pMB1) 같은 plasmid의 증폭에 사용합니다.
ColEI ori의 복제 과정중에서 copy 수를 조절하는데 반드시 필요한 단백질 하나가 CM에 의해서 생산이 중지되면 복제 조절이 안되서 copy수가 증가하는것입니다.
ColEI과 유사한 복제조절을 하는 plasmid에만 CM에 의한 증폭이 일어납니다.
또한 cell이 왕성하게 분열하는 중에만 증폭이 일어나구요.
plasmid에 CM 마커가 있으면 CM대신에 spectinomycin을 대신 사용해야 증폭이 일어납니다.
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