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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
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Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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Q. 동일 제품 전기영동 후 band 위치가 다르게 나타나는 이유를 설명해 주시면 감사합니다.
안녕하세요. 전기영동 분석 중인 새내기 실험자 입니다. 전기 영동 분석 중 이상하게 분석이 되어 의문점을 찾아보았으나, 해결되지 않아 여기에 질문 드립니다. 제가 분석한 시료는 총 4가지로 crude, 표준품(sigma 제품), 시제품(상용된 제품)1,2 총 4개의 제품을 분석하였습니다. 참고로 이 단백질의 크기는 53KDa입니다. 각각의 밴드 위치는 crude : 53KDa부근 표준품 : 67KDa부근, 시제품 1,2 : 73KDa 나왔습니다.(반복 분석하여도 같은 결과입니다.) 모두 같은 단백질(회사는 다름)인데 전기 영동 위치의 밴드가 다르게 나타나는 이유가 있는지 궁금합니다. 답변해 주셔서 감사합니다. 좋은 하루 보내세요.        
회원작성글 파랑은동색  |  2021.08.18
Q. 계산 확인 부턱드립니다.
그런데 25ug으로 맞춰서 내리고 싶은데   425uM인 단백질의 갖고 있다고 했을때 어떻게 하면 25ug으로 맞출 수 있을까요?  참고로 단백질 사이즈는 30kDa입니다.   그럼 30mg/ml = 1mM 12.75mg/ml = 425uM 12.75ug/ul가 25이되려고 하는거니까 1.96ul 넣고 DW를 넣어 total 10ul로 맞춰준다(10ul안에 amount는 변함 없이 25ug이죠?) 5x dye를 사용 할 꺼라서 2ul를 넣는다.   이 방법이 맞을까요...?  
회원작성글 초보석사쌤  |  2021.08.17
Q. 전기영동 실험 중 단백질 band가 보이지 않아요.
안녕하세요. 화학 합성하다가 갑자기 단백질 분리를 하게된 연구원입니다. 제가 하고있는 단백질은 hyaluronidase입니다. 전기영동을 하였을때 STD 제품(sigma 제품)은 band가 보이나, curde 제품 및 유통중의 상품은 band가 보이지 않았습니다. 문제를 해결하기 위해 박사과정 지인에게 물어보고 유투브나 관련 책을 봐도 band가 나타나지 않는 해결하지 못하여 여쭙게 되었습니다. 전기 영동 방법은  알려주는 방식을 진행하였습니다. Gel은 Tris-Glycine-PAG, 12%, 23~100KDa의 유통 제품을 사용하고 있으며, 사용 전압은 60mA, 180volt로 시작 300volt까지 1.0시간정도 진행합니다. 마지막으로 Hyaluronidase의 분자량은 53,000정도인데 STD band는 73KDa부근에서 band가 나타나는지 궁금합니다. 질문에 관심을 가져주셔서 감사합니다. 오늘 하루도 좋은 하루 보내세요.        
회원작성글 파랑은동색  |  2021.08.10
Q. uM -> ug
안녕하세요. 제가 단백질을 uM로 나타냈는데 sds내릴려고 합니다, 그런데 25ug으로 맞춰서 내리고 싶은데   425uM인 단백질의 갖고 있다고 했을때 어떻게 하면 25ug으로 맞출 수 있을까요? 최종 볼륨은 500ul만 있어도 충분 할 것 같습니다. 참고로 단백질 사이즈는 30kDa입니다.   이해가 가능하게 풀이과정도 같이 적어주실 수 있을까요?? 감사합니다.  
회원작성글 초보석사쌤  |  2021.08.04
Q. ELISA 실험 질문이 있습니다.
안녕하세요.  실험을 진행하고 있는 대학원생입니다. 이번에 ELISA 실험을 준비하고 있습니다. protocol을 읽어보니 standard, sample을 넣고 gently shaking 하라고 되어있는데,.. 선배님들은 혹시 어느정도 rpm에서 shaking하시는지 여쭤봐도 괜찮을까요..?
회원작성글 나는몰라요  |  2021.08.01
Q. 상온에서 아밀레이스가 변성 가능한가요?
온도, pH에 따른 아밀라아제 변성 실험을 했는데요, 낮은 온도에서 보관하다가 꺼내서 시간이 좀 흐른 뒤에 실험을 진행했는데, 일부 아밀라아제가 변성되어서 분해가 안돼서 베네딕트로 황적색이 안나오고 요오드로 청남색이 나오더라고요..  결과가 안나오더라고요. 근데 전체 아밀라아제가 변성된게 아니라 일부가 변성되어서 잘 모르겠어요..   상온에 있어도 아밀라아제가 변성되어버릴 수 있나요? 그것도 일부만?
회원작성글 혜옹  |  2021.07.26
Q. Amicon을 이용해 단백질 농축실험중인데 잘안돼요 제대로 한건지 잘못된게 있는지 봐주실수있나요?
his-trap을 이용하여 Affinity chromatography릉 진행한후, imidazole이 들어간 단백질 100kDa를 PBS 로 buffer change하는 동시에 concentration 진행중인데 농도가 단백질 농축 이후 loss가 큰것같아서요ㅠㅠ 지금 amicon-15ml 3k짜리(저번달에 두번정도 사용했던것) 에 protein과 pbs함께 넣고 3000rpm에 40분정도 2번 돌렸습니다 (생각보다 너무 안내려가서) . 일단 3k짜리 밖에 없어서 그제품으로 진행을 했습니다ㅠㅠ
회원작성글 꽃은율  |  2021.07.18
Q. 유전자 재조합에 대해 궁금한게 있습니다.
안녕하세요, 유전자 재조합 관련하여 궁금한 사항이 있어서 여기까지 오게되었습니다.  동물세포 (CHO/HEK 등) 를 이용(유전자재조합)하여 protein을 만드는 기작과 bacteria 를 이용(유전자재조합) 한 기작은 어떤 차이가 있나요??? 그리고 결론적으로 재조합된 미생물로는 바이러스물질(virus particle/spike protein) 을 만들 수 없을까요???  
회원작성글 지아코  |  2021.07.14
Q. Enzymatic Assay of PROTEASE 로 IC50 구하기 첨부파일
Enzymatic Assay of PROTEASE Casein as a Substrate 로써, 첨부 파일에 있는 프로토콜 대로 진행해서 천연물의 alpha-chymotrypsin IC50 값을 구하려고 합니다. 첨부 파일로 하려면 IC50 값을 구하려면 어떻게 계산을 해야할까요?? 이쪽 전공자가 아니기에 너무 어렵네요...ㅠㅠ  
회원작성글 키티꼰쥬  |  2021.07.14
Q. Fold molar excess개념?
안녕하세요.  Fold molar excess 개념에 대해서 궁금한 것이 있어서 질문남깁니다! 인터넷을 찾아봐도 그에 대한 설명들이 없는것 같더라구요 ㅠㅠ   최근에 EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin(Thermo, #21327)을 주문해서 받았는데  1.5 mg/ml IgG , IgG MW = 150,000 10 mM Sulfo-NHS-LC-Biotin (5.566 ug/ul) , Sulfo-NHS-LC-Biotin MW = 556.6 이며,  1.5 mg/ml의 IgG를 biotin labeling을 20-fold molar excess로 사용하라고 되어있었습 니다. Fole molar excess의 개념은 무엇이며 이 경우 어떻게 계산해야 할까요? 대학원 첫학기 들어오고나서 이 개념은 처음 접해보는 것이라 경험있는 많은 선배님들의 도움 부탁드립니다!! 감사합니다. 
회원작성글 버들  |  2021.07.06
Q. Millipore amicon ultra 필터에 관해서
고장이 너무 잘 나서 용액을 넣으면 원심분리돌리기도 전에 필터에서 샙니다. 고장안나게 하는법이 있는지 그리고 혹시 수리가 가능한지 궁금합니다 답변부탁드려요!
회원작성글 응애에요  |  2021.07.05
Q. Co-IP를 진행할 때 실수로 lysis buffer에 protease inhibitor cocktail을 못넣었습니다.
저번에는 NP-40 0.5% lysis buffer에 protease inhibitor cocktail을 1% 넣고   Co-IP를 진행했을 때는 성공했는데    이번에는 실수로 protease inhibitor cocktail을 lysis buffer에 첨가하지 못했습니다.    protease inhibitor cocktail을 넣지 않으면 실험 결과에 많은 영향을 끼칠까요?   아니면 조금이나마 protein interaction을 확인할 수 있을까요? ㅠㅠ 
회원작성글 레비나스  |  2021.07.04
Q. Acrylamide gel에서 원하는 단백질 추출법
Acrylamide gel에서 원하는 size의 단백질을 추출하기위해서 Acrylamide gel을 녹여서 추출하는 법을 알고 싶습니다! 위와 같은 방법으로 추출했을때 단백질에 문제는 없는지도 알고싶습니다.
회원작성글 만식이  |  2021.06.29
Q. 사이토크롬c는 조효소인가요?
전자전달계에서 각 복합체에 사이토크롬 c를 비롯한 사이토크롬들이 있는데 이들은 모두 조효소인가요? 사이토크롬이 조효소라면 전자전달계의 복합체들은 보결분자족이라고 할 수 있는건가요?
회원작성글 곤듀  |  2021.06.26
Q. SDS-PAGE할 때 샘플이 다 내려간 후 젤을 빠져나가면 어떻게 되나요?
SDS-PAGE를 처음으로 진행하고있는데, 다름이 아니라 샘플이 끝까지 내려가고 젤을 빠져나간 것은 의미가 없다고 하는데 왜 의미가 없어지는지 궁금합니다! 감사합니다!
회원작성글 banana  |  2021.06.21
Q. Fluorecence portable microscope에 대해 잘아시는분 ㅠㅠㅠ 첨부파일
slide glass에 gold와 al2o3를 코팅하여 antibody, antigen, antibody를 차례로 올리는 sandwich assay를 이용하고 있습니다. 셋이 결합되는 것은 확실한데 형광현미경을 사용하는 것이 처음이라 측정하는데도 이렇게 나오네요... 혹시 알려주실분 계신가요 ㅠㅠㅠ
회원작성글 석이이  |  2021.06.21
Q. silver stain 이후, 단백질 질량분석시, 겹치는 밴드에 관하여...
아둔한 후배가 선배님들께 여쭙습니다. Co-IP를 실시한 후 단백질을 Silver stain으로 염색하였습니다. 중요한 단백질이 Non-specific 단백질로 인해 밴드가 덮여버렸습니다만, 이때 MS analysis를 하기 위해, 분석회사에 의뢰하여 보낸다면, 겹친 밴드에서 중요한단백질과 Non-specific 단백질을 구분해 낼 수 있을까요?
회원작성글 penda  |  2021.06.21
Q. Glycosylation 종류 질문
안녕하세요. Glycosylation에서 요즘 공부 중에 있는 사람입니다. 제가 초보라서 지식을 계속 공부 중에 있는 상황인데, 약물의 delivery 또는 Stability 향상을 위해서 약물과 당류의 Glycosylation 결합을 알아보고 있는데, 혹시 수소 결합도 Glycosylation 결합으로 분류를 할 수 있는지 문의 드립니다.  또한 Glycosylation 전문가분이 계신다면 Glycosylation 결합 종류와 결합을 잘하는 반응기 알려주시면 감사하겠습니다. (예를들어 약물의 NH2와 당류의 OH가 잘 결합한다.)   감사합니다.  
회원작성글 길드  |  2021.06.12
Q. kinase assay 질문
안녕하세요  석사 1학기차 대학원생입니다.. 박테리아의 ser/thr kinase를 PCR해서 pET에 올린 후에 BL21에서 expression 시킨 후 단백질을 purification 하였습니다. 이게 kinase가 맞는지 확인하려고 찾아봤는데 Western blot으로 확인하거나 kit를 쓰더라구요 phosphatase같은 경우에는 pNPP를 substrate로 써서 흡광도를 재서 phosphatase activity를 하는걸로 알고있는데 결국엔 Western blot으로 avtivity를 확인하겠지만.. 그 전 단계로 pNPP처럼 간단하게 ser/thr kinase activity를 확인할 수 있는 substrate가 있을까요? 보통 luminescence를 쓰시나요..? 답변 기다리겠습니다!
회원작성글 ea  |  2021.06.09
Q. 제한효소를 실온에 보관했습니다
nsiI 제한효소를 실수로 실온에 2일정도 보관을했습니다 메뉴얼상 보관온도는 -20도 이고요.. 이거 버려야할까요? 값이 꽤 나가는데 걱정이네요..
회원작성글 Jamie Rich..  |  2021.06.03
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