실험 초짜 학부연구생입니다ㅠ 이번에 교수님께서 In-gel digestion이란거 해보라고 하시는데 주변에 알려줄 사람이 없습니다.. 도와주세요ㅠㅠ

안녕하세요 zymography를 처음 해보는 석사생입니다ㅠㅠ 도움 받을 분이 없어서 혼자 진행해봤는데요,, Gelatin zymography를 통해서 MMP-9의 활성을 보려고 했는데 밴드가 아에 뜨지를 안습니다,, Sample을 prep은 먼저 6웰 플레이트에 A549 cell을 깔고 부착후 starvation하였고 후에 cell을 자극하고 시료를 처리하여 conditioned media를 모았습니다(starvation부터 모든 media는 SF media를 사용했구요) 이 샘플로 MCP-1 등의 ELISA 측정을 하였고 최종적으로 zymography를 수행했습니다,,!ㅠㅠ Zymography의 모든 젤과 시약은 invitrogen novex제품을 사용했는데요, Conditioned media를 LDS sample buffer(4x)로 4배 희석시켜준 후에 로딩하여 90V로 3-40분 정도 전기영동하였고 후에 renaturing buffer(1x)에 30분, developing buffer(1x)에 30분 상온에 둔 후 새로운 developing buffer로 교체하여 37도에서 overnight 했습니다. 후에 wash 3회 진행하였고 simplyblue safestain으로 1시간 gel 염색 후 d.w로 1시간 탈색하였습니다. 근데 아에 밴드가 뜨질 않아요,, 염색 후에도 밴드가 안보였으나 그대로 진행해봤는데,, 왜 안뜨는걸까요?,,, 도와주세요ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ

아스피린 합성 실험과 아세트 아미노펜 합성 실험에서 둘 다 프로스타그라딘의 생합성을 억제해서 통증 유발을 줄이는데 아스피린만 소염작용이 있는 것을 구조적 차이로 설명할 수 있는 건가요?? 고등학생인데 둘 다 실험을 진행해 봤는데 실험으로는 이를 알아 볼 수 없는지 궁금해서요...!!

안녕하세요? 분자생물학자를 꿈꾸고 있는 17살입니다. 최근에 식물과 동물의 공통적인 노화 원인을 알아보고자 선행연구를 조사하다가 그 자료가 많지 않음을 알고 실험에 대한 조언을 얻고자 이렇게 질문을 올리게 되었습니다.    지금까지 실험을 통해 해결하고 싶은 질문은 '식물 노화 호르몬인 에틸렌은 동물의 노화에 어떤 영향을 미치는가?'입니다. 에틸렌은 식물의 세포막을 통해 침투되며 호흡 과정에서 발생한다는 점을 사용해 효모나 선충 등의 동물에게 투입하여 그 경과를 관찰하고자 합니다. 에틸렌을 투입한 동물과 아닌 것, 투입한 에틸렌의 농도에 따라 동물의 노화에 영향을 주는지 관찰하는 것이 목표입니다. 동물의 노화 원인인 텔로미어의 마모가 식물의 노화에는 미미한 영향을 끼치는 원인이 아직 규명되지 않은 점, ATM의 활성 정도가 높을수록 식물 노화가 촉진된다는 점이 동물 세포가 활성산소에 의해 세포가 손상되었을 때 노화된다는 점과 유사하다는 것 등 이 실험의 심화 탐구로 알아보고 싶은 것이 많습니다. 그러나 실험을 위해 에틸렌을 어떻게 어떤 동물에게 투입해야 할지, 에틸렌의 상태는 어떻게 해야할지를 결정하지 못하고 있습니다. 호흡 과정에서 에틸렌이 형성되어 에틸렌 수용체가 물질을 수용한다는 것은 찾았으나 노화에 어떤 영향을 미치는지, 동물에 어떻게 수용시켜야 할지 등 실험에 구체적인 요인을 결정할 자료를 제 수준에서는 찾기 어려었습니다.  혹시 실험에 사용할 동물의 종류나 에틸렌 주입 방법을 결정하는 데에 조언해주실 수 있나요? 감사합니다.

트랜스퍼를 하는데 37kDa짜리는 혹시 100V, 2시간을 하면 다 넘어가 버리나요? 오늘 두개의 멤브레인을 디텍 했는데 샘플이 만약 6개라고 하면 loading control이라서 6개가 다 나와야 정상인데 일부만 디텍 된다거나 아예 나오지가 않습니다 ㅜㅜ 혹시 37kDa 크기는 보통 어느정도 진행해야 하나요? 그리고 130kDa정도의 protein도 저정도면 너무 오버 된 걸까요? 130kDa도 안 나와서요ㅜㅜ(130kDa은 background는 뜨는데 밴드가 안 떠요) Target protein이 250kDa이라서 100V 2시간 해주고 37,100(130보려고 100에서 잘라줘요)부분만 잘라서 붙여주는데 일부만 보이거나 아예 안 보여요ㅠㅠ (Target protein은 그래도 보이긴 보임) 젤은 10% 사용하고 있습니다! 바뀐점은 로딩 양이 20에서 절반으로 줄은 점 밖에 없는데 이게 요인이 될 수 있나요? 만약 transfer 볼트와 시간이 문제라면 어느정도가 적당 할까요? 단백질 로딩 양도 20으로 해야 할까요? -제가 웨스턴 한 지 별로 안 돼서 정말 혹시나 두 멤브레인을 바꿔서 ab를 붙였나 생각도 해봤는데요. 트랜스퍼 후 membrane에 윗 부분(여유가 있는 부분)쪽부터 크기가 커짐->작아짐 아닌가요?

석사 한학기차 신입 대학원생입니다. 시퀀싱을 보내는데 Pcr product와 프라이머를 동봉하여 보냈습니다 Basic seq이었고 샘플 농도와 프라이머 또한 넉넉하게 보냈습니다 그런데 결과를 확인 했는데 평소 보던 결과와 달라 확인해 보니... 샘플 종류를 pcr product 가 아닌 plasmid로 선택 하여 주문을 했더군요.. 이럴 경우 시퀀싱을 다시 보내야 하는 거겠죠.. 처음엔 샘플 농도가 너무 낮아서 그런거라는 생각이 들었는데 다시 확인해보니 아니더군요.. Pcr product의 경우 결과 확인할때 snap gene 에서 보면 forward, reverse 시작점이 정해져 있는데 그게 아닌 결과가 나와서... Plasmid seq은 보내 본적도 없어서 어떻게 봐야 할지 모르겠습니다.. 혹시 이 경우 law 데이터에서 시작점 설정을 다시 하면 데이터를 볼수 있을까요.. 혹시 이런 경험이 있으신 분이 있는지..ㅠㅠ 다시 시퀀싱을 보내는 방법 밖에 없는지 어떻게 해야 하는지 모르겠습니다..ㅠㅠ

  안녕하세요. 분자쪽은 아무것도 모르지만 실험을 진행하게 된 예비 대학원생 입니다.!! 제가 DNA까지는 뽑았는데 PCR을 진행하려 여러 프로토콜을 찾아봤는데 궁금한게 있어서 질문합니다.  master mix 2x 가 있으면 프라이머(F,R), 주형DNA,뉴클리아제프리워터 만 있으면 되는거 맞나요?   만약 맞다면 마스터 믹스는 2X그대로 사용하는게 아닌 몇배 희석해서 사용해야하나요?  

카테고리는 좀 무시해주세용 ㅠㅠ   TSB 배지를 제작하려고 하는데요   분말을 구매해서 제작하려고 합니다   제작 과정에서 고압증기멸균기(오토클레이브)가 필요한데   학교에 오토클레이브가 없어서 무균작업대에서 핫플레이트를   이용하여 배지를 제작해야한다는데    고압증기멸균기에서 121°C로 15분간 멸균하려 했으면   핫플레이트는 어느 정도 온도에서 몇 분 정도 해야하나요?   혹시 시간이 아니라 직접 판단해야한다면   분말이 어떤 상태라고 판단 될 때까지 핫플레이트에서 멸균해야하나요??

제가 붙이려는 antibody가 ser/thr이 있는데 이게 무엇인지를 알겠는데 어떠한 것을 보고 선택하는지 모르겠습니다. 아무리 찾아봐도 ㅜㅜ 모르겠어서 질문합니다.ㅜㅜ 제가 셀에 처리한 시약의 data sheet를 보니 source에 ser21-lys166이라고 있는데 그럼 이 셀의 protein을 웨스턴하고 anti를 붙일때는 phospho-ser를 붙이는게 맞나요? 위 내용이 맞다면 다른 시약은 아무리 찾아도 ser/thr에 대한 내용은 없고  The human EG-VEGF gene codes for a 105 amino acid polypeptide containing an N-terminal signal sequence of 19 amino acids. Recombinant Human EG-VEGF is a 9.6 kDa protein consisting of 86 amino acid residues, including ten cysteine residues that potentially form five pairs of intra-molecular disulfide bonds. 이렇게 적혔있는데 어떻게 해야될지 모르겠습니다. 제발 도와주세요!!!!    

96well이나 분주하고 나서 기포가 생기는데 팁으로 찔러도 찔리지도 않고 터지지도 않더라고요.ㅜㅜ 분주후 기포 없애는 방법좀 알려주세요  

막 대학원을 시작하는 학생입니다.. 1mg/ml BSA STOCK 을 표처럼 시약을 넣어서 표준곡선을 그린후 BSA (ug/ml) 0 2 4 6 8 10 12 14 D.W(ul) 800 798 796 794 792 790 788 786 Reagent(ul) 200 200 200 200 200 200 200 200 Total(mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 sample은 넣어 sample  5ul D.W(ul) 795ul Reagent(ul) 200ul Total(mL) 1 96well에 595nm로 흡광도를 측정하여 y = 0.0555x + 0.2786이 나왔는데  sapmle x 값이 6.94가 나왔습니다.  근데왜 6.94x2를 해서 13.88로해서 해야하는건지 이해가 안되서요..   5x sample buffer  D.W   total 13.88 4 2.12   20ul   13.88로해서 왜 western loading 해야하나요..? 정말 답을 모르겠어요

LB Plate위에 Liqud TB에 키운 Cell spreading 해도 될까요? LB Plate (+amp)에 Liquid  TB에서 키운 Cell spreading해도 별 문제없죠?   단순히 rich media라 그럴 것 같은데요!

저희학교 식품공학 연구실에서 조개, 홍합같은 냉동 어패류를 해외 대학으로 보내려고 하는데 혹시 이런 경험 있으신 분 계신가요? 막막하네요. 쿠리어업체들 모두 어패류는 취급하지 않는다고 하는데..  

화학관련이라 여기에 질문해도 될지 모르겠는데... 질문할 곳이 없어서 올려봅니다 ㅠㅠㅠㅠ 유기용액에서 발생시킨 수소를 gas chromatography로 분석하려 하는데요... 그걸 위해서 수소기체를 포집해야 하는데 어떤 방식으로 해야할지 모르겠습니다 ㅠㅠㅠㅠ 도와주시면 너무 감사하겠습니다...

1. 일반적으로 혐기성 여드름균 더블링 타임이 얼마로 나오나요..?   2. 고등학생이 콜로니 수 대략적으로 새서 더블링 타임 구해보는거 괜찮을까요?

웨스턴할때 phospho antibody가 세린과 티로신 두가지가 존재하더라구요. 두 개는 각각 어떨때 사용해야나요? 현재 돼지자궁세포에 ifn-g와 prok1 처리를 하고 ARK, GSK, STAT1, JAK1의 antibody를 붙일려고 하고 있습니다.  

보통 한 membrane을 stripping 하는 최대의 횟수는 어느 정도 인가요? 지금까진 한번씩 해왔었는데 혹시 두세번까지도 가능 한가요?

Exoquick TC 이용해서 세포 배지에서 엑소좀 추출을 하였는데, 배지에 바로 ExoquickTC를 넣었습니다. 근데 프로토콜을 보니 세포외 파편 같은 것을 제거하기위해 0.22um filter나 원심분리를 한 뒤 처리하라는 스텝을 보았습니다. 실험 목적은 엑소좀에서 RNA를 뽑으려고 합니다 이런 스텝을 안하게되면 결과에 큰 문제가 생길까요..?

미생물 공배양 실험을 진행하려 하는데 Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228)와 Cutibacterium acnes (ATCC 6919)을 공배양할 배지를 결정하지 못하였습니다. ㅠㅠ 어떤 배지를 사용하면 좋을지 조언해주시면 감사하겠습니다.

    안녕하세요  현재 g과 mg단위로만 환산이 되는 마이크로저울을 사용하고 있는데요. 혹시 ug단위로 표시되는 마이크로저울을 사용하고 계신분들이 있을까요? ug단위로 표시되는 저울을 구매해야해서 질문 드립니다!