Rat 흉부대동맥 vascular smooth muscle cell 을 primary culture해서 실험에 사용하고 있는데요.. passage #5-6정도 까지 subculture해서 실험에 사용하려고 seeding 했는데 cell이 잘 붙지도 않고 seeding 하면서 100파이에 subculture한 같은 cell도 모양이 기존것과 다르게 보여요. 보통 손을 뻗는? 모양이라고 해야하나 그런데 그냥 점만 찍혀있는듯하고 작은 삼각형 모양이요.. 다른 때에 primary culture해서 얻은 cell은 같은 방식으로 seeding하고 subculture해도 정상적으로 cell도 잘 붙고 모양도 괜찮고 실험도 잘 되는데 유독 이 cell만 그러네요.. 이유 아시는 분 계실까요ㅠ

안녕하세요 HDF cell line에서 10J/cm^2으로 uva를 조사한다고 하면, 세포배양하는 dish의 면적이 9cm^2이라고 할때, 90joules를 조사하는건가요?? 답변부탁드립니다ㅜㅜ!

항생제 내성 관련 실험으로 세균돌연변이주가 있는지 검증하려고 합니다. 셀배양을 하고난 후 항생제를 넣은 다른 배지에 세포를 배양 그이후 일부 살아남은 세균이 있다면 변이가 생긴걸까요? 항생제를 계속 접종하면서다른 배지에 옮기는 과정을 몇번 정도 해야될지 질문입니다.

TNF-α recombinant human protein unit(IU)를 봤는데 회사마다 specific activity가 다르게 나오는데 회사마다 다를 수 있는 건가요? unit 단위는 drug 특성이라 같은물질(예로 TNF-α)이면 같은 specific activity를 가지는줄 알았는데.. 만약 그럼 저렇게 bio activity가 안써져있는 회사 물질은 어떻게 계산하여 쓰는걸까요        

 pCambia1391Z vector 를 구합니다. 해외 주문해도 너무 오래걸려서요. 혹시 있으신 분은 imspirits@daum.net 보내주세요. 제가 찾는 게 맞다면 제가 소정의 보답 드릴게요.  

cloning하는중에 clone size확인하려고 agarose gel에 샘플 loading후 voltage는 어느정도로 하는지요? 빨리 달리기 위해 200V는 너무 빠른가요? 사이즈에 따라 적정 전압이 있는지 궁급합니다 감사합니다.

안녕하세요. Target gene 보다 좀 더 바깥쪽으로 primer를 design하려고 합니다. 그런데 NCBI에서는 유전자 서열들만 나오고, flanking sequence 검색이 안되네요 ㅠㅠ 혹시 어떻게 찾을 수 있는지 아시는 선배님들 계실까요?

Bac-to-Bac에 대해 가볍게만 들어본 상태인데 실험을 하는 도중 좀 더 내용을 이해하고 싶어서요,,, 이해도 안 된 상태에서 바로 실험을 시작한 것 같네요 전반적인 Bac-to-Bac도 궁금하고 cloning과정 후 왜 Bacmid라는 과정이 필요하고 그것이 정확히 뭔지가 가장 궁금합니다,, 구굴에는 너무 방대한 내용들도 많고, 전체적인 Bac-to-Bac과정이 머릿 속으로 잘 그려지지가 않아요,,   도와주세요!

안녕하세요, IHC 실험을 준비중인 학생입니다. IHC 관련 시약에 대해 궁금한 것이 있어 질문 남깁니다.   1)0.4% Triton X-100 in PBS 2)5% + 0.4% Triton X-100 in PBS 3)Dilution한 primary antibody 위 세개 물품은 만들고 얼마나 보관할 수 있나요? 만든 당일에 써야하는 것인지.. 냉장보관 후 며칠은 사용해도 괜찮은지 궁금합니다. 어디에서는 'Dilution한 primary antibody'을 antibody data sheet 참고하라고 하는데, 찾을수가 없어서요 ㅠㅠ   도와주세요..

pd metal powder 순도 분석 방법에 대해 궁금합니다

단백질 생산 후 buffer change 할때 1xPBS 로 진행하고 있습니다.    buffer change 전에 pH를 측정하였더니 사용하던 pH보다 낮아    1N naoh로 다시 pH를 맞추고 필터하였습니다.    그뒤로 buffer change를 진행하면 buffer 가 내려가는 속도도 느려지고    회수율도 적어지는거 같습니다.    혹시 1xPBS가 문제가 있을끼요 ㅜㅜ     

안녕하세요  Bacmid하는 중인데 DH10Bac Transformation후 midi-prep과정에서 궁금한 게 생겨서요 mini, midi, maxi-prep으로 나뉘던데 이것들은 그냥 키우는 스케일에 따라 구별되는 것인지 아니면 DNA사이즈에도 영향을 받는 것인지 궁금합니다. (작은 사이즈이면 mini프랩을 하고 뭐 그런 의미도 포함되어 있나요?)   ..잘 몰라서 죄송합니다

800Unit 의 시약을 0.17 Unit 으로 희석해서 사용 해야 하는데 Unit 계산법은 어떻게 해야 하나요..? 현재 800 Unit 은 200ul 정도 있습니다..

gene silencing 관련 논문을 읽던중, RMD(RNA-mediated Defense)라는 것이 나왔는데 PTGS와 RMD가 무엇이 다른건지 정확히 모르겠습니다ㅠㅠ

안녕하세요 미생물 성장곡선의 각 lag, exponential, stationary, death phase을 판단하는 수학적 판단 기준이 있나요?   감사합니다

마우스 조직에서 RNA extraction하는데 pellet이 안보여요.. trizol로 extraction하는데, 뭐가 문제인지 도통 모르겠습니다.... isopropanol 넣고 centri 돌린 후에 pellet이 안보여요..   답해주신 것 중에 isopropanol 넣고 30min동안 incubation 했는데도 다시 centri 돌렸을 때 pellet이 관찰되지 않았습니다..   어느 과정에서 RNA가 손실됐는지 어느 과정을 중요시 해야할지.. 누가 답 좀 알려주시면 감사하겠습니다...  

LC-MS를 이용하여 EDTA-Pb 용액에서의 EDTA를 정량하려 합니다. 몇번 분석을 하였지만 예상농도보다 적은 신호가 잡혀 논문을 찾아보았는데요. 용매의 증발과 이온 생성을 돕기 위해 분석 직전 시료에 15% methanol과 0.3% acetic acid를 첨가한다고 합니다. 이 때 15% methanol과 0.3% acetic acid는 어떻게 제조해야하는건지 잘 모르겠습니다.  LC-MS grade methanol과 99.0% acetic acid 용액을 가지고 있습니다. 용액 전체를 100이라고 하면 15%가 methanol, 0.3%가 acetic acid 이고 나머지는 DI로 채우면 되는 걸까요?

안녕하세요, serum 으로 주로 실험을 하는데, 문득 궁금한 점이 생겨 질문 올려봅니다. 사람의 혈청은 대부분 노란 빛을 띠고있는데 쥐의 혈청은 굉장히 투명하고 깨끗하더라구요. 혈청이 노란 빛을 내는 이유가 빌리루빈 때문으로 알고 있는데, 쥐의 혈청에는 이 빌리루빈이 상대적으로 적은 건가요? 아니면 혹시 다른 이유가 있나요? 구글에 찾아보아도 정확히 알 수 없어 이곳에 질문 올려봅니다.

Cloning을 해야할 일이 있어서 사용할 Backbone vector를 쓰려고하는데 정량으로 양을 확인하려고 하니까 정량 할수록 자꾸 점점 양이 줄어드는 기이한 현상이 생겨서 갖다버리고 (예전에도 기억에 얼핏 문제가 있었던 것으로 기억)... 새로 stock에서 prep해서 뽑았는데 정량은 되는데 1ug정도의 plasmid를 enzyme으로 cut을 하면 이게 밴드가 없습니다. 아무리 하루 overnight해서 전부 다 잘라버리는 현상이 있는가 싶어도 여러 밴드도 아니고 아얘 아무것도 안보이는 건 말도 안된다싶어서 남은 vector를 시퀀싱을 맡겼는데 primer가 binding되지않는다며 시퀀싱에 실패(....) 그럼 그 이전에 만든 stock으로 다시 prep을 해봤지만 역시나 정량은 되는데 밴드가 안보이는걸 봐선 해당 plasmid stock이 옜날부터 맛탱이가 간 것 같습니다. (옛날에 계신 선배나 박사님이 만든걸로 추정됨) 밴드도 안뜨는데 그럼 도대체 뭐가 정량이 되는걸까요?;; Genomic DNA는 prep 과정에서 침전되는걸로 알고있는데..... 집어넣을 DNA PCR까지 잘 끝났는데 해당과정에서 문제가 생겨서 진행을 못하고 있습니다.

항생물질의 미생물학적 역가시험법에서 KP에서 Gentamicin Sulfate의 경우  표준품을 건조하여 사용하라고 되어있는데 표준품을 건조하지 않고 사용하는 이유는 뭔가요?     표준품의 경우 USP를 이용하고 있고 표준품 설명을 봤을때, 건조한 다음 671μg 으로 사용할 수 있다는 것으로 이해했습니다. 결과 구하는 수식에서는 따로 건조감량 값을 사용하지 않고 있습니다. 건조감량 등에 따른 보정을 하지 않고, 그냥 표준품을 사용해도 되는 건가요?