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Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
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Q. DNA sequencing 결과에 관해 문의드립니다
각각 Dna의 1-86번째(up) / 87-321번째 (down)단백질 서열까지만 pcr해서 얻은 insert를 pmCherry-C1에 ligation한 결과입니다.  Sequencing을 맡겼고, multialign으로 원래 DNA의 Fasta 서열과 비교한 것인데, 900번대 뒤부터 한두개의 오류가 발생합니다. 원래 sequencing시 읽어주는 promoter 시작점에서 뒤쪽 900-1000번대 부터는 오류가 발생할 수 있다는 것을 알고 있긴 하지만 혹시 그대로 사용해도 문제점은 없을지 염려되어 문의남깁니다...!  
회원작성글 인생막삼  |  02.09
Q. ss배지에서는 그람양성균 안자라는 거 맞죠? 자꾸 포도상구균이 자랍니다ㅠ 첨부파일
안녕하세요 실험 중인데 ss배지에서 자꾸 포도상구균이 자랍니다.. 처음에는 제가 실수로 배지만들 때 오토클레이브에 돌려서 그런 줄 알고 그냥 끓이기만 해서 배지 만들었는데 여기에서도 자라네요...뭐가 문제일까요 스톡이 잘못된건지ㅠ배지사진도 첨부할게요..
회원작성글 초보원생  |  02.09
Q. ELISA dilution 결정..
안녕하세요, ELISA를 처음 시작하는 초보 석사생입니다.   1)보려고 하는 단백질의 평균 혈중 농도: 80~100ng/ml  2)ELISA detection range: ~1200pg/ml 3)사용량: 50ul   이런 상황일때 얼마로 dilution 해야할까요? 계산법 좀 알려주세요 ㅜㅜ   80ng/ml -> 80,000pg/ml -> 1:1000 dilution -> 80pg/ml 사용량 50ul 이므로, 80pg/ml X 50=4000pg/ml 이렇게 계산하는 것으로 이해하고 있었는데... dilution rate가 너무 증가하는 것 같아 이상해서요ㅠㅠ    꼭 도와주세요!! 미리 감사드립니다.
회원작성글 척척석사_  |  02.09
Q. 대장암 모델의 대장 위치에 따른 차이
안녕하세요. 대장암 모델을 연구하고 있는데, 처음이다 보니 다른 연구자 분들의 의견이 듣고 싶어 질문하게 되었습니다.   제가 AOM/DSS 로 유도된 마우스를 희생하여 조직병리와 단백질 분석을 수행하려고 합니다. 대장 위치 proximal, mid, distal colon에 따라 단백질 분석 결과가 달라지는지 궁금합니다. 대장암 모델은 처음이라,, 조직병리는 암 발생이 가장 많이 된 부위를 분석하면 될 것 같은데, 단백질은 확신이 들지 않네요. 의견 부탁 드립니다. 감사합니다.
회원작성글 조미  |  02.08
Q. (아미노산 코돈표)이 table은 왜 이런식으로 표기한건가요..? 첨부파일
질문에 앞서 실험보다 문헌에 관련된 내용인 점 사과드립니다. translated RNA가 아미노산을 구성하기때문에 코돈표를 보면 일부를 제외하고 RNA 기준 (T->U)으로 3 letter를 표기하는 것을 일반적으로 봐왔는데요 첨부된 표는 제2의문자 중 G에 해당하는 열만 U로 표기하지 않고 T로 표기한 것을 볼 수 있었습니다. (ex. 시스테인, UGU -> TGT) 또한 제 3의문자 행도 U가 아닌 T로 적혀있었는데요 검색하였을때도 이런 표는 찾지 못하였습니다. 단순 실수일수도 있지만 제가 모르는 이유가 있어서 이렇게 표기했을 수도 있다는 생각이 들기도 합니다 (식물육종관련서적). 이학관련 질의 커뮤니티 아는곳이 없어 bric에 질의 올립니다...
회원작성글 RBR  |  02.08
Q. qRT-PCR , triplicate(replicate)에 대해서
  안녕하세요. qRT-PCR를 공부하다 의문점이 생겨 질문드립니다. 그림을 보면서 질문 드리는게 빨라 그림을 먼저 제시합니다. (5개의 샘플, 6개의 유전자(5개유전자 +GAPDH))   이 논문에서는 WT(정상인)과 환자4분(FD-1,FD-2,FD-3,FD-4)으로 부터 유래한 세포를 배양하여 qRT-PCR를 진행한 디자인 입니다.  이 논문에서는 qRT-PCR는 triplicate으로 진행했다고 하였으며 SEM(N=3)을 했다고 나와 있습니다.    1. 제가 이해하기로는 1,2,3번 컬럼의 WT이 모두 하나의 세포 배양plate에서 추출한 RNA로 이해했는데 맞나요? 즉 qRT-PCR당 5개의 세포배양을 준비해야하 하고 N=3이니 총 15개의 세포배양을 해야한다 라고 이해했는데 맞나 모르겠습니다. 1번의 경우 (The data are expressed as means +- SEM(n=3).)     2. 사실 위의 개념이 햇갈린 이유는, 다른 논문에서는 triplicate로 qRT-PCR로 진행했다고 하면서 mean+sd 의 그래프를 제시합니다. 이 경우는  1,2,3번 컬럼에서 WT이긴 하지만 하나의 세포배양 plate가 아닌 3개의 서로 다른 plate로 한번에 qRT-PCR진행한것 같습니다 맞나요? 2번의 경우 (Experiments were conducted in triplicate (mean ± SD).)       3. 제가 위에 제시한 개념이 모두 맞다면 1번과 2번 경우 모두 기술적 차이는 없는것 인가요? 2번의 방법으로 제시해도 괜찮은지 그 qPCR 오차에서.. 그런부분이 좀 신경쓰입니다. 물론 실험디자인상 실험가격도 고려해야할 중요한 요소 이지만요    감사합니다.   
회원작성글 대학원지망생  |  02.08
Q. 인체에서 환원이 미치는 영향
산화,환원에 대해 학습하다가 흔히 산화는 인체에 노화를 일으킨다는 말과 말리 환원은 어떤 역할을 하는지 접해본적이 없는것 같아 찾아보았습니다. 드물게 환원스트레스에 대한 내용을 찾아볼 수 있었으나 정확한 매커니즘도 없고 과학적인 내용보다는 병원 홍보성 자료, 위키백과의 자료라 신뢰도가 부족하다 생각합니다. 그런데 논문 사이트 등에서 키워드를 중심으로 아무리 찾아봐도 정확한 자료를 찾기가 힘드네요...혹시 인체에서 환원에 의해 발생하는 현상을 알고 계시다면 알려주실 수 있으신가요? 감사합니다
회원작성글 김규연  |  02.08
Q. 항생제 농도&종류 고민입니다
안녕하세요. 개미 체표면 미생물상 조사 전 변인통제를 위해 수용액 상태로 희석한 항생제를 개미 표면에 도포한 후 사육을 시작하려 하는데, 고민입니다.   1. Ampicillin, Rifampin, Kanamycin 중에 가장 범용성이면서 수용액으로 사용하기 적절한 게 뭘까요? 이것부터 너무 고민입니다.   2. 농도는 약 얼마 정도가 괜찮을까요? 개미가 소형종이라 농도 조절이 중요함은 알고 있는데, 어느 정도로 해야 할지가 막막하네요. (1% 리팜핀을 개미 표면에 처리한 논문은 있었는데, 그게 수용액인지 다른 용매에 녹은 건지 알수가 없네요.) 단위는 g/mL로 부탁드립니다.   3. ampicillin은 그람음성과 양성 모두 범용성이고, 리팜핀은 그람양성에 효과적인 것으로 알고 있는데, 수용액 상에서 두 항생제를 섞어서 개미 체표면에 도료하면 문제가 될까요?
회원작성글 jaehunjeon..  |  02.08
Q. Tet on 에서 Doxycycline 처리 조건에 대해 문의드립니다
HEK293T에 Tet promoter가 있는 Plasmid를 Transfection 시켰습니다 Doxycyline - induced GOI system 인데 Tet on에서 Doxycycline 처리 시간이 논문마다 24h과 48h으로 나뉘어져 문의드리게 되었습니다.   1) Tet on에서 보통 mammalian cell에 dox를 24h처리하는지 48h처리하는지 궁금합니다   2) Tet system에 대해 적힌 paper에서는 stable cell line에는 48h, Transient Txn cell에는 24h Dox를 처리하던데 두 cell 이 처리시간이 달라지는 이유가 궁금합니다. (애초에 둘이 다르게 처리해주는 것이 맞는지 궁금합니다!)
회원작성글 인생막삼  |  02.08
Q. 식물 에탄올추출후(전) 엽록소제거방법
실물 에탄올추출후 결과물에 엽록소가 포함되어 녹색과 풀냄새가 납니다. 건조된식물 분쇄후 냉동실에 보관한 저온상태의 에탄올을 섞고 냉동실에서 보관 추출 하면 엽록소가 빠져나오는걸 최대한 막을수 있다는 생각을 해봅니다 가능할까요? 엽록소를 추출물에서 제거하는방법? 출출전 엽록소를 제거하고 출출하는방법? 궁금합니다.
회원작성글 연학  |  02.08
Q. WB 실험 시 protein 양이 모든 marker에서 동일해야 할까요?
안녕하세요, 논문을 읽다 질문이 생겨 문의 드립니다. WB 시 protein 양을 모든 well에 같은 양 걸어주어야 특정 protein의 발현 변화 정도를 비교할 수 있잖아요, 만약 제가 여러 protein을 확인할 때에도 반드시 매번 같은 양을 걸어야 할까요? 제 말은, blot 내에서 아시다시피 b-actin은 10ug만 걸어도 잘 나오지만 어떤 protein은, 특히 phospho form은 10ug로는 잘 안 나오는 경우가 있습니다. 이럴 때 b-actin은 그대로 두고 phospho form의 양을 조금 늘려서 loading하는 것이 가능할까요?   그리고 어떤 논문의 경우 20ug 걸었다, 어떤 논문은 18~22ug의 양을 걸었다라고 쓰기도 하던데 뭔가 통상적인 protein loading 양의 허용범위? 같은 것이 있는지도 궁금합니다.   감사합니다.
회원작성글 릴미  |  02.08
Q. Exosome isolation 후 western blot확인
여러 sample(Cultrure media/Urine/Serum/Plasma...)에서 exosome을 다양한 방법(Ultracentrifuge, PEG kit, filtration 등등)으로 isolation 후 각 방법별로 효율을 비교하고자합니다. 이때, protein 정량 후 protein의 양을 맞추고 loading하는 것이 맞을까요? 아님 yeild의 개념으로 같은양을 loading하는 것이 맞을까요? ex] 만약 모든 방법을 동일하게 sample 1ml으로 start하여 마지막 elution을 50ul으로 한다면  a) 50ul를 정량 후 20ug씩 loading  b)추출 효율 비교니까 모두 동일하게 20ul씩 loading 사실 두방법 모두 실험 해봤지만 그렇게 큰 차이가 나지는 않습니다.  논문이나 각 commercial kit을 flyer를 찾아보면 western blot후 확인하던데 method을 봐도 그런거까지는 말해주지 않으니까요...  Exosome을 주로 실험하시는 분들은 어떻게 western을 하시는지 궁금합니다! Exosome을 연구하시는게 아니더라도 다양한 분들의 의견이 궁금합니다. 다양한 의견 부탁드립니다!
회원작성글 liilllijli..  |  02.08
Q. 혹시 이 기구 이름을 아시는 분이 있을까요?
Sonication할 때 시료 높낮이 맞추는 용도로 쓰고 있는데 이걸 새로 사야하는데 이름을 몰라서 주문을 못넣고 있습니다 혹시 이거 뭐라 부르는지 아시는 분 있나요..?
회원작성글 ckk  |  02.08
Q. Cell counting 시에 dpbs로 resuspension 하여 Trypan blue와 섞어도 되나요?
6 well Cell wahsing Trypsin 200ul 5min  Media 1ml Cell down centrifuge 상층액 제거   DPBS 1ml 로 suspension 이후 Trypan blue로 희석해서 Hemocytometer로 Cell counting   빨간 부분이 제가 궁금한 부분입니다 Cell counting 시 DPBS로 Trypan blue 랑 섞어도 되나 싶어서요!    RNA 추출할거라 어떻게 해도 상관없는데 STEP을 좀 줄이고싶어요 media는 완전 제거가 필요해서 이렇게 해도 되나 싶어서요
회원작성글 ㅁㅇㄹ  |  02.08
Q. defined culture medium을 37도로 데우면 안 되는 이유가 뭔가요?
제가 처음 HCnEpC(대장염 세포)를 다루는데 정해진 medium들이 있더라구요 그 중 defined culture medium이 있는데 상온으로 데우고 절대 37도로는 데워서는 안 된다고 되어있는데 이유가 뭔가요..? 그리고 thawing medium이라는 것이 따로 있는데 이전에 세포 배양을 할 때에는 medium을 37도로 모두 데운 뒤 사용했는데 세포 배양 설명서에 thawing medium에 대해서는 데우라는 말이 없어서 데우는 것이 맞는지 확신이 안 드네요ㅜㅜ 
회원작성글 원생093  |  02.08
Q. 일반실험실 agrobacterium 구매
일반실험실에서 종양 유전자가 존재하는 Agrobacterium을 구매하고 싶습니다 KCCM에서 agrobacterium 균주를 찾긴 했는데 궁금한게 있어서 여쭙니다 KCCM : 11683, ATCC : 11325, IFO : 13257, DSM : 30148 ▷ History (Agrobacterium rhizogenes):
회원작성글 cosx  |  02.08
Q. glycerol 변색
PBS에 글리세롤을 20%되게 넣어 autoclave한 후에 확인하니 노란색으로 변색되었습니다. 원래 둘이 같이 멸균하면 안되나요? 따로 해야하나요?
회원작성글 대학원생(진)  |  02.08
Q. 감압추출/농축기 관련한 질문입니다
본 장비가 헥산제거에 가장 효율적인 장비로 알고 있는데 혹시 자연물에서의 추출이 어느 범위까지 가능한가요? 저희는 이종골 이식재를 제조하고 있는데 지질 제거 공정에 헥산을 투습침지로 사용하고 헥산과 지질 모두 제거해서 버 려야 되는데요, 이 감압농축기를 사용시 시료에 데미지를 주거나(뼈가 약해질 가능성) 제거가 안되어 남아있는 경우(다공성이다보니 덜 빠져나온다던가)가 있 을까요? 빠른 답변 부탁드립니다. 감사합니다.
회원작성글 레드빈라떼  |  02.08
Q. 분말 희석 계산
안녕하세요 고형분 90% 분말 20g을 희석하여 0.4% 농도로 만들려고 하는데 구하는 방법 좀 알 수 있을까요?ㅠㅠ
회원작성글 asdkfj2l34  |  02.08
Q. CFU 계산 좀 도와주세요..
안녕하세요 균을 계수를 했는데 이런 경우엔 어떻게 결과값을 내야하는지 궁금해서 여쭤봅니다!   g으로 채취한 샘플을 10배 희석해서 1ml을 취해 실험한 결과 10,000,000 CFU/g 나왔습니다.   만약에 표기값이 CFU/2g 일 경우 10,000,000 X 2 = 20,000,000  으로 계산하면 되는건가요? 
회원작성글 egfhty24  |  02.08
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