[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
이엔셀
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 장재봉 교수
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. 알칼로이드로 단백질 침전하는 법
교수님이 단백질 정제 분리 할 때 알칼로이드를 쓸 수 있다고했는데, 잘 이해가 안되어서요... 알칼로이드스 식물에서 나오는 유기분자단이죠?? 여기서부터 막히는 듯한데 ㅠㅠ좀 도와주세요...
회원작성글 우성아현빈아  |  2019.12.18
Q. Protein extract 한 cell sample이 lysis가 잘 안된 것 같은데, 개선할 수 있는 방법이 있을까요?
안녕하세요. 석사과정 중인 학생입니다. mouse cell에서 western blot을 하기 위해 protein extraction을 하였습니다. 과정은 다음과 같습니다. 1. RIPA buffer를 cell pellet에 분주한 뒤 pipetting한다. 2. 30분간 ice 위에서 incubation 3. 12000rpm, 4oC, centrifuge  4. 상층액만 저장한다. 이후 western blot을 하였는데, gel 전기영동 후 coomassie 염색을 해보니 50~70kDa 위치에 항상 두껍게 밴드가 뜨고 그 외에는 밴드가 아예 뜨지않았습니다. 이 밴드를 교수님께 보여드렸는데 교수님께서는 cell lysis가 잘 안된 것 같다고 하십니다.    제가 샘플을 새로 만들 수는 없는 상황이라 이 샘플을 살려야합니다. 혹시 현 상황에서 이 샘플을 개선할 수 있는 방법이 있을까요? 다른 정보들을 많이 봐도 조건을 바꿔서 다시 샘플을 만드시더라고요.. 저희는 지금 연구실 상황 상 샘플을 다시 만들수는 없어서요.. 꼭 답변주시면 감사하겠습니다..ㅠ
회원작성글 dwre  |  2019.12.06
Q. Na2HPO4*7H2O, MnSO4*4H2O
실험실에 Na2HPO4*12H2O와 MnSO4*7H2O가 있습니다. MnSO4*4H2O 0.112g을 증류수에 녹일거고요. Na2HPO4*7H2O 2.45g을 증류수에 녹이려고 합니다. 가지고 있는 시약으로 얼마를 넣어줘야 할까요?
회원작성글 ldk5351  |  2019.11.25
Q. 단백질 농동 정량 관련
단백질 농도 정량 방법이 잘 되고있는지에 대해 의문이 생겨서 글을 써봅니다..   300mg샘플에 100ul 추출버퍼 이용해서 총단백질 추출한 다음 농도 계산하는데 값이 이상한거 같습니다..   우선 BSA 1mg/ml 농도로 시약 준비 한다음 standard curve 만들었습니다. 1. DW 790 ul + 2. bio-rad, protein assay dye 200ul + 3. sample/ standard at different concentraion 그래서 standard는  y=0.0006x-0.0232 구했습니다. sample 흡광도는 1.339 나왔구요 그래서 y값을 구하면 2270.333 나옵니다.. 그런데 샘플을 10ul 넣었으니.. 227.033 ug/gl가 되는건가요?  
회원작성글 SEKDEL  |  2019.11.20
Q. protein 추출
media를 제거하지 않은 상태에서 pbs wsahing 후 실험을 진행했더니 protein이 거의 추출되지 않았습니다. media가 protease inhibitor에 어떤 영향을 준걸까요ㅠㅠ
회원작성글 크레신  |  2019.11.14
Q. UV spectrophotometer, Bradford 단백질량
단백질 정량을 하는 도중 표준검량선과 sample 단백질량도 잘 측정했다고 생각했습니다. 하지만 실제단백질량을 받았는데, mg/ml단위가 아닌 5mM glucose 로 받았는데요.  1M이 1mol/L이고, glucose의 분자량이 180.16이기 때문에, 5mM glucose = 5m mol/L glucose = 900.8mg/L = 900800mg/mL이 맞나요..? 근데 UV 측정값은 -가 나왔습니다. 제 계산식이 잘못된건가요? 기본적인 지식인데 질문드려서 죄송합니다. 자꾸 여기서 헤매고 있네요ㅠㅠ
회원작성글 택구  |  2019.11.12
Q. 미생물 배양 후 단백질 농축하려고 합니다.
안녕하세요. 실험을 시작한지 얼마 안 된 학생입니다. 미생물에 대해 공부하고 있지만 아직 자세히 알지 못해서 설명이 서툴더라도 이 해 부탁드립니다. 제가 분양받은 leuconostoc 균주를 가지고 배양한 후 상층액을 얻었습니다. 그리고 그 상층액으로 물질 반응을 시켰는데 반응이 잘 일어나지 않아 상층액을 농축하여서 다시 진행해보려고 합니다. amicon 이라는 제품을 사용해서 농축하려고 하는데 membrane의 pore size를 알아 야 하더라구요.. 재조합이 아니라 그냥 분양 균주도 단백질 크기를 알 수 있나요?? 논문을 찾아보고 있지만 개념이 잘 서지 않아서 이렇게 질문 드립니다. 전문가님들 제발 조언 부탁드리겠습니다!!! 감사합니다 !!
회원작성글 해징  |  2019.10.31
Q. SDS PAGE에서 글라이신
Stacking과 running구분할 때 gly이온말고 다른 아미노산 이온이나 양쪽성 분자이온을 쓰는 경우는 없나요?? Ph만 바꿔주면 다른 것도 가능하지 않을까 싶은데 극성 아미노산이나 그런게 영향을 끼칠 수도 있을아요???
회원작성글 swoon  |  2019.10.22
Q. Reporter assay 및 Protein 실험관련해서 질문올려요
현재 protein extraction 이후 이용될 실험들에 대해 조사 중인 1인입니다. WB이나 SDS-PAGE나 등등은 이해가 되는데 어떤 제품(protein extract buffer)에서 reporter gene assay를 할때 protein extract가 쓰인다고 언급을 하였더라구요 protein lysate가 어떻게 적용이 되는지 아시는 고수님들 답변 부탁드립니다. reporter assay를 보면 reporter gene이 따로 있으니 세포내에서 enzyme이 형성 될꺼고 굳이 cell lysis하지 않고 dish에 substrate 넣어 주면 확인이 가능할꺼 같은데 protein lysate가 이용이 된다는게 이해가 되지 않네요ㅠㅠ
회원작성글 영빙구  |  2019.10.22
Q. 조직 상온보관 괜찮을까요..?
제가 mouse 조직을 실수로 4시간정도 상온에 방치해버렸는데... 어떡하죠..? 우선 발견하자마자 -20도로 보관하긴했지만 이 조직을 protein extract 해서 western blot 진행해야하는데 이미 activity가 다 떨어졌을까요...? 
회원작성글 척척석크사  |  2019.10.20
Q. B-galactosidase에 대해 여쭤보고 싶습니다~
안녕하세요. 질문 드립니다.   B-galactosdiase 즉, lactase라고 불리는 이 효소는 lactose를 galactose와 glucose로 분해한다고 알고 있습니다. 그런데 검색해보니 영어로 되어있어 제가 해석을 잘못한건지 모르겠지만 galactose가 있는 결합을 분해한다고 되어 있어서, 혹시 이 효소는 galactose가 포함되어 있다면 다 분해를 하는건가요? galactooligosaccharide라던지, 아님 galactose가 함유된 다당류 등은 이 효소에 의해 분해될 수 있을까요?
회원작성글 dbwn7819  |  2019.09.27
Q. protein refolding 과정 이전의 washing(isolation)step 문제
안녕하세요? 현재 Insoluble protein을 E..coli에서 발현 후 solublization 하기 위해 연구중인 학부연구생입니다. 여러개의 Disulfide bond가 존재하는 포유류 유래 단백질입니다. Histag 단백질과 untagged stock 모두 보유중입니다. MBP의 경우엔 절단 후 수율이 너무 낮아 중단했습니다.   학부 공부도 하고 여러가지 실험 배우면서 하긴 했지만,. 저희 실험실에서 이 프로젝트는 거의 반년이 넘어서도 진전이 없습니다.. 그래서 dialysis 를 이용한 refolding 방법을 시도해보려 하는데, 다른 논문에서는 target protein을 바로 8M urea로 Lysis 하지 않고 다른 버퍼로 lysis > sonication > centrifuge 과정을 반복했습니다. 실제로 현재 target protein은 pellet에 높은 비율로 존재하고, Supernatant에는 다른 잡밴드들이 많이 나오기에 refolding 과정을 용이하게 하려면 먼저 pellet을 분리한 뒤 solubiliztion 하는게 낫다고 판단했습니다(이전 질문에서도 들은 답변을 참고했습니다) 그래서 저는 일반적인 Lysis buffer (50 mM Tris HCl, 100 mM NaCl, pH 7.5)으로 Lysis 한 뒤 sonication (20 cycle) 진행 후 13,000 rpm 으로 20분간 원심분리 한 뒤 supernatant를 분리하고 target protein이 존재하는 pellet에 이전 Lysis buffer에 8M urea가 첨가된 Lysis buffer 로 resuspension 했는데,, 약간 갈색 투명의 덩어리들이 생기고 아무리 교반하고 피펫팅해도 덩어리가 풀어지질 않아서 실험을 중단했습니다..  한번 sonication 및 원심분리 한 pellet은 8 M urea 로 solubilization이 불가능한건가요? 아니면 8 M urea 가 첨가된 Lysis buffer에 Triton X-100 을 첨가하지 않아서 pellet이 녹지 않은걸까요? 답변 남겨주시면 정말 감사하겠습니다. 요즘은 차라리 P. pastoris를 이용해서 발현하는 방법도 생각중이지만, 저희 실험실에서 Yeast expression을 한번도 해본 사람이 없어서 막막하여 최대한 E.coli 에서 expression 하는 방법으로 생각중인데 정말 쉽지 않네요..
회원작성글 Eternal so..  |  2019.09.22
Q. 서로 다른 농도의 두 층의 배지를 이용하는 이유가 무엇인가요?
항균 펩타이드 추출을 위한 선행연구 및 논문을 읽고 있는데, 활성측정방법으로 서로 다른 농도를 포함한 두 층의  배지를 이용하여 실험을 진행하는데, 항균성을 알아보기 위해서 왜 이러한 배지를 사용해야하는지 이유가 궁금합니다. 해당 논문 링크 걸어두겠습니다. 항균활성 측정방법 및 사용균주 부분에 해당 실험이 나와있습니다. http://www.e-kfas.org/Upload/files/kfas/6.%20%EC%84%9C%EC%A0%95%EA%B8%B8.pdf
회원작성글 sonnybk  |  2019.09.10
Q. 저분자 콜라겐 펩타이드 정제법(sephadex)
   안녕하세요.  스타트업 회사에 입사하며 난생 처음 단백질 정제에 대해 공부한 지 이제 2주차인 연구원입니다 ㅠㅠ    해양성 콜라겐을 추출하여 저분자 콜라겐 펩타이드만을 정제하는 과정에서 선행 논문 및 특허에서는 한외 여과막 혹은 gel-filtration법을 쓰더군요.    한외 여과막(ultra-filtration)의 경우는 스케일 상 저희와 맞지 않을 것 같고, gel-filtration법을 찾던 중 Sephadex 라는 resin을 찾았습니다.    정제하고자 하는 단백질 크기에 따라 다른 종류의 resin을 골라야 하는데, 저희는 1000~5000Da 범위의 저분자 콜라겐 펩타이드만 필터링 하고자 합니다.    여러 자료를 찾아봤을 땐, Sephadex G-25 가 적절할 것 같은데, 그 중 particle size에 따라 grade를 골라야 하는 것 같은데..    너무 기초적인 문제지만, 콜라겐 펩타이드의 입자 크기에 대해서 감을 전혀 잡지 못하고 있습니다 ㅠㅠ    혹시 예전에 비슷한 연구를 하셨거나 간단하게라도 개요를 아시는 분들의 도움이나 조언이 굉장히 간절합니다 ㅠㅠ 
회원작성글 씨오션  |  2019.09.09
Q. 녹인 protein 원상복구하는법
유전자 발현여부를 확인하기 위해 positive control로 protein을 구매했는데 0.1% hcl에 용해시켜야할 것을 잘못하여 다른 protein과 같이 0.1% bsa용액에 용해시켰습니다. 이런 경우에 다시 원심분리하여 상층액을 제거하고 0.1% hcl에 녹이면 괜찮을까요? 아니면 이미 단백질에 문제가 생겼을까요? 고수님들에겐 간단한 일이지만 제겐 매우 심각한 일입니다ㅠ 도와주시면 감사하겠습니다ㅠ
회원작성글 실험초보1  |  2019.08.27
Q. 유전자 가위로 절단할 때 mg가 필요한 이유?
제가 유전자가위관련 논문을 읽고 있는데요. .  절단 반응이 일어나기 위해서는 마그네슘(Mg)이 필요하다는 것을 발견했다. 라고 나와있는 부분이 있는데 절단하는데 mg이 필요한 이유가 무엇인가요?
회원작성글 고미소  |  2019.08.26
Q. sec analysis 에서 size가 잘못 나올 수도 있나요?
  antibody를 SEC analysis로 사이즈 확인했습니다. target과 sequence가 각기 다른 antibody 몇가지를 확인했는데요 특정 sequence의 antibody만 size가 매우 적게 나왔습니다. 보통 150kDa 정도인데 그냥 봤을 땐 거의 50kDa 정도로만 확인됩니다. gel로 확인했을때 reduction 안했을 때는 거의 170kDa marker보다 살짝 아래로 나오고   reduction 했을 땐 heavy chain과 light chain이 잘 보입니다.  (sec analysis로 정상 size로 보이는 antibody와 같이 gel로 비교했을때도 size가 동일합니다.) sec analysis로만 사이즈가 원래 사이즈보다 더 작게 나올수가 있는건가요??    
회원작성글 휘리리리릭  |  2019.08.21
Q. 황태껍질로부터 단백질 추출 첨부파일
황태껍질로부터 추출된 단백질이 많이 필요합니다~ 실험과정 및 얻고자 하는 결과물은 다음과 같습니다. 혹 가능하신 분 계시면 010-2957-3494 로  꼭 좀 연락부탁드립니다.   실험과정 황태껍질은 의뢰자가 직접 구매 후, 이물질 제거, 분쇄하여 제공 어육 단백질을 이용한 가식성 필름의 제조 논문(http://www.e-kfas.org/PublishedPaper/topic_abstract.asp?idx=7664) 그림1에 따른 원심분리 12000rpm에서 원심분리 40g 황태껍질 가루 사용시: 첫단계에서는 0.2M NaOH를 50ml씩 5번 넣어 pH12로 맞추고. 다음 단계에서는 0.1M HCI를 50ml씩 4번 넣어 pH 4.6로 맞추어 실험했습니다. 가장 효과적인 pH값을 찾아주세요 동결건조 진공분쇄기로 미세화   결과물 추출된 단백질 총양: 60g(비용 확인 후 조정될 수 있습니다) 실험과정에 대한 간단한 설명자료 원재료vs단백질 추출 양 등의 정량 데이터 가장 효과적인 pH값   비용을 자문료로 처리 가능하신지 확인부탁드립니다.  
회원작성글 단백질추출  |  2019.08.14
Q. sonication으로 cell lysis할 때 궁금한 점이 있습니다.
안녕하세요   원래는 bug buster 를 쓰다가 이번에 sonicator를 이용해서 cell을 lysis해보려 합니다.   그런데 cell이 완전히 lysis 되었음은 어떻게 알 수 있을까요?   저희 랩에서는 셀 다운했을 때 검은색 펠렛이 생겨야 한다  vs 검은 펠렛은 sonicator 팁에서 떨어져 나온 물질이다 로 의견이 분분한 상황입니다.   (bug buster를 썼을 때는 검은 펠렛이 관찰되지 않았지만 sonicator로는 관찰 되는 경우가 종종 있었고  두 과정의 결과물로 page를 달려본 결과 밴드가 확인 되기는 했었습니다.)    sonicator를 사용해 보신 분들의 의견이 궁금합니다. 감사합니다.  
회원작성글 answh  |  2019.08.06
Q. amicon 사용으로 세포배양 배지 농축하려 합니다.
세포 배양에서 얻은 media를 농축하여 amicon 3K 을 사용해서 배지를 농축하고자 합니다. 보고자 하는 단백질은 mmp2(72kDa)입니다. amicon에 배지 넣은 후 매뉴얼에 나온 조건으로 centrifuge하여 먼저 농축을하고, buffer exchange하기 위해 buffer를 동량 채워 동일 조건에서 다시 centrifuge 돌렸습니다. 그런데.. 단백질 양이 너무 적네요.. loss가 너무 심합니다ㅠㅠ 실험실에서 제가 제일 처음으로 해보는 거라서 정통 매뉴얼을 따랐는데 무슨 문제가 있는지 모르겠습니다ㅠㅠ 혹시 멤브레인에 단백질이 끼어서 그런 것인지, 혹시 그렇다면 단백질을 잘 회수할 수 있는 방법이 있을지 궁금합니다! 아니면 제가 다른 무슨 실수를 한 것이 있을지.. 고수님들 의견 부탁드립니다!ㅠㅠ
회원작성글 소재대학원  |  2019.08.02
이전  01 02 03 04 05 06 07 08 9 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고