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질문/투표/프로토콜 등록
Q. 그날 만든 western blot sample을 가지고 다른 젤에 내렸는데, 경향이 달라요..ㅠ
안녕하세요.    웨스턴 블럿을 하고 있는데,   당일 만든 샘플을 가지고 당일에 내리는데,   왜 젤 마다 경향이 다를까요...   이게 그 말로만 듣던 똥손인가요...ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ   미쳐버리겠습니다..
회원작성글 오호로오오호  |  08.19
Q. 희석배수
안녕하세요 전분(Starch) 함량을 측정하는 페놀황산법을 통해 흡광도를 구하였습니다.    여기서 희석배수가 문제인데 제 실험순서를 간략히 말하면  시료에 sodium acetate buffer 2.5ml > 중탕 > sodium acetate buffer 2ml > 효소 1ml >> 총 5.5ml입니다.    총 5.5ml에서 200µl + 증류수 800을 하여 최종적으로 1ml를 사용하며 또한번 여기서 200µl를 피펫팅한 후 페놀황산법을 진행합니다.   standard에 희석배수를 곱해야하는데 희석배수가 이 과정에서 어떻게 되는 걸까요?
회원작성글 applebanan..  |  08.19
Q. 전기영동 gel에 증류수 사용
전기영동 실험에서 gel의 농도를 맞출 때 TAE buffer가 아닌 증류수로 맞추면 결과를 보기 어렵나요?
회원작성글 시원한쥬스  |  08.18
Q. 100~130kDa 사이즈 단백질 transfer 시간
100~130kDa 사이즈 단백질 transfer하려고 합니다. 8%gel에 내렸습니다. 실온에서 메탄올 20% 트랜스퍼버퍼에 100v , 0.6A, 1시간 30분에 해도 될까요? 안에 아이스팩 넣고 30분마다 바꿔줄려고 합니다. 어떤분이 단백질사이즈가 크면 트랜스퍼버퍼에 메탄올을 안넣어야 잘된다고 하는게 그게 맞나요? 알려주세요!!!
회원작성글 oneday  |  08.18
Q. Buffer 뜻
기초적인 질문입니다. Buffer의 뜻이 무엇인가요..? sodium acetate buffer(0.2M)를 만들려고 하는데 sodium acetate(3M)에 비율을 맞춰 증류수를 넣어만든 것이 버퍼가 되는 건가요?    
회원작성글 applebanan..  |  08.18
Q. DNA 전기영동하는데, gel이 자꾸 위에만 밝게 나오네..
DNA 전기영동하고 있습니다. Red safe사용하고 있고요, 기계도 최신버전으로 구매한지 얼마 되지 않았습니다. 3번을 해봤는데 아래같이 계속 위에 부분만 밝게 나오고, 막상 DNA부분은 너무 어둡게 detection되네요.. 도움 부탁드리겠습니다!
회원작성글 라뛔한  |  08.18
Q. Ponceau staining하면 marker만 뜨고 band는 안 나옵니다. 조언 부탁드립니다ㅠㅠ 첨부파일
transfer 끝나고 nitrocellulose membrance에 Ponceau solution으로 염색하면 marker는 선명하게 나오는데 band는 깨끗하게 안 나옵니다.   카세트 삽입할 때 "검은판(음극)-스폰지-3M paper-gel-membrane-3M paper-스폰지-빨간판(양극)" 이렇게 올리고 꾹꾹 누르고 90V, 0.04A, 1 hour transfer 진행하는데요.   transfer는 딱 1번 성공했습니다.    transfer가 끝나고 나면, gel에 아무것도 안 남아있어야 하나요? 그리고 gel에 Ponceau 염색해서 단백질이 남아있는지 판별해도 된다는 글도 있던데요. 그렇다면 transfer 끝나고 gel에 Ponceau 염색 후, 단백질이 gel에 있으면 다시 카세트 샌드위치 만들어서 transfer 진행해도 되는 것인가요?   웨스턴블롯 초보자는 이렇게 속으로 웁니다ㅠㅠ   
회원작성글 아스널  |  08.18
Q. PCR band가 안떠요,,
16S PCR을 하는데 어제는 밴드가 떴는데 좀 희미하게 떠서 오늘 다시 진행했는데 밴드가 하나도 안떠요.   DNA는 colony 따서 chelex에 풀어서 사용하고, 어제 2ul 넣었다가 잘 안떠서 10ul로 다시 실험 진행했는데 샘플 전부 밴드가 안떠요 다른 reagent는 양 맞게 넣었고 다시 여러번 확인해봐도 뭐가 문제인지 모르겠어요ㅜㅠ  
회원작성글 걈쟈  |  08.18
Q. western transfer가 잘 안되는 거 같습니다.
지금까지 50kDa 이하의 안티만 붙여서 거의 성공하였는데 이번에 60~70kDa대와 80~130kDa대 안티를 붙이게 되었습니다. 80~130kDa 안티를 붙일려고 gel 조성은 8%로 하였고 단백질 크기가 너무 크면 트랜스퍼가 잘 되지 않는다고 하여서 콜드룸에서 O/N해야한다고 하여서 냉장고에서 30v 0.15A로 16시간 트랜스퍼하였습니다. 겔에 염색을 해보니 단백질 거의 남아있지 않아서 트랜스퍼가 잘 된줄 알았는데 멤브레인에 워싱 10분씩 3번하고 1차안티 18시간 붙이고 워싱3번하고 2차안티 1시간 붙이고 워싱 3번하고 형광물질 붙이고 이미지를 찍고 확인해봤는데 밴드가 전혀 1도 안보입니다ㅜㅜ 트랜스퍼를 너무 오래해서 멤브레인을 넘어간 걸까요? 머가 문제인지 잘 모르겠습니다.ㅜㅜ 그리고 80~130kDa처럼 단백질크기가 커도 꼭 트랜스퍼 O/N안해도 되나요? 원래 평소에 50kDa 이하단백질을 보려고 할때 12%gel에 트랜스퍼할때 실온헤서 스티로폼 박스에 트랜스퍼통 넣고 주변을 얼음으로 감싸고 통 안에 아이스팩넣고 100v 0.4A 1시간30분을 하였습니다. 30분마다 아이스팩도 갈아주었고요. 근데 트랜스퍼끝나고 멤브레인 꺼낼때 보면 버퍼가 조금 따뜻합니다. 온도에 많은 영향을 받는걸로 아는데 아이스팩 교체 시간을 짧게 해야할지 어떻게 해야될지 모르겠습니다.ㅜㅜ도와주세요.  
회원작성글 oneday  |  08.18
Q. trichrome staining
skeletal muscle의 development를 비교해보려 하는데 H&E를 하려다가 Trichrome staining이라는 것을 알게되었는데 이 염색방법도 근 섬유의 단면적을 비교할 수 는 있겠더라고요 혹시 H&E가 아니라 Trichrome staining으로 skeletal muscle을 본다면 이유가 있을까요?
회원작성글 별헤는밥  |  08.18
Q. 0.045M 의 potassium phosphate buffer (PH 7.5) 10 liter
0.045M 의 potassium phosphate buffer (PH 7.5) 10 liter 를 만들어야하는데  계산을 어떻게 해야할지 잘 모르겠습니다.
회원작성글 똥글똥굴똥글  |  08.18
Q. PCR 관련 조언 부탁드립니다.
안녕하세요. PCR 관련해서 조언을 얻고자 글 올립니다. 다른 DNA plasmid 몇 가지를 동일한 조건으로 PCR을 진행하였는데 다 비슷한 부분에서 band 가 생깁니다.... 원하는 부위의 band가 맞긴한데 나오면 안되는 샘플에서도 band가 나오니, 실험의 결과를 믿기가 어려워 조언 구합니다. 왜 이런 결과가 나타나는건지 아시는 분 있으시면 댓글 부탁드립니다. ㅠ.ㅠ 감사합니다.   동일한 primer F,R (농도 : 100pmol) / 5x PCR Master Mix (rTaq) / DW 를 사용했고, PCR 온도는 서치하면 나오는 기본적인 protocol 에 명시되어 있는 온도로 지정했습니다. (Tm 값은 primer 보다 5도 낮게 진행하였습니다.) * 1, 2, 3 모두 다 다른 샘플입니다.... 1, 3 은 원하는 band가 맞는데 2는 아예 band가 나오면 안된다고 생각했는데 나온거라 1, 3의 결과도 믿을 수 없는 상황입니다....ㅜㅜ    
회원작성글 실험알못  |  08.18
Q. Citrate 버퍼 제조시 sodium citrate??
안녕하세요.   정제일을 하고 있는데 새로운(?) 버퍼 제조가 궁금해 질문남깁니다.   보통의 NaOH 버퍼 등을 만들 땐 분자량과 몰수, L을 계산해서 만들면 되었는데   0.5M citrate 버퍼를 만들땐 sodium citrate dihydrate와 citric acid을 넣어서 pH을 어느정도 맞춘 후 소량만 HCl, NaOH로 pH을 적정 한다 하더라구요.   이 쪽으로는 지식이 없어서 찾아보고 있는데... 왜 이렇게 만드는지와 calculator가 있는지 궁금합니다.    그냥 논문 보면서 비율 보고 넣는건가요???
회원작성글 뚜비뚜삐  |  08.18
Q. electroporation 실험용 G+ competent cell Washing용액 질문입니다 첨부파일
electroporation을 하기위해서 G+ lactococcus lactis competent cell을 제조하고있는데요.  제가 찾은 프로토콜에서 '0.5M sucrose with 10% glycerol'로 washing하라고 나와있는데 각각 오토클레이브 돌리고 0.5M sucrose와 10% glycerol을 얼만큼 pelet에 넣어서 resuspend하는지 이해가 가지 않습니다ㅜ (파일 첨부하였습니다)   그리고 G+프로토콜 찾아보면  - 0.5M sucrose만 사용해서 CC만드는 방법 -10% glycerol만 사용해서 CC만드는 방법 - 0.5M sucrose와  10% glycerol 같이 사용해서 CC만드는 방법 이렇게 크게 세가지 인것같은데, 그냥 방법이 3가지인것인지   아니면 Staphylococcus는 0.5M sucrose로 사용, TSB로 키운 CELL은 10% glycerol만 사용 이런식으로 균주별, medium별로 분류되는것인지도 궁금합니다.
회원작성글 PORI  |  08.18
Q. 박테리아 셀룰로스 균주
박테리아 셀룰로스 관련 실험을 진행하려고 합니다. 박테리아 종을 알아보니 Acetobacter속, Rhizibium속, Agrobacterium속 등이 있고 그 중에서도 Acetobacter xylinum가 생산 수율이 좋다고는 하는데, 쉽게 구할 수 있고 셀룰로스 생산 수율이 우수한 미생물이 어떤 것이 있을지 궁금합니다. 
회원작성글 루토스  |  08.18
Q. DNA Extraction buffer 조성의 해석
안녕하세요   Cell에서 Cytosolic 미토콘드리아 DNA를 분리하려고 한 논문의 버퍼조성을보고 있습니다..   논문 내용은 그대로 적어드리면 Buffer A (100 mM Tris.HCL, pH 8.5, 5 mM EDTA, pH 8.0, 0.2% SDS, 200 mM NaCl, 100 ug/mL proteinase K)   Buffer B (150 mM NaCl, 50 mM Hepes (pH 7.4), and 25 ug/mL digitonin)   이렇게 되어있고 저는 이 두개버퍼를 만들어야 합니다   그런데 제가 이해하기로는 최종 버퍼의 조성이 저러저러하다라고 보고 최종 볼륨에서 저 농도에 맞게 만들면 되겠구나 생각했는데요  pH가 여러개네요... 제가 가진 Tris, EDTA, Hepes는 모두 가루시약입니다.. 가루시약제품 자체의 pH를 말하는것인가요..?
회원작성글 ELFAMA  |  08.18
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