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BioLab 박성순 교수
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Q. Horseradish Peroxidase 활성 test
Horseradish Peroxidase 용액의 효소 활성을 확인하고싶습니다. 혹시 Bradford protein assay를 사용해도 괜찮을까요?    
회원작성글 qlzj  |  05.23
Q. 바이러스 recombination 과정 질문
바이러스를 매개로 하여 특정 dna 를 전달하게 하기 위해 bj5183 내 viral shuttle vector 에 linearized dna 를 transformation 시킨 후 제한효소로 recombination 됨을 확인한후 해당 dna 를 dh5alpha에 다시 넣어 dna 를 확보하고 있습니다 이전에도 비슷한 질문을 드린거 같은데 이번에는 확실히 recombination 된 colony 임을 확인하고 transformation 했음에도 recombination 되기전의 band 가 확인되네요. Dh5alpha 에 tf 된 colony 의 dna 는 12개 정도 확인해봤는데 모두다 결과는 같습니다 왜 이런현상이 일어나는지 궁금하고 바이러스 셔틀 백터로 바이러스를 추출해보신 분들의 의견을 묻습니다
회원작성글 오미자랩  |  05.23
Q. 카보닐기 GC-MS 분석법 관련
안녕하세요! 저희 실험실에서 IPA (이소프로필알콜) 용매 기반의 샘플을 GC-MS를 이용해 분석하고자 합니다. 타겟 물질은 Butyraldehyde 와 Crotonaldehyde 와 같은 카보닐기를 분석하고자 합니다. 이때 DNPH 치환을 통해 GC-MS를 분석하는 것으로 알고 있습니다. 구체적인 실험방법이 있는 참고문헌들 추천 부탁드리겠습니다.
회원작성글 도시돼지  |  05.23
Q. xenograft mouse model을 제작을 해주는 회사를 찾고 있습니다.
 실험실에서 xenogrft model을 이용하여 연구하려고 계획중입니다. 현재 가지고 있는 H1299 WT, 특정 protein이 KO된 cell을 이용해 xenograft mouse model을 제작을 맡기고 싶습니다.  그리고, xenograft mouse로 원하는 drug를 지속적으로 처리하면서 tumor volume 측정이나 tissue를 이용한 여러 실험을 맡길 수 있는 회사나 동물실험센터가 있는지, 알고 싶습니다.  
회원작성글 K562  |  05.23
Q. trouble shooting 관련 질문드립니다!
comp.cell 제작 후 transformation 까지 진행하여 spreading을 한 후 overnight 후 colony 가 뜨기까지를 기다렸는데 배지에 뜨는게 없더라고요. OD가 0.5였던 e.coli로 시작했지만 1개라도 뜰줄 알았는데 trouble shooting을 진행시 어떻게 해야될까 라는 질문을 받게 되었습니다. 이럴때 어디서 부터 수정을 해야되는게 맞는건지 알수 있을까요?
회원작성글 생명학도  |  05.23
Q. Phage display 관련 질문입니다. 첨부파일
안녕하세요, 이번에 파지디스플레이를 처음 도전하게된 연구원입니다. Ph.D Phage Display Libraries kit의 Ph.D-12 peptide libraries와 E.coli 는 ER2738을 사용하고 있습니다. 1st round의 output titer, input titer 까지는 LB/IPTG/X-gal plate에 blue colony들만 보여서, 1st round amplified phage 1 x 10^11/ml 로 2nd round 진행하였습니다.  output titer는 10^-2 plate 에서 blue colony만 보였고, input titer는 10^-8에서 아래 사진과 같이 비어있는?? colorless plaque 가 blue colony 보다 많이 생성된 결과를 얻었습니다.. contamination이 된걸까요?? phage display시 유의사항 있으면 말씀부탁드리겠습니다.. amplified phage를 TBS로 suspension 시키는데, input 도말시 phage 대신 TBS로 넣고 해보았지만 오염이 발생하지 않은 깨끗한 plate여서 버퍼엔 문제없는것같았습니다..    조언부탁드립니다..!감사합니다 ㅠㅠ
회원작성글 앗  |  05.23
Q. glutamax 얼마나 넣어야하는지 모르겠어요ㅠ
어떤 논문에서 배양 배지 조건에 2% glutamax라고 써있는데, glutamax가 보통 100x더라고요 그냥 100x 농도로 2% 맞추면 되는지 아니면 1x로 희석한 glutamax를 2% 넣으라는 것인지 모르겠어요ㅠ
회원작성글 별헤는밥  |  05.23
Q. western blot antibody
학교에서 알츠하이머 관련 실험을 하는데   western blot이용해서 실험을 진행합니다.   여기서 궁금증은 저희가 알츠하이머가 인산화된 단백질에 의해 발병된다 라는 가설을 가지고 실험을 진행하는데   antibody가 인산화 된 단백질을 targeting 하는 방법(원리)를 모르겠습니다.   아시는분은 많은 의견 남겨주세요.
회원작성글 아아아아아우  |  05.23
Q. fEPSP slope 그래프 해석 첨부파일
제목 그대로 사진에 냐와있는 fEPSP slope해석을 어떻게 해야 하나요? fEPSP와 fEPSP slope이 무엇인지 잘 이해가 되지 않습니다
회원작성글 haniy  |  05.23
Q. IP후에 Westernblot을 하는 이유가 있을까요?
면역침강법 후에 침강물을 이용해서 western blot을 하는 구체적인 이유가 궁금합니다
회원작성글 숨썬  |  05.23
Q. 검량선 직선 안나올 때 첨부파일
흡광도 측정 실험에서 농도가 16 8 4 2 1 인 튜브 중 16 8 1 농도의 튜브만 흡광도를 측정하였습니다. 이 때 나온 값을 통해 검량선을 작성하는데 직선으로 나오지 않고 첨부 사진처럼 나옵니다.  질문 1. 사진 중 어떤 그래프를 사용해야 하나요? 질문 2. 농도가 2와 8일 때의 흡광도를 구하려면 식은 무엇을 사용하여야 할까요?
회원작성글 파고  |  05.22
Q. pGEM-T Easy Vector로 expression가능 할까요?
안녕하세요!   원래는 pET22에 insert를 집어넣고 BL21(DE3)에 TF하여 발현시켰는데   물론 T-vector 가 클로닝 벡터라는것을 알고있지만 T-vector로 BL21(DE3)에 TF하여 발현시키고 싶습니다   제가 T-vector에 넣은 insert 방향은 T7 promotor와 맞지 않지만 반대의 Lac promotor와는 일치합니다   그래서 T7이 아니여도 IPTG로 충분히 발현이 가능할 것 같은데 제가 생각하고있는 이론이 맞는지 알고싶습니다 또한 이렇게 했을시에 큰 문제점도 알고싶습니다   아니면 T-Vector에 좋은 host가 있을까요?   감사합니다  
회원작성글 Razer  |  05.22
Q. mini-prep 후 DNA 농도가 너무 낮아요ㅜㅜ 첨부파일
제가 요즘 cloning을 하고 있는데요, transformation하고 colony를 따 mini-prep을 하면 농도가 너무 낮게 나와요... 시퀀싱을 보낼 수 없을 정도로 1ul에 100ng 이하로 나옵니다. 분명 colony도 잘 뜨고, colony PCR 결과를 확인하여 insert가 들어간 것 까지 확인을 하였는데 mini-prep으로 DNA만 뽑으면 농도가 정말 낮게 나옵니다...ㅠㅠ 지금 이런 상황이 반복되고 있는데 왜 이런 결과가 나왔는지 아시는 분 있을까요.....?
회원작성글 djm0000  |  05.22
Q. THP-1 differentiation
THP-1을 differentiation 해주기 위해서 PMA를 사용한다고 들었습니다. 그런데 PMA를 3일정도 처리해 준 후, 원하는 물질을 처리하기 전에 PBS로 washing해주라고들 하는데,   여기서 왜 wasing과정이 필요할까요? PMA가 들어있는 배지에 물질을 그대로 treat하거나 혹은, washing없이 그냥 진행하면 안되나요?
회원작성글 jjnli  |  05.22
Q. IP 진행 후 western blot을 하였을 때 나타나는 IP sample과 input sample의 band 높이 차이
안녕하세요, 이번에 IP를 setting하고 있는 대학원생입니다. 이번에 직접 BF를 만들어서 WB으로 결과를 확인하였는데요, IP와 input의 band 높이가 달라서 이런 현상에 대해 문의를 드리고자 질문을 남깁니다. WB 상태도 썩 좋지는 않지만 ㅜㅜ, 그 부분을 제하고 봤을 때에도 band 높이 차이가 나는 게 이해가 잘 되지 않아서요. ----------------------------------------------------------------------------------- -같은 membrane에서 각각 다른 antibody로 detection한 결과입니다. -IP는 첫번째 사진의 antibody와 동일한 것으로 진행하였습니다. -이전 WB결과를 확인하였을 때, 첫번째(위) antibody는 50kDa에서 검출, 두번째(아래) antibody는 15kDa에서 검출되었습니다.   - IP lysis BF의 조성은 150mM NaCl, 50mM Tris (pH8.0), 1%NP-40, protease inhibitor, phosphatease inhibitor로 만들었습니다. - Beads는 Agarose resin(G)을 사용했습니다. - extraction은 1x sample BF를 80ul 넣어 95도에서 5분 끓이는 방법으로 진행하였습니다. ---------------------------------------------------------------------------------- 1. 단백질의 길이가 특정 과정을 거쳐 일부만 짧아질 수도 있는 것일까요? 2. 혹시 설마 하는 질문이지만 단백질이 짧을수록 IP를 진행했을 때 영향을 크게 받거나 검출이 어려울 수 있나요? 3. 추가적으로... BRIC을 통하여 WB이 세로로 끌리는 현상들은 BF의 pH의 문제 등이라는 것을 알 수있었으나, 가로로 넓어지는 현상 또한 이와 일맥상통한 문제일까요?   +) Heavy chain과 Light chain band 부분도 고려해 봤지만, 제가 알고있는size와는 달라서... western blot과 IP를 많이 경험해보신 선생님들께 조심스레 조언을 구해봅니다.
회원작성글 실험이버린손  |  05.22
Q. 은나노 합성 실험 관련 질문 드립니다.
은나노 입자 합성 수용액의 향균 능력을 측정하기 위한 실험을 아마추어 수준에서 할 예정입니다. 1. 0.002M NaBH4 30ml를 삼각플라스크에 담아 얼음이 담겨진 그릇 속에 20분 동안 평평하게 둔다. 2. 1.에 0.001M AgNO3 10ml를 1초에 한 방울씩 떨어뜨리며 저어준다 3. 실험이 끝난 후 젓기를 멈추고 5분간 기다린다. 이러한 실험과정을 통해 은나노 수용액을 만들고 균액과 1:5의 비율로 섞어 페트리 필름에 세균을 배양해 향균이 얼마나 되는지 측정할 계획인데 위 과정을 통해 만든 은나노 수용액에서도 향균 작용이 될지, 은나노 수용액과 균액의 비율을 1:5로 하는 것이 적절한지가 궁금합니다!!
회원작성글 채현  |  05.22
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