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질문/투표/프로토콜 등록
Q. Transformation가 잘 안 돼요ㅜㅜㅜㅜ 첨부파일
안녕하세요. 실험을 시작한 지 얼마 되지 않은 새내기입니다. Addgene에서 pJBEI-6410이라는 벡터를 구매했습니다. 벡터를 저장하기 위해 E. coli XL1-blue, DH5a에 transformation을 시도했는데 colony가 나오지 않았습니다..... Addgene에서 권장하는 DH10B를 사용하지 않아서 그런걸까요? 아니면 방법이 잘못된 것일까요? T.F 방법은 아래와 같습니다. 1.배양한 cell을 원심분리 후 상층액 제거, 0.1M CaCl2 1ml넣고 파이펫팅으로 살살 풀어주고 튜브의 7ml 선까지 0.1M CaCl2 넣은 후 얼음 속에 40분간 방치 2. 원심분리 후 상층액 제거 후 약간의 0.1M CaCl2넣고 살살 풀어준 후 2ul 플라스미드가 담긴 튜브에 100ul 넣은 후 15분 방치 3. 42도에서 48초 heat shock 후 바로 얼음에 10분 보관 4. LB 배지 100ul 넣고 37도 스탠딩 인큐베이터에서 배양 5. 플레이트에 도말
회원작성글 ggy  |  12.10
Q. 유산균 stock에서 subculture시에 방법
우선 간단한 질문을 해서 죄송합니다 ㅜㅜ   정확히 말하면 stock이 아닌 MRS broth 에 자라있는 배양액이 있습니다 이것이 glycerol stock인줄 착각하고 대략 5~6번 정도 녹였다가 다시 얼리며 사용하였는데 아님을 알게되고 얼른 glycerol stock을 만들고자 MRS plate에 subculture를 하려고 합니다 그렇게 colony가 뜨면 다시 broth에 접종하여 stock을 만드려고 합니다! 그런데 도말봉을 사용해서 subculture를 해야하는지 loop를 사용해서 해야하는지 잘 모르겠어서 질문을 올립니다 ㅜㅜ 어떤 방법으로 하든 colony만 얻을 수 있다면 상관 없는 걸까요..? 기초적인 질문이라 죄송합니다 strain은  Lactobacillus plantarum/sakei Leuconostoc mesenteroides/citreum Weissella cibaria Pediococcus pentosaceus 입니다
회원작성글 하남시보안관  |  12.09
Q. 박테리아 나노셀룰로스 생산
안녕하세요 랩실에서 혼자 박테리아 키우고 있는 학생입니다. 박테리아는 Acetobacter xylinum이고 만니톨 고체 배지에 키운것 까지는 유투브나 논문보고  했는데 셀룰로스 필름은 시간이 지나도 만들어질 기미가 안보여요 ㅜㅜㅜ 물어볼 곳이 없어서 부탁드려요ㅜㅜ  혹시 이 박테리아를 키워보신 분이 계시다면 혹시 몇도의 온도에서 인큐베이터에 두셨는지 알 수 있을까요?
회원작성글 BML석사  |  12.09
Q. 조직슬라이드 기내반입
안녕하세요, 내년 1월에 영국에 잠시 연구를 위해 나가게 되었는데 조직슬라이드를 가지고가려고 합니다. 슬라이드인 만큼 깨질 우려가 있어 비행기 기내에 직접 들고타야 할 것 같은데, 혹 최근 슬라이드 기내에 반입하여 영국으로 들어가 보신 적 있으신분 계실까요? 조직슬라이드를 국제 택배 회사를 통해 보내기 위해서 Fedex, DHL, 한국 우체국 EMS 등 문의하였으나 영국이 동물샘플 등에 관련한 사항에서는 굉장히 엄격하고 민감하게 관리하고 있어 한국에서 보내는것은 되지만 영국에서 폐기처리 또는 반환되어 올 확률이 높다는 답변만 받아, 직접 기내에 반입하여 조심히 들고 가는것 밖에는 방법이 없어 질문 드리게 됐습니다. 감사합니다.
회원작성글 으딩딩  |  12.09
Q. 웨스턴 현상 관련 질문 첨부파일
웨스턴 현상 관련 질문드립니다. 현상 시, 전체적으로 멤브레인 가운데 부분이 까맣게 나옵니다. 해결 가능한 방법 의견 공유 부탁드립니다^^
회원작성글 홍홍홍홍홍홍  |  12.09
Q. addgene 주문에서 LMO 관련..
addgene에서 plasmid를 주문했는데 교수님 말씀으로는 LMO 등록 등 관련해서 세관 절차나 이런게 있을 거라고 하셨는데 그냥 서류 하나만 승인나면 결제가 되더라구요..;; LMO나.. 관련해서 어떠한 절차 없이 수입해도 괜찮은건가요? 물론 대학원 랩실용이라 비영리목적은 맞습니다  답변 주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 에르메스  |  12.09
Q. 비피도박테리움 내산성 내담즙성실험
제가 아직 고등학생이라 이쪽에 많은 지식이 없어서요ㅠ 1. 이런식으로 실험하려고 하는데 문제는 없나요?? 2. 내산성 내담즙성 각각 유산균의 생존률이 얼마정도 나와야 효능이 있다고 판별이 되나요..? 3. 중간에 펩톤으로 희석을 하는과정이 나오는데 펩톤을 쓰는 이유가 뭔가요?? 4. 내산성 실험에서는 유산균을 3시간동안만 위액에서 배양을하는데 내담즙성 실험에서는 담즙액에서 24시간 동안 배양을 하는데 담즙액에서의 배양시간이 더 긴이유 는 뭔가요?? 5. 대조군을 생막걸리에서 분리한 유산균을 사용하는데 생막걸리에서 유산균만을 어떻게 분리시킬수있나요?? 6. 대조군을 사용하는 이유가 뭔가요?? 너무 길어서 죄송합니다ㅠㅠㅠ내일부터 실험시작인데 이 궁금증을 찾아봐도 나오지 않아서요ㅠㅠ꼭 답변해주시면 정말정말 감사할것 같습니다..! ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ실험 과정ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ 대조군: 생막걸리에서 분리한 유산균 내산성 측정 위내 환경에 대한 생존율을 실험하기 위하여 인공위액을 만들어 생막걸리에서 분리한 유산균을 접종한 후 내산성을 측정한다. 인공위액은 MRS broth에 1 M HCl을 첨가하여 최종 pH를 2.5로 조정한 뒤 가압멸균을 실시한다. 멸균된 MRS broth를 50℃까지 냉각시킨 후 멸균한 pepsin용액을 0.22 ㎛ pore size filter를 이용하여 최종농도가 1000 units/mL이 되도록 배지에 첨가한다. MRS broth에 24시간 계대 배양한 유산균(1×109 CFU/mL)을 내산 배지에 1%(1×108 CFU/mL) 접종하여 37℃에서 0, 3시간동안 배양한다. 배양한 균주는 1 mL(1×107 CFU/mL)씩 0.1% peptone수 9 mL에 접종하여 6배 계열 희석한 후 peptone수에서 각각 100 μL을 취해 MRS agar plate에 접종한다. 37℃에서 48시간 배양 후 생균을 counting한다. 내담즙성 측정 췌장에 만들어져서 십이지장에서 분비되는 담즙액에 대한 생존율을 실험하기 위하여 유산균을 접종한 후 내담즙성을 측정한다. MRS broth에 담즙염인 Oxgall 0.3%(w/v)을 첨가하여 고압멸균을 실시한다. 담즙염 배지에 24시간 계대 배양한 유산균을 내담배지에 접종하여 37℃에서 0, 24시간동안 배양한다. 배양한 균주를 1mL을 6배 희석한 후 각 peptone수에서 각각 100 μL을 취해 MRS agar plate에 접종하여 37℃에서 48시간 배양 후 생균을 counting한다.
회원작성글 머하지  |  12.09
Q. Spleen에서 trizol 사용시 RNA 수율이 잘 나오는 방법이 있을까요?
안녕하세요. Mouse spleen에서 trizol로 RNA를 뽑는데 수율이 너무 낮아서 조언을 구합니다ㅠㅠ FACS sorting 후 RNA를 뽑아 RT-PCR을 진행하려고 합니다. Sorting 후에 cell이 5 x 10^5 cell/ml 정도라서 우선 spleen을 single cell suspension하고 whole splenocyte에서 연습을 하고 있습니다. 잘 나오면 100 ng/ul 정도 나오는데 혹시 더 많이 뽑는 방법이 있을까요? 아래의 프로토콜로 진행하고 있습니다! 1. Add 1 mL of Trizol and vortex for 10 seconds. 2. Incubate for 5 minutes. 3. Add 0.2 mL of chloroform, then securely cap the tube. 4. Incubate for 3 minutes.
  5. Centrifuge the sample for 15 minutes at 12,000 × g at 4°C. 6. Transfer the aqueous phase containing the RNA to a new tube.  7. Add 0.5 mL of isopropanol to the aqueous phase. 8. Incubate for 10 minutes. 9. Centrifuge for 10 minutes at 12,000 × g at 4°C. and discard the supernatant.
  10. Resuspend the pellet in 1 mL of 75% ethanol. 11. Centrifuge for 5 minutes at 7500 × g at 4°C and discard the supernatant. 12. Vacuum or air dry the RNA pellet for 5 minutes. 
회원작성글 Eeveee  |  12.09
Q. 단위계산이 궁금합니다
안녕하세요. 제가 항상 계산이 약해서 그러는데 알려주시면 감사하겠습니다. 100ml A 용액을 만들고 추가로 B용액을 0.01% 넣어주려고 합니다. 그럼 B용액은 얼만큼 넣어야하나요?
회원작성글 HuiJ  |  12.09
Q. 형질전환
agrobacterium을 이용해서 tabacco의 형질전환을 하려고 하는데요 처음에 E.coli에서 목적유전자를 많이 증식시키고 이 유전자를 agrobacterium에 전달하려고 하는데 E.coli에서 agrobacterium으로 유전자가 어떻게 전달되는지 원리에 대해 알 수 있을까요? E.coli의 plasmid에 목적유전자가 들어있으면 이게 agrobacterium에 전달되는 과정에 대해 알고 싶습니다!
회원작성글 Kw8  |  12.09
Q. agrobaterium
안녕하세요 tabacoo형질전환에 대한 실험을 하려고 합니다. 아직 학부생이라 이론에 대해 더 알아야 해서 질문합니다. E.coli를 이용해서 agrobacterium의 형질전환을 한 후 tabacco의 형질전환을 할 예정인데 제가 이미 목적유전자가 삽입된 E.coli를 갖고 있습니다. agrobacterium은 EHA105를 사용할 예정입니다. 이 경우 E.coli에 삽입된 벡터를 그대로 agrobacterium에 넣어주면 되는 것일까요? 따로 벡터가 필요할까요? 저는 E.coli의 벡터에서 목적 유전자를 빼고 난 후 따로 준비한 벡터에 다시 삽입해서 agrobacterium에 넣어주는 것으로 알고 있었습니다.  답변해주시면 정말 감사하겠습니다!
회원작성글 Kw8  |  12.09
Q. KPTaCS 타르색소 분석법
KPTaCS 타르색소 시험법에 따라 청색2호 알루미늄레이크를 여러명이 여러번 분석하였는데.. 도저히 함량값이 안나옵니다. USP로 했을때는 적합하게 나오는게, 이게 혹시 시험법이 문제가 있는게 아닐까 싶은데, KPTaCS로 시험 잘 되시는 분 계신가요?
회원작성글 또로또  |  12.09
Q. Cstr 물질수지식
Cstr 탱크내에서 반응물이 반응하지 않고 온도도 변하지 않다는 가정하에 오로지 물질의 질량만 계산하는데요, 단순히 유입과 유출속도만 이용하여 일정 시간후 탱크내의 양과, 적분형 물질수지식을 썼을 때 값이 왜 다른지 모르겠습니다. 단순히 질량만 고려했을 때는 같아야 하는거 아닌가요.?
회원작성글 우콩  |  12.09
Q. 스테비아 분석 관련 질문입니다!!
스테비아를 분석하고 있는 대학원생입니다! HPLC로 NH2컬럼 써서 MP는 물이랑 ACN gradient 걸어서 사용하고 있는데요. base line이 올라가는데 mp를 물이랑 ACN만 사용하면 그런다는데 왜 그런지, base line이 올라가는 다른 이유들도 같이 알려주시면 감사하겠습니다! 그리고 uv detector에가 210nm에서 당이나 유기산 물질들을 분석하는데, 이들의 구조나 특성들과 관련하여 왜 210nm에서 분석을 하나요?  
회원작성글 복어  |  12.09
Q. ChIP PCR 질문
ChIP qPCR을 이제 막 공부하는 중입니다. 제 질문은 ChIP PCR을 하는 이유가 무엇인지 궁금합니다.   제가 보는 논문에서 ChIP qPCR은 DNA에 Binding 하는 Protein(Histone이나 Transcription Factor 등)을 Immunoprecipitation으로 제거하고 DNA만을 회수하여 qPCR을 합니다.   여기서 궁금한 점은 이미 Protein이 Binding 하는 서열을 알고 있다면 굳이 qPCR로 정량을 할 필요가 있는가? 입니다. PCR로도 어느 정도 대강 정량이 가능할테고, 그 외에 다른 방법으로도 얼마든지 정량을 할 수 있을텐데 굳이 왜 ChIP을 하는지요?   만약 Protein이 Binding 하는 서열을 모른다면 Primer는 어떻게 짤 것인지, Specific 하게 PCR 되는지 어떻게 알 것인지요?    
회원작성글 TMV세균맨  |  12.09
Q. Cell seeding 계산법 질문드립니다..
처음으로 Cell culture를 배우고 있습니다. Cell counting, Seeding 하는 과정은 어떻게 하는지 알겠는데 계산법이 머리에 안들어와서 도움을 요청드려요ㅠㅠ   지금은 연습 단계라서 Counting값 2.8*10^6 Seeding값 2.5*10^6 이렇게 하여 3일 주기로 확인하고 있는데 매번 2.4배 정도 자라나고 있습니다.   이렇게만 잡고 culture를 한다면 알겠는데 Mouse 에 2*10^6으로 100ul씩 100마리 분량을 찌르기 위해서 배양을 몇일동안 해야하고 Seeding을 어떻게 해야하는지 배양값을 설정하지 못하겠습니다..   계산법도 모르겠습니다.. 75T Flask에 배양하고 있으며 조건은 위와 같을떄 100마리 분량을 배양하는 대까지 계산법을 알려주시면 감사하겠습니다!
회원작성글 SSSD  |  12.09
Q. SDS page gel 이 굳지 않습니다 ...
실험실에 예전에 누군가가 사놨던 시약들로 웨스턴블롯 실험 구축중에 있습니다 없는 시약들은 다 주문했지만 원래 있던 시약은 유통기한이 다 지나긴 했어요.. bis acrylamide는 실험실에 없어 acrylamide만 30%로 녹여서  gel을 만들었고 나머지는 모두 조성대로 실험을 진행하였습니다..(bis acrylamide는 구매예정입니다..) gel이 굳지는 않고 끈적끈적하게만 유리판에 달라붙어있는 상태입니다ㅜㅜ TEMED와 APS의 농도를 높여도 보았고 실험실 온도도 높여 잘 굳는 환경을 조성해봤지만 10시간이 지나도 gel이 굳지않습니다ㅜㅜ 우선 의심가는것들은 bis acrylamide를 넣지않은 점, 상해버린 시약인데 ,, 선배님들은 gel이 굳지않는 이유를 어떻게 생각하시는지 여쭙고싶습니다
회원작성글 도비에용  |  12.09
Q. Myristic Acid pH
Myristic Acid pH 얼마인지 자료에 안나와있는데 측정하기 어려워서 그런 건가요?ㅠㅠ
회원작성글 영왐하  |  12.09
Q. cell contam? 첨부파일
안녕하세요. cell 실험을 하는 학생입니다. 컨탐이 된게 맞나요? 주변이 모두 cell이 떨어졌으며,  이게 정확히 contam이 된건지 모르겠습니다. 확인 부탁드립니다..
회원작성글 똑똑해지자  |  12.09
Q. sampling volume질문드립니다
배양을 할때 24hr마다 sampling을 하려고 생각중인데요. 보통 총 volume에서 몇 프로 까지만 sampling volume을 할수있는건지 알수있을까요? 100ml은 culture할때 sampling할수 있는 량은 몇ml정도 까지인지 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 분자생물학도  |  12.08
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