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Q. HPLC 액-액 추출 염석효과
카페인 분석 실험을 진행하는데, HPLC 방법을 이용했습니다. 시료 전처리를 할 때 정제수+카페인+내부 표준 물질이 들어있는 용액에 ether를 녹여 층 분리를 해주었습니다. 그 후, sodium sulfate 1g을 넣어주었는데 염석 효과를 위한 것인지 알겠습니다. 보통 염석 효과에는 NaCl을 넣는데 왜 굳이 Na2SO4를 넣었는지 궁금합니다. 또한 더 많은 양을 넣지 않고 1g만 넣었는지 의문이 들어 질문합니다!
회원작성글 yyy__  |  12.03
Q. 셀 자라는 속도 문의드립니다..
월 : 저녁에 25t-> 75t 하나로 계대 화 : 오후에 30% 찬 것 확인 수 : 저녁에 50% 찬 것 확인 목 : 저녁 8시경 확인했더니 overgrowth, 일단은 계대 진행 금 : 토 : 일 : 사진과 같은 상태 입니다..ㅠㅠ p.1의 b16f10 세포를 분양 받았고 위와 같이 계대를 진행하였습니다. 매일매일 세포 자라는 것을 확인하였고 수요일 저녁에 50% 차서 목요일 저녁쯤 계대하면 되겠거니 생각하고 있었는데 배지가 노랗게 뜨고 overgrowth 된 것 처럼 세포도 붕 뜨더라구요.. 그래도 거의 붙어있어서 그거라도 계대를 했는데 동글동글한 모양으로 본래의 morphology를 잃은 상태로 잘 자라지 못합니다 1. 어떻게 살릴 수 있는 방도가 없을까요? 2. 세포 키우면서 이런 적이 없었는데(계속 b16f10의 동일한 세포만 키워왔음) 갑자기 이렇게 되니 당황스럽습니다.. 보통은 전날 60~70%정도 차도 다음날 저녁에 계대해도 괜찮았거든요. 이렇게 자라는 속도가 갑자기 빨라질 수 있나요? 3. 분양 해주신분 께서 세포 상태가 안좋다고 하셔서 좀 미루다가 그 분께 분양 받은건데, 처음부터 세포 상태가 안좋아서 이렇게 됐을 가능성이 있을까요?
회원작성글 석사과정쥬쥬  |  12.03
Q. westernblot membrane이 왜이럴까요? ㅠㅠㅠㅠ제발도와주세여....
안녕하세요 westernblot 하는데 사진처럼 membrane이 자꾸 어둡게 나와서 뭐가 문제인지 모르겠습니다 ㅠ b-actin은 계속 잘나오는데 나머지Ab들이 자꾸 안나옵니다. 원래 blocking 시간은 1시간, RT 했는데 이번엔 2시간 했고, 1차Ab 농도도 1:1000했는데 1:800으로 늘렸구요, 4도씨 콜드룸에서 O/N했습니다.  워싱은 TBST이용하는데, 짧게 자주 교체해주라고 하시는 분이 계셔서 원래는 10분씩 3회 하는데 8분씩 5회 했고, rpm 도 더 세게 늘렸습니다.  2nd Ab는 원래 1:5000에서 1:10000으로 낮췄습니다. 아, 2nd Ab 하기 전에 re-blocking이 불필요한 detection 없애준다고 해서 10분정도 blocking 했구요. 그러고 나서 8분 5회 워싱 후 LAS 촬영했습니다. 도대체 뭐가 문제인지 모르겠습니다. 심지어.. 이번엔 IL-10이 그 전에는 membrane어둡고 멀티밴드가 나왔는데,  이번에 촬영해보니 군데군데 구멍도 나있고 두번째 membrane에는 그을린 것 같이 일부가 없어져서 나왔더군요... 사진마다 2개의 membrane 중 위의 것끼리는 같은 membrane이고 아래의 것 끼리는 같은 membrane입니다만, 다른 membrane은 다 괜찮은데 IL10은 왜 저런 구멍이 난걸까요 ㅜ membrane 어두운것, 멀티밴드, IL10의 밴드 손상 제발 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ 
회원작성글 dbkorea  |  12.03
Q. PCR 초보 질문입니다ㅠㅠ
PCR을 돌리고 나서 전기영동하고 나면 300bp 또는 500bp에 밴드가 나옵니다 근데 여기서 long pcr밴드를 확인하고자 할때 pcr reaction mix의 람다dna양을 늘리는건가요? 아니면 primer를 더 긴 길이로 바꿔줘야하는건가요?
회원작성글 호로롱슝  |  12.03
Q. adenovirus-36의 감염 기전, 동향 등에 관해서
최근 비만과 관련성있는 바이러스를 발견했습니다. 감염 기전이 어떻게 되는지, 어떤 실험방식을 사용하여 연구가 진행되고 있는지 보고싶은데 알려진게 없네요.. 1. adenovirus-36도 다른 adenovirus처럼 호흡기를 통해서 비말 감염되는 걸까요? 2. 한국 성인 과체중 그룹에서 양성률이 40%로 나타난 걸로 아는데 어떤 방법으로 도출해낸걸까요..? 신뢰성이 있을지 궁금합니다 그리고 관련 자료가 있다면 답변 달아주시면 감사하겠습니다. https://koreascience.kr/article/JAKO200836462219623.pdf
회원작성글 Meningitis..  |  12.03
Q. pcr 밴드보는법?
3번염색체에 위치한 STR마커인 D3S1358 marker를 이용해서 구강상피세포로 PCR진행했는데요.. 결과가 이렇게 나왔는데 1.이때 PCR product의 크기는 약125bp, 130bp, 약170bp, 180bp 이렇게 총 4개 나온거 맞나요?? 대립유전자는 2개라서 2개만 나와야하는거 아닌지,,왜 4개가 나왔는지 아무리 생각해도 모르겠습니다ㅠㅠ   2. 여기서 각 allele의 빈도를 알고싶은데 이때 각 allele라는게 1번에서는 125,127/ 170,180 이렇게 4가지 밴드를 각 allele라고 보는게 맞을까요?(이게맞다면 allele가 4개가 있는건가요>) 아니면 125,127 이거가 한 유전자의 allele이고 170,180이게 또 한유전자의 다른 allele라고 보는게 맞는건가요?
회원작성글 갈색솜뭉치  |  12.02
Q. 농도 계산 방법 (ppm , 몰비)
1. 1:1 몰비로 혼합하여 용액을 제조한다고 하면 결국 그 혼합 용액은 0.5mM이 되는게 맞나요? 이때 용액의 용량은 상관 없나요?   2. 제가 ppm을 계산하고자 하는 용액의 몰질량이 63.5460g/mol 입니다. 이 용액이 0.3mmol/L일때 몇  ppm 인지 구하고자 하여 계산을 해보았습니다. 0.0003mol X 63.5460g/mol = 0.01906g 0.01906g/1000mL X 10^6 = 19.06ppm 이렇게 계산하는 것이 맞나요?
회원작성글 짱이되고싶어여  |  12.02
Q. colony PCR 결과가 궁금합니다
colony PCR 결과입니다. 하나의 plate에서 8개의 콜로니를 따서 PCR진행했습니다. 총 3plate에서 8개씩 총 24개의 결과가 나와있습니다. 순서대로 (1번 8개, 2번 8개, 3번 8개입니다.) 여기서, target size 1번은 875bp, 2번은 906bp, 3번은 921bp가 나와야 합니다. size는 진한 band기준으로 잘 나온 것 같은데, target size 밑에 스미어하게 번지는 부분이 있어서 질문드립니다 ! 2번 lane을 예시로 들면, 진한 band는 size가 맞는 것으로 확인되고, 그 밑에 옅은 band인지, smear하게 번진 것인지 헷갈리는 희미한 부분이 있습니다. 이것이 무엇일까요 ? 제가 생각해봤을때, PCR 할 때 AT값을 56도로 진행했는데, AT값이 맞지 않아 non-specific한 현상이 일어나는 것이라 생각이들어 AT값에 gradient를 주어 AT조건을 변경해 볼 생각입니다. 이런 trouble shooting 말고, 다른 문제일까요 ?
회원작성글 퉤퉤  |  12.02
Q. 골격근 단면적 CSA measure
마우스 골격근 블럭 만들어서 H&E 한 뒤에 CSA를 재고 싶은데요 다른 논문에서 보니까 사진을 찍어서 분석을 의뢰하는 식으로 하던데 비용이 어떻게 되나요? 그리고 제가 직접 할 수있는 소프트 웨어가 있다면 어떤 식으로 할 수 있나요?
회원작성글 별헤는밥  |  12.02
Q. PANC-1, MIA paca-2 차이점
췌장암 관련 논문을 읽고있는데, 이해가 잘 가지 않는 부분이 있어서 여쭤봅니다.... panc-1 : pancreatic ductal adenocarcinoma cell line mia paca-2 : pancreas cancer cell line   흔히 췌장암이라고 하면 췌관선암인 pancreatic ductal cancer이라 panc-1은 알겠는데, mia paca-2 cancer cell line은 그럼 같은 건가요..?
회원작성글 합성인데 생물공부  |  12.02
Q. western blot 시 멤브레인 전체가 흐릿하게 나옵니다..
안녕하세요, western blot 실험을 갓 배워서 이번이 세번째 실험인 초보입니다.. 아래 사진은 맨 처음 실험했을 당시 b-actin에 대한 결과인데, total protein의 농도가 40ug가 되도록 loading해주었습니다. 그런데 밴드가 일정하게 뜨지 않고 진하기가 다 다르게 뜨더라구요. 이 부분은 제가 초보라 정량하는 과정에서 실수가 있었을 수도 있겠구나 생각했습니다. 적어도 이 때는 membrane이 타지도 않았고, reference gene의 expression 정도가 다르게 나타날지언정 background도 뜨지 않아서 정량을 다시 잘 해서 재실험하면 잘 나오지 않을까 막연하게 생각했었습니다. 그런데 2, 3번째 실험을 했을 때는 아래 사진처럼 밴드가 전체적으로 너무 흐릿하게 나오더라구요.. total protein 농도는 똑같이 40ug로 맞춰주었습니다. 넣어주는 protien의 양 자체가 너무 작아서 그런건가 싶어서 찾아보았는데, 다른건 몰라도 b-actin의 경우 보통 50ug 정도면 충분히 잘 나올만한 양이라고 하는것 같아서요..ㅠㅠ 그리고 첫번째 실험했을 때랑 농도도 같은데 왜 이렇게 흐리게 나오는지 모르겠어요. Background도 심한것 같고.. 아 blocking은 3% BSA로 상온에서 한시간 해주었습니다.     제 스스로 조금 걸리는 부분은 Running buffer & transfer buffer를 재사용한 것인데, 제가 실험을 처음 배웠을 때 running buffer와 transfer buffer를 5번까지 재상용한다고 배워서 그렇게 진행했었습니다. 위의 사진은 두 buffer 모두 딱 5번째 재사용한 상태이구요. 그런데 결과가 잘 안나와 찾아보니 buffer를 재사용하지 말라는 말도 많더라구요.. 그리고 1st, 2nd Ab도 재사용하였습니다. 제가 배울때 6개월이 지나지 않은 상황에서는 닳아없어질때까지 써도 된다고 배워서.. 거의 8번정도 재사용한 상황입니다.  그 외에 실험 조건을 적어보면 SDS-PAGE (Running buffer 재사용/5번) - 8% gel - 70V, 0.2A, 300W로 전기영동 15분 (전압 고정) - 100V, 0.2A, 300W로 전기영동 약 한시간 (전압 고정) Transfer (Transfer buffer 재사용/5번) - 얼음 위에서 진행 - 110V, 0.25A, 200W로 2시간 20분 Blocking - 3% BSA로 상온에서 한시간 항체 붙이기& wash - 유리판 위에 membrane 올려두고 1st Ab (1: 1000 희석) 뿌려준 후 먼지 들어가지 않도록 덮어주고 4도에서 overnight - TBST로 5분간 3번 wash - 2차항체 (1:5000 희석) 뿌려준 후 상온에서 한시간 rocking - TBST로 10분간 3번 wash   ECL solution A, B 1:1로 섞어준 후 뿌려주고, 킴텍으로 충분히 제거 후 필름으로 덮어주고 케미닥 찍음   중간중간 조금 생략한 과정도 있지만 대략적으로 이렇게 진행하였습니다. 긴 글 읽어주셔서 감사하고, 많은 지도 부탁드립니다.ㅠㅠ 감사합니다!
회원작성글 천행  |  12.02
Q. Triton X-100 원리
Triton X-100이 세포막의 인지질을 녹일때 일어나는 작용과 반응이 궁금합니다! 상세히 설명해주시면 감사하겠습니다.ㅠ
회원작성글 shu  |  12.02
Q. 가교결합 구조를 선형구조로 만드는 조건
안녕하세요, 고분자의 구조에 대해 궁금증이 생겨 여쭈어 봅니다. crosslinking 가교결합 구조는 고분자 사슬 간 공유결합이 존재하여 폴리머를 단단하게 만들고 내열성을 지니게 하며 linear 선형 구조는 사슬이 유연하여 열을 가했을 때 잘 녹는 성질을 지닌다고 배웠습니다. 저의 지식으로는,, 열경화성 플라스틱처럼 가교결합 구조를 가지는 물질은 높은 온도에서 사슬이 그냥 파괴되어 버린다고만 알고 있는데요,  이러한 가교결합 구조를 선형구조로 바꿀 수 있는 조건에는 어떤 것이 있는지 궁금합니다! (사실 제 관심분야가 친환경 폴리머 소재 연구입니다. 재활용 할때 보통 열을 가해서 녹이는 경우가 많다고 하는데, 이게 가능해지려면 crosslinking을 linear로 바꿀 수 있어야 한다고 생각했습니다.. 이 방법 외에도 다른 친환경 고분자의 구조에는 어떤 것이 있는지요? 답변 주시면 정말 감사하겠습니다:) )    
회원작성글 ataraxia  |  12.02
Q. Real time PCR 기초 질문 입니다.
안녕하세요. Real time PCR을 막 배우게 된 초보 연구원입니다. 다름이 아니라 housekeeping gene은 모든 세포에서 일정하게 발현되는 유전자로 알고 있는데요. 제가 실험에 사용한 gene이 actin-B이거든요. 근데 Ct 값이 28 부근에서 떠서요. 원래는 어느 Ct 값에서 뜨는게 정상인지에 대해 여쭤보고 싶습니다.
회원작성글 medi92  |  12.02
Q. pdx 한계극복방법
환자의 암을 누드마우스에 이식해서 그 종양을 키운 후 다양한 항암제를 투여하면서 효능 확인을 하는때 이때 누드마우스에 이식된 암은 마우스에 적응하는데 환자의 암과 같다고 볼 수 있나요? 아니라면 이 방법을 해결할 수 있는 방법이 있을까요?
회원작성글 duqdlghksd..  |  12.02
Q. 토끼 마취 질문입니다.
항혈청을 얻기 위해 토끼 마취를 진행하려고 합니다. 약 3~4kg의 토끼를 마취하여 심장채혈 할 예정인데 찾아보니 졸레틸 or 케타민과 럼푼을 섞어서 많이 사용하시더라고요. 그 중 졸레틸은 성체 토끼의 경우 마취하는데 있어 적합하지 않다는 말이 있어 케타민을 사용하려고 합니다. 근데 아무리 찾아봐도 용법과 mix 비율을 찾을 수가 없어서 어떻게 사용해야할지 잘 모르겠습니다. 용법을 보더라도 이걸 얼마나 써야하는건지 주변에 알려줄 수 있는 분이 계시지 않아 오로지 혼자 찾아서 이해하고 진행해야하는데 찾더라도 맞게 이해한건지 잘 모르겠네요. 이전 랩에서는 주로 mouse만 써봐서 ether만 사용하다가 이번에 처음으로 주사마취제를 사용하게 되어서 너무 아는 것이 없습니다. 경험있으신 분들의 도움이 절실합니다. 부탁드리겠습니다.
회원작성글 흑묘단단  |  12.02
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