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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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Q. cDNA 합성 후 qPCR 과정에서 정량 관련 질문드립니다.
안녕하세요.. 초보 석사과정 생입니다. qPCR을 여러번 진행 중에 있는데 어려움이 있어서 질문드립니다. cDNA 합성 시 nanodrop으로 total RNA를 정량하여 1ug으로 맞추고, RNA 양이 적으면 가능한 대로 맞춰서 합성하고 있습니다. 합성할 때는 모든 sample의 RNA양은 갖게 맞추고 있습니다. 문제는 RNA의 양을 맞춰서 cDNA를 합성하고 qPCR을 할 때 GAPDH의 Ct값이 sample들 사이에서 많이 다르다는 것인데요.. qPCR은 duplicate로 진행하고 있는데 qPCR 시의 문제는 아닌 것 같고, cDNA를 합성할 때의 문제인 것 같은데 nanodrop으로 확인을 하고 양을 맞추어 합성을 하는데도 이렇게 달라질 수 있는걸까요 ㅠ_ㅠ(Ct 값으로 2정도 까지 차이가 있습니다) 혹시 nanodrop에서 RNA로 정량되는 수치가 틀렸을 수 있나요? 선배님들의 답변 부탁드립니다.. 감사합니다!
회원작성글 주먹밥김  |  09.16
Q. 세포의 비성장속도를 구하는 이유가 뭔가요?
미생물의 생장곡선 중 대수기의 성장 속도를 구할 때, 그냥 시간에 따른 세포수의 증가량을 구하는 것이 아니라 이 값에서 초기 세포수를 나누어 비성장속도를 구하는 이유가 무엇인가요? 명확한 이유가 궁금합니다!
회원작성글 스윙스약혼녀  |  09.16
Q. 디스크 확산법 실험 중 특이한 환 형성 문제 첨부파일
안녕하세요 최근 어떤 샘플의 항균력을 테스트하기위해 디스크 확산법 실험을 하고있는 중 대장균에서 특이한 환이 계속 형성돼서 질문드립니다. 제 예상에는 특이한 환이 형성되는 샘플들이 모두 글리세롤을 함유하고 있는데 글리세롤에 의해 대장균의 대사가 변하여 phynotype이 변한걸로 생각하고 있습니다. 사진을 첨부해드리니 이런 환을 보셨거나 원인을 아시는 분이 있으시면 알려주시면 감사하겠습니다. ㅠㅠ
회원작성글 매일매일을즐겁게  |  09.16
Q. 0.5M EDTA 10µL 제조법
시약 제조법에 대해 공부를 하고 있는데, 0.5M EDTA 10µL의 제조법이 궁금합니다.
회원작성글 JHS3219  |  09.16
Q. 항생 물질 넣은 배양 배지 실험 급합니다ㅠ
고등학생입니다. 내일 급하게 편백나무수(편백나무잎을 수증기 증류해 얻어낸 하이드로졸)를 넣은 LB배지를 제작한 뒤 그 위에 생활용품으로부터 채취한 세균시료를 도말, 배양시켜 증식 정도를 확인하는 실험을 진행하게 되었습니다. 배지는https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ 링크를 참고해 만들 예정입니다. 여기서 궁금한 점이 생겨 질문드립니다. 1. 첨부한 링크를 보니 항생제를 증류수 1mL에 일정한 농도로 희석해서 한천 혼합물에 넣던데 편백나무수를 증류수에 희석하는 과정없이 그냥 1mL를 넣어도 될까요? 2. 편백나무수가 항생제처럼 배지를 제작할 때 넣어도 항균효과를 나타낼 수 있을까요? 3. 만약 학교 실험실에 펩톤이나 트립톤, 카제인 펩톤이 없다면 대신 분유를 사용해도 될까요? 안된다면 그밖에 사용할 수 있는 쉽게 구할 수 있는 재료 추천 부탁드립니다. 4. 필요한 준비물이 학교 실험실에 하나도 구비되어 있지 않다면 원래 있는 LB배지라도 녹여서 편백나무수를 넣은 배지를 새롭게 만들고 싶은데.. 괜찮을까요? 5. 배지를 제작 후 하루동안 건조시켜야 하는 건 알지만 급한 경우에는 접시에 넣고 30분 정도 굳힌 뒤 바로 세균 배양 실험을 진행해도 되나요? 미리 감사드립니다.
회원작성글 나는할수있어  |  09.16
Q. 디스크 확산 실험
디스크 확산 실험을 하려고 하는데 항생물질인 강황물질, 계피가루를 에탄올 70에 희석해야한다고 하던데 에탄올 70만 가능한 이유가 무엇인가요 ??
회원작성글 바다강  |  09.16
Q. 구강상피세포 그람염색 질문합니다!!
고등학생입니다. 구강미생물에 대한 탐구 실험을 하려 하는데 입안에 면봉으로 문질러 구강상피세포를 떼어낸 후, 그람염색 실험을 하면 그람양성균과 음성균을 현미경으로 확인할 수 있는건가요? 많은 그람염색 실험에선 그람양성균과 그람음성균을 분리해서 배양한 다음 실험하던데, 현실적으로 균 배양은 힘들것 같아서 단순 구강상피세포로도 그람염색 균 관찰이 가능한지 궁금합니다 정리하자면 1. 면봉으로 떼어낸 구강상피세포로 그람염색 실험해서 현미경으로 그람양성균 음성균 관찰이 가능한지 2. 꼭 배양이 필요하다면, 별다른 장비 없이 구강 세균 배양하는 법 전문적 지식이 없는건 맞지만,,,자세하구 친절하게 설명해주시면 넘 감사할것같아요ㅠㅠㅠ
회원작성글 leeseo  |  09.15
Q. water bath 스펀지
cell에 자세히 보면 점이 막 생겨있는데 컨탐된 것 같습니다. 문제가 water bath에 medium 데울때 한번 엎어져서...인 것 같습니다ㅠㅠㅠ 미디엄 데울때 안넘어지게 끼우는 고정 스펀지가 있는지 궁금합니다. 플라스크에 끼우는 추는 생각보다 비싸서... 바이알 끼우는 것 같은 스펀지를 찾고 있습니다!
회원작성글 멍게  |  09.15
Q. PDL, PLL coating 차이와 형태 질문드립니다.
안녕하세요, 저는 HEK293T를 이용하여 confocal sample을 준비중에 있습니다.   저희 실험실에서는 HEK293T을 주로 이용해왔으나, 여태까지 coating되지 않은 plate만을 사용해 왔기 때문에 Poly D lysine이나 Poly L lysine에 관해서는 잘 알지 못합니다.   그런데 찾아보니, 일반적인 well plate에서도 transfection시에 coating된 well을 사용하시는 경우도 있더군요. 저희는 그냥 최대한 조심히 control하여 실험 step마다 cell이 최대한 떨어지지 않게 하는 편입니다. 물론 culture시간도 최대 4일 이내로 짧아서, coating이 필요 없는 것 일수도 있습니다.   하지만 confocal sample을 준비하는데에는 coating이 필요할 것 같아서 알아보고 있습니다. 처음 cell을    Hela cell을 이용하여서는 sample준비를 여러번 해 보았지만, 해당 cell은 부착력이 매우 강해서 coating없이도, 거의 떨어지지 않더군요.. 하지만 HEK은 워낙에 잘 떨어지는 cell이라 반드시 coating이 필요할 것 같습니다.   여기서 제가 드리고 싶은 질문은,     1. PDL vs PLL 제가 찾아본 결과 PDL은 다른 enzyme에 의해 분해되지 않으며, PLL보다 덜 toxic하다고 나와있었습니다. 그러면 PDL이 무조건 더 좋은거 아닌가요..? 가격차이도 거의 없는 것 같았습니다. 근데 대부분의 lab에서는 PLL을 사용하는 것 같더라고요. 혹시 이 둘에 큰 차이가 있을까요? PDL coating glass 위에서는 cell이 잘 안자란다거나..   2. Powder vs Solution PDL, PLL 모두 powder 형태와 solution 형태로  팔고 있었습니다. powder형태는 적당히 DDW에 녹이고 filteration 해서 사용하는 것 같고, solution은 바로 dilute해서 사용하면 되는 것 같았습니다. 혹시 둘 중 뭘 사는것이 좋을까요? 저희 랩에서는 confocal로 imaging을 하는 것이 주 분야는 아니지만, 가격차이가 크게 난다면 Powder형태로 구매하는 것이 좋을것 같다는 생각은 하고 있습니다.   3. 재활용..? 또 많은 분들께서 PDL, PLL은 재활용이 가능하다고 하시던데.. 이게 무슨 뜻인지 잘 모르겠습니다. coverglass를 담갔던 PDL, PLL을 syringe 등으로 suction해서 다시 쓴다는 의미인가요..? 그러면 contam 걱정은 없는 건지.. 궁금합니다.     깨알 팁이라도 좋으니 조금이라도 도와주시면 정말 감사드리겠습니다. 감사드립니다!
회원작성글 neuronal p..  |  09.15
Q. E.coli competent cell GYT
안녕하세요 E.coli competent cell 제작 과정중 glycerol로 washing 과정을 거친후 GYT를 분주하는걸로 protocol이 알려져있는데 GYT를 넣어주는 이유를 알수있을까요?
회원작성글 겨율까지  |  09.15
Q. B16F10 cell 분양 가능하신 분 있을까요?
안녕하세요. 세포배양은 초보인 석사과정생입니다. ATCC에서 산 b16세포를 배양 후 동결시키고 이번에 풀었는데 세포가 부착이 되지 않고 다 죽었습니다. 5% DMSO를 넣었고, 한 vial에 40만개씩 얼렸습니다. 너무 적은양을 얼려서 그런걸까요? 혹시 early passage인 b16f10 세포 분양 가능하신 분 계실까요? Early passage가 아니여도 좋습니다! 분양 가능하신분 sgy0527@gmail.com으로 연락 바랍니다!!
회원작성글 복동  |  09.15
Q. 1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL 제조 방법
1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL에서 pH가 8.5-8.8인데 여기서 HCI을 몇 mL를 넣어줘야 하는지 궁금합니다.ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. cell stock 용 glycerol 제작질문 입니다.
cell stock 용 glycerol 제작질문 입니다. 실험실에서 사용하는 60% glycerol 제조하려고 합니다. 제조 후 그냥 사용해도 되는건지.... 아님 주사기로 0.2um filter 후 사용해도 되는 건가요...????  
회원작성글 mito59  |  09.15
Q. 2차 Nested PCR 진행시 NC, PC(negative control, positive control) 샘플링
2차 Nested PCR 진행시 NC, PC(negative control, positive control)도 시료와 같이 1차 PCR 진행했던 것에서 샘플링 해야 되나요?
회원작성글 그리심  |  09.15
Q. EDTA와 Na2EDTA 차이점이 궁금합니다.
EDTA와 Na2EDTA 차이점을 알고싶으며 Na2EDTA대신에 EDTA를 사용할 때 양 계산은 동일하게 적용되는지 궁금합니다. 
회원작성글 녹나무  |  09.15
Q. 잘 안지워지는 네임펜 알려주세요
모나미 네임펜은 너무 쉽게 지워져서, 잘 안지워지는 네임펜 뭐 쓰시는지 궁금합니다.   샤피 네임펜이 그나마 덜 지워지는 것 같은데, 많이 판매하는 ultrafine(0.3mm) 은 너무 앏고 fine(1mm)는 너무 두껍고, 찾아보니 extrafine(0.5mm) 가 있는데, 우리나라에서는 판매을 안하네요.   해외직구라도 해야하는지, 그외 좋은 펜 있으면 추천 부탁드려요~
회원작성글 색연필  |  09.15
Q. HPLC 고수님들 도움 부탁드립니다ㅜㅜ
안녕하세요 HPLC 압력 문제가 지속되어서 답답한 마음에 질문 드립니다. 용매조건 A solvent 물 B methanol:ACN:2-propanol = 10:3:1 입니다. 초기에 A:20% B:80% 로 시작해서 40분에 걸쳐서 gradient로 A:0% B:100% 로 바뀌는 조성으로 분석하고 있습니다 이상하게 B용매 쓴 라인이 얼마 분석하다가 갑자기 압력이 엄청 떨어지면서 분석이 중지됩니다. D라인으로도 바꿔서 다시 하니 또 그 라인이 문제가 생겨서요. 업체에서는 노후된 펌프문제라고 하는데, 뭔가 용매 조성이 문제가 될수 있는지... 지금 고장나버리면 실험일정에 큰 차질이 있어서요ㅜㅜ 논문을 참고했습니다만ㅠㅠ 고친다 하더라도 새 펌프도 바로 망가질까봐서... 조언 부탁드립니다ㅜㅜㅜ
회원작성글 ggomi611  |  09.15
Q. 10% SDS 20µL 시약 제조법을 모르겠어요
이번에 실험을 하게 되어서 10% SDS 20µL의 시약 제조법을 알아야 하는데 관련 내용을 찾기가 힘들어서 이 제조법에 대해 아시는 분들 답변 부탁드립니다. ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. 동물이식시험에서 생분해성 결과로 체내 생분해성을 계산할 수 있는 방법이 있나요?
안녕하세요.  생체재료를 동물모델을 통해 이식 후 생분해성을 확인한 뒤, 그 결과로 체내에서의 분해성을 계산하는 문헌들이 있다고들었습니다. 이런 문헌이나 위의 내용을 분석해주는 시험기관이 있으면 알려주세요.
회원작성글 영화사랑은규  |  09.15
Q. pH 7.4 buffer 몰농도 계산 도와주세요
안녕하세요,    pH 7.4 PBS 몰농도 계산 중에 이게 맞는 답인가 싶어 글 올립니다.   제가 만든 7.4 PBS의 몰농도를 계산하고 싶은데 혹시 아래 레시피로 만들었을 때, 몰농도가 0.1M 맞나요?!   혹시 계산방법도 알려주시면 너무 감사하겠습니다 ㅠㅠ   1. 염화나트륨 8g(0.137M) 2. 염화칼륨 0.2g(0.0027M) 3. Sodium Phosphate Dibasic 1.44g(0.01M) 4. Potassium Phosphate Monobasic 0.245g(0.0018M) -> 800mL D.W.에 2~4를 넣고 녹이고(A용액), 200mL D.W.에 1을 넣고 녹인 후(B용액), B 용액으로 A 용액의 pH를 7.4로 조정  
회원작성글 노력노력노력  |  09.15
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