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현재 아토피 연구 중인 석사 1학기생입니다. 최근 받은 주제로 실험을 진행하면서 어려움에 부딪혔습니다... 이전에 실시한 탈과립(beta-hexo) 실험에서는 약물이 농도별로 유의하게 감소하는 결과를 확인할 수 있었고 같은 조건으로 웨스턴 실험을 시작하였습니다. 먼저 샘플링은 DNP-IgE로 밤새 감작을 진행했고 다음날 약물 처리(2hr) 진행 후 DNP-BSA로 유도(1hr) 후 cell harvest를 진행했습니다. 문제는 p-plcr1에서는 농도별로 감소하는 반면, p-erk와 p-p38군에서는 최고 농도에서 인산화가 유도되는 것이 확인되었습니다. 이 현상에 대해 약물 처리 시간이 문제일 수 있다고 생각하고 있지만, 확실하지 않아 조언을 구하고자 합니다. 실험에서 사용한 농도는 [C,유도군,CSA,5,10,25]입니다.
24.04.17
안녕하세요. 세포내 lactate 측정으로 하려고 하는데 샘플 준비 protocol 은 다음과 같습니다. (1) Collect cells (1 × 105 cells * 1) in a microtube. (2) Centrifuge at 300 × g for 2 minutes and remove supernatant. (3) Add 300 μl of cold PBS and suspend by pipetting. Centrifuge at 300 × g for 2 minutes and remove supernatant. (4) Add 300 μl of 0.1% Triton-X * 2 and vortex for 1 minutes to prepare for cell lysate. (5) Centrifuge at 8000 × g for 5 minutes and collect supernatant. (6) Deproteinize the solution prepared at step (5) with an ultrafiltration membrane filter (fraction molecular weight: 10 K) * 3 to obtain a measurement sample. 마지막에 효소에 의한 분해를 막기 위해 탈단백질 과정을 거치라고 하는데 필수적일까요? assay에서 37도 30min반응이 있어 치명적 centricon으로 돌릴까 하는데 50ml 30K라서 사용가능한 작은 volume 제품이 없어서 가성비 좋은거 있으시면 추천 부탁드립니다.
총 플라보노이드 흡광도를 구해서 입력을 다 했는데 여기서 검량선의 의미와 농도랑 함량의 의미는 무엇이고 어떻게 계산해서 이렇게 되는건가요?? 한번만 도와주시면 감사하겠습니다. 너무 어려워요 ㅠㅠ
안녕하세요. 현재 큐벳 옵션이 포함되어 있으면서 흡광만 측정 가능한 모델로 마이크로플레이트 리더를 구입을 결정하기 전 질문이 생겼습니다. 마이크로플레이트 리더기에는 주로 흡광, 발광, 형광 측정으로 3가지 기능이 있는 것으로 알고 있는데, 흡광만 가능한 마이크로플레이트 리더기로도 효소 저해 활성 평가와, ABTS, DPPH 같은 항산화 실험도 가능한가요? 아니면 효소 특성마다 측정해야하는 파장이 달라질 수 있으므로 꼭 흡광, 발광 ,형광 다 되는 것으로 사야하나요?
안녕하세요. 실험 도중에 시약 하나의 로트가 변경 되었는데, 결과가 전혀 다른 결과가 도출되었습니다. 제조사, CAS 등 모든 것이 동일하고 제조사에서 부여한 로트만 달라졌는데, 재현이 되지 않는 결과가 나타나 해당 시약의 성분 분석을 진행하려고 합니다. 일반적인 고체 시약인데, 시약 성분 분석을 위해 어떤 것을 진행하면 좋을 지 의견 부탁드립니다. 답변 미리 감사드립니다.
lipase 저해활성 실험을 하려고 하는데 시약을 어떻게 구매해야 할지,, 농도나 ph나 어떻게 맞춰서 구매해야 할 지 모르겠습니다 알려주세요!ㅜㅜ MOPS랑 EDTA랑 합쳐서 pH가 6.8이 되어야 하는 건가요,,, Tris buffer도 알려주세요,,, ㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜ
CHLORIDES a) Dissolve in 2 mL of water R a quantity of the substance to be examined equivalent to about 2 mg of chloride (Cl–) 아래 원료의 염소 2mg의 해당량을 어떻게 구하는지 궁금합니다 원료명: LIDOCAINE HYDROCHLORIDE MONOHYDRATE(C14H23ClN2O,H2O) Mr 288.8
안녕하세요. 석사 1학기 대학원생입니다. western blot 결과를 최근 신뢰할 수 없어 글을 작성하게 되었습니다. western blot detection 할 때마다 왜 인지 한쪽만 연하게 보입니다. ECL 시약도 골고루 발라 촬영하는데도 첨부한 사진처럼 보입니다. 한번 western blot 진행할 때마다 2gel씩 진행하는데 저렇게 한 부분이 연하게 보여서 결과도 다르게 나와 data를 신뢰하기 어려운 상황입니다. sample loading 시 파이펫에 남는 sample 없이 천천히 분주합니다. gel 놓는 방향도 다르게 transfer도 해보고 blocking도 membrane끼리 겹쳐지는 부분 없이 1시간 동안 진행해보기도 합니다. 항체 붙일 때도 마르는 부분 없이 넉넉하게 뿌려서 진행합니다. 그런데도 고르게 detection되는 것 같지 않습니다..
ihc protocol에서 1% acid alcohol을 사용하는 구간이 있습니다. 연구실 protocol에 100% ethanol, 1% Hcl이렇게 되어있습니다. 궁금한 점은 99ml의 100% ethanol에 HCl 원액을 넣어서 1%로 만들라는 것인지 99ml의 100% ethanol에 희석해놓은 1% Hcl을 넣으라는 것인지 이게 궁금합니다.
안녕하십니까. 논문 참고 시 Cu-EDTA 용액에 철염 첨가 시 Fe-EDTA로의 전환이 기대되는 바, 실제로 철염 첨가를 통해 HPLC로 측정을 시도하려고 하는 중입니다. 논문에서 직접적으로 언급된 4개의 이동상을 측정시에 STD의 피크는 하나로 잘 뜨는 경우도 있고 피크가 분리되지 않은 경우도 있으며 피크가 분리되지 않은 형태가 계속 나타나, 분리를 위하여 물의 양을 증가, 용액 pH 변화, 유속 변화의 3가지 방법을 바꾸어 가며 계속 진행중에 있습니다. RT 3.6부근의 두 피크를 분리하고 싶습니다. 관련해서 피크 분리해보신 경험 계신분은 피크 분리를 위한 팁 부탁드립니다.