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BioLab 신동혁 교수
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Q. ES cell line lentiviral transduction 후 delay된 cell death
최근 embryonic stem cell 라인에 lentivirus를 이용하여 transduction을 시켜주는 실험을 하고 있습니다.  Infection으로부터 24시간 후 selection을 시작해주었고 세포는 몇 일 동안 잘 자라서 passaging도 한번 해주었습니다. 한 5-6일 정도는 selection drug이 포함된 미디엄에서 아무 문제 없이 잘 자란 것 같습니다. 그런데 갑작스럽게 massive한 cell death가 발생하기 시작했습니다. 세포가 자라기는 하는 것 같은데 그 속도와 비슷하게 (아니면 조금 더 빠르게?) 사멸하여 육안으로도 둥둥 떠있는 세포가 보일 정도입니다. 현미경 상으로 관찰하였을 때 컨탬처럼 보이는 부분은 없고, 죽은 셀만 제거해주면 바닥도 깔끔해보입니다 (mycoplasma 컨탬 검사는 안 해봤습니다). 이렇게 보면 바이러스의 문제인가 싶기도 하지만, 동일한 바이러스로 infection된 embryonic stem cell 다른 셀라인은 이상 없이 아주 잘 자라고 있어서 도대체 뭔가 싶습니다... 같은 embryonic stem cell이라도 셀라인마다 efficiency가 다를 수가 있나요? efficiency 문제라면 왜 cell death가 delay되서 나타나는지도 잘 모르겠습니다 (transduction 없이는 보통 selection 3일차에 90% 이상 사멸합니다).  작은 힌트라도 소중한 답변 주시면 정말 도움이 많이 될 것 같습니다...감사합니다!
회원작성글 BioMate  |  12.01
Q. SDA 배지 조성 관련 질문 있습니다
SDA 배지 조성에 대해 찾아 보니 어떤 곳에서는 dextrose, peptone, distilled water가 , 어떤 곳에서는 Peptic digestion of animal tissues와 Pancreatic casein digestion이 있다고 하는데 배지 제조사별로 조성이 다른 건가요?
회원작성글 dpdrmfjffl..  |  11.30
Q. HPLC 추출물 중 유효성분 함량 계산 도와주세요ㅠㅠ
안녕하세요  A라는 자생식물 100g을 100% 에탄올로 추출 및 농축하여 (동결건조는 안하고 용매 모두 휘발) 약 3g의 고형분 (dry weight)을 얻었습니다. 여기에 분석을 위해 100% 에탄올로 다시 녹여서 3g/15mL 즉, 200mg/mL 농도의 추출물을 얻었습니다. (200000 ppm 이라고 가정) 이 추출물 샘플을 에탄올에 2000배 희석하여 100ppm으로 만들어 분석에 사용하였습니다.   ellagic acid를 스탠다드로 검량선을 그렸고 추출물 100ppm을 찍고 그 area 값을 검량선에 대입하여 0.7ppm이라는 결과를 얻었습니다. (injection volume은 동일하게 함)  그럼 이 때, 추출물 100ppm 안에 ellagic acid가 0.7ppm이 들어있는 것이 맞나요?... volume이 동일하니까?.. ㅠㅡㅠ 일반적인 계산법과 달라서 헷갈립니다... 
회원작성글 gpwhfb  |  11.30
Q. PCR시 100bp이하의 band 검출 관련입니다.
PCR을 했는데 원래 detect 되어야하는 size에서는 band가 안나오고 2번째 line과 같이 100bp 이하에서 band가 나왔습니다... 다른 유전자가 검출된 건가 싶어 Gel extraction, TA-cloning후 prep 해서 sequencing을 보냈는데 결과에서 다른 유전자가 아닌 T-vector로 나옵니다. 이유 알고계신 분 있으시면 꼭 답변 부탁드립니다 ㅠㅠ 감사합니다.  
회원작성글 Cheddar  |  11.30
Q. DPPH 실험 관련 질문 있습니다.
제가 오디 추출물의 항산화능을 측정하기 위해서 dpph +알코올 dpph +10% 오디추출물 dpph + 10% 레모나 수용액 이렇게 분광광도계로 흡광도 측정을 했는데 dpph+알코올 한 게 0.1...이런 식으로 나오고 다른 거는 흡광도 값이 엄청나게 크게 나와요. 그래서 그냥 흡광도 값 자체만 가지고 항산화능을 어떤게 더 좋다 이렇게 결론 내릴 수 있으면 좋겠는데 그러면 흡광도 값이 낮은 게 항산화 효과가 좋다고 봐야할까요?
회원작성글 flauvel  |  11.30
Q. 폐수 내의 중금속을 플라즈마 처리하여 분해되는지를 보고자 합니다 (분석-AAS)
제가 용액을 플라즈마 처리 하여 폐수 내에서 중금속 착화제가 분해되어 중금속 이온이 방출되는지를 AAS 로 보고자 하는데 AAS의 전처리 법에 대해 자세히 아시는 분 있으신가요? 아니면 제가 미리 시료를 준비해놓으려고 하는데 대략 몇 ml 정도가 필요한지 아시는 분 계시면 알려주세요!
회원작성글 짱이되고싶어여  |  11.30
Q. 마우스 해부 시 림프절의 위치가 궁금합니다.
안녕하세요! balb/c mouse 모델로 아토피 실험 진행중인 대학원생입니다. 아토피 관련 논문들 보다 보니 해부 시 림프절 크기도 많이 비교하더라구요 mouse 림프절의 종류가 다양한 것으로 알고있는데 아토피 실험에서 주로 보는 림프절이 따로 있는것인지  아니면 떼기 편한 림프절을 떼는 것인지 궁금해서 질문 올립니다!! 혹시 관련 실험을 진행해보셨다면 어느 위치의 림프절을 보셨는지 공유 부탁드립니다 감사합니다!!!
회원작성글 jineee  |  11.30
Q. western house keeping protein
galectin-1이라는 단백질을 transfection 시킨 후, single cell cloning을 거쳐 여러개의 clone을 얻어 gal-1 발현률을 비교해보고 있는데 house keeping 단백질이 계속 흔들립니다.   b-actin도 써보고 a-tublin도 써보는데,  둘다, gal-1이 많이 높게 발현되는 clone에서 그 발현양이 매우 낮습니다.   일단, QPCR로 확인을 하긴 할건데 이 clone들이 다른 유전자가 KO 된 것에 OE를 시킨 것이라 두 유전자의 영향이 있을 수는 있을 것 같긴한데 GAPDH를 써서 한 번 더 해봐야하나  고민 중입니다   comment를 부탁드립니다.
회원작성글 새슬  |  11.30
Q. 추출물의 효능평가가 성분의 효능평가보다 선행되어야 하나요?
A라는 추출물의 효능평가와 기전탐구를 만성 염증 관련 동물모델을 통하여 진행하였습니다. A라는 추출물의 효능평가와 기전탐구에 앞서, A의 추출물과 각 분획의 항산화 활성과 플라보노이드, 페놀 함량을 측정하였는데, 부탄올, 헥산 분획, 추출물 순으로 활성과 플라보노이드 페놀 함량이 높게 나타났습니다.  그리고 저는 분획의 항산화 효능과 플라보노이드, 페놀 함량이 높으나 각 분획의 효능이 보고되어있지 않고, 면역 강화 효과를 가지는 분획이 있을 수 있으며, 추출물의 항염 효과가 이미 보고되어 있기 때문에 총 추출물의 효능 평가가 선행되는것이 안전하다고 판단하였습니다. 이때 궁금해진것이 추출물의 효능평가가 성분의 효능평가보다 선행하는것이 혹시 routine 한것인가 하는 궁금증이였는데요. 선배님들의 좋은 답변 기다리고 있겠습니다.    
회원작성글 caco2  |  11.30
Q. 진탕 배양기 헤파필터
그람 양성 박테리아를 culturing하고 있습니다. 포자 유도배지로 진탕배양기에서 4일 배양하는데 Contamination이 일어나서 포자배양을 하지 못하고 있습니다. 공기 중 오염이 의심되는데, 진탕배양기는 헤파필터를 사용하여 공기를  챔버내에 공급하지 않나요? 실험하시는 분들의 경험이나 의견을 구합니다.                
회원작성글 stanley  |  11.30
Q. SDS-PAGE 끌림현상(reducing Vs non-reducing)
안녕하세요!   단백질을 SDS-PAGE로 확인하고 있고, complex 형태를 이루는 부분이 있기 때문에 reducing과 non-reducing 샘플을 항상 비교하고 있습니다. Column work을 한 후에 보고 있는데, 최근 affininty 후에 샘플에서 끌림현상이 확인되고 있습니다. 정확하게는 affinity column 후, reducing과 non-reducing 샘플을 1개의 pre-made(commercial gel) gel에 loading을 하는데, 'non-reducing' 샘플에서만 끌림 현상이 확인되고, reducing 샘플은 깨끗하게 나오고 있습니다.  혹시 어떤 원인이 있을지 궁금합니다. 답변 주신 분들게 미리 감사 인사 드립니다.
회원작성글 sein  |  11.30
Q. Western blot band 질문 첨부파일
RAW 264.7 cell에 단백질로 p-p65등을 western blot으로 보려고 합니다. 근데 화면 지지직 거리는 그런 화면같이 나오거나 crop 밴드 형태만 나오고 band가 안나옵니다. 뭐가 문제인지 모르겠어요. 캐미닥을 쓰고 있고 blocking solution은 Ez blockchmi 쓰고 있고 transfer도 blocking과 같은 브랜드 제품 쓰고 있습니다 고수님들 도와주세요ㅠ 오늘안으로 알아야 되서요ㅠㅠ 급합니다
회원작성글 ono  |  11.30
Q. LB 액체배지만들때 분주관련
박테리아를 키우고 향균성 테스트를 하는 실험을 진행중입니다. LB 액체배지 만든 후 falcon tube에 분주할때 syringe를 사용하여 분주하여도 문제가 없나요? 무조건 유리피펫으로만 분주하여야하나요?
회원작성글 usnoeyoj  |  11.30
Q. RNA 추출할 때 층 분리가 안됩니다
RNA 추출하는 과정에서 chloroform 넣고  4도에서 원심 돌렸는데 일부 샘플에서 투명층이 분리가 안되고 하얗게 gel 처럼 굳어버리네요... 샘플은 혈액입니다.  원인과 해결방법 아시는 분 있을까요?
회원작성글 hazzy  |  11.30
Q. SDS-PAGE gel 유리판
SDS-PAGE gel 만들때 뒤의 short plate는 철로 된것이고, 앞은 유리로 된거 사용하는데 강하게 나사로 고정하면 유리가 깨지고 약하게 고정하면 젤이 굳기전에 흘러서 만들기가 참 어렵네요. 유리판을 써야하는 이유가 있나요? 플라스틱판이나 아크릴판을 적정크기로 잘라서 유리판대신 사용해서 젤 런하면 안되나요? 플라스틱판은 원래 없는건가요? 감사합니다.
회원작성글 BBlue  |  11.30
Q. cell 상태 확인부탁드립니다.
계대배양하고 다음날 아침에cell 상태 확인해보면 현미경에 둥둥 떠나디는cell들있잖아요? 그런cell등은 아직 부착하지 못해서 떠다니는건가요? 아니면 죽어서 떠다니는건가요? 
회원작성글 choheec  |  11.30
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