[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
성균관대학교 삼성융합의과학원
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. 전기영동 결과 DNA 사이즈 예측 도와주세요ㅠㅠ 첨부파일
아가로스 겔은 1%로 진행했고 135V에 20분 영동했습니다! DNA 사이즈를 예측 하라는데 어떻게 해야 하는지 갈피가 안 잡혀요ㅜㅜ
회원작성글 앙영항셍옹  |  04.05
Q. pcr 전기영동 해석
 이 실험결과에서 최적 annealing 온도가 lane 3의 54도가 맞는 지 맞다면 그 이유가 무엇인지 답변 해 주시면 감사드리겠습니다. 제 생각에는 넓이가 넓게 나온 것이 target DNA의 증폭이 가장 잘 된 것같은데... 가능하시면 결과 해석도 부탁드립니다.
회원작성글 좌쌍우무쌍  |  04.02
Q. primer 디자인
NCBI 에서 프라이머를 직접디자인 했는데 , PCR 로 확인해보니 밴드가 안 뜨네요 .. 어닐링 온도를 여러개 설정해서 찍어봤는데 모두 나오지 않았구요. RNA (200ng/ul)와 cDNA (500ng/ul)농도는 잘나왔습니다. 그럼 프라이머 제작이 잘못 된거겠죠 ?  혹시 프라이머 제작이 잘못되었는지 확인하는 방법이 따로 있다면 알려주십시오 .
회원작성글 나밍  |  04.01
Q. primer mixed base
안녕하세요, 프라이머 실험 초보자입니다. 제가 논문에 있는 프라이머를 이용해서 pcr을 진행하려고 하는데, 프라이머 서열에 mixed base code가 껴있는데, 이 mixed base를 그대로 주문해서 온 프라이머를 사용해도 괜찮을까요? 저는 mixed base를 A,C,T,G 롤 바꿔서 진행해야 한다고 생각하는데 확신이 들지 않아서 고수님들께 여쭈어 봅니다. 소중한 답변 감사하겠습니다. 감사합니다.
회원작성글 초코맛꿀  |  04.01
Q. qRT-PCR 1 step kit
시중에 판매되는 qRT-PCR(quantitative real time) one step kit들 중에 (mRNA을 샘플로 넣으면 cDNA를 합성 후 바로 qPCR까지 한 스텝에 가는 키트들) master mix가 1개인 키트가 있나요? 아시는 분 있나요 ㅠㅠ master mix 안에 Reverse Transcritase, DNA polymerase, dNTP, RNase inhibitor, fluorescence dye (여기부터는 생략가능 Mgcl2,nuclease free Water) 가 전부 섞여있는 mix요 보통은 RT가 따로 있더라구요
회원작성글 블루레몬에이드  |  04.01
Q. pcr 키트.. 35s, NOS를 살 수 있는 곳이 어디있을까요..!!
고등학교 2학년 재학생입니다. 리얼타임 pcr 기계를 사용해서 GMO식품의 유전자 관련실험을 하려고 하는데 GMO pcr 키트로 NOS, 35s 키트를 찾아보았습니다. 이런 키트들은 개인적으로 소량구매할 수 없을까요..? 찾아볼때마다 연구소에서 대량으로 구매가 가능하다고 하는데..학교 측에서 구매를 해주겠다고 했지만 대량으로는 저희만 쓰기엔 너무 아까워서요… 둘 중 하나만 알려주셔도 정말로 감사해요…..!!! 부탁드리겠습니다!!
회원작성글 혜링이  |  04.01
Q. qPCR 값의 편차가 너무 크게 나옵니다.
qPCR을 통해 cytokine의 발현량을 비교하여 제가 가진 sample이 cytokine 발현을 억제하는지 확인하는 실험을 진행중입니다. 예상대로라면 positive control 대비 sample을 처리했던 실험군에서 발현량이 더 적게 나와야 합니다. 그런데 결과 값을 보면(RQ, RQ Min, RQ, Max) p.c 대비로 값을 정리했으니까 p.c는 RQ가 1로 나오는데 다른 실험군은 RQ가 5,6 혹은 13까지 나오는 것들도 있고 당연히 RQ Min, RQ Max 값도 엉망입니다.. RQ가 13인 실험군은 RQ Max가 61까지 나오더군요 분주에서 실수 했다거나 sample간의 DNA 오염말고 다른 원인이 있을까요? 분주는 정말 꼼꼼하게 했는데도 결과가 이러니 허무하기도 하고 속상하네요
회원작성글 YTB  |  03.30
Q. qPCR CT값이 안 나올때
-cDNA에 문제가 있으면 qPCR에서 GAPDH를 포함해서 모두 안나와야하는 것인줄 이해하고 있었는데 맞을까요?   -qPCR CT값이 GAPDH 빼고 다른 타겟들은 모두 undetermined가 나왔습니다. (2번하였을때 동일하게) 어떻게 해석하는 것이 옳은 걸지 궁금합니다. 아예cDNA부터 잘못 합성된 것은 아닐지 고민하고 있습니다.   
회원작성글 키럭  |  03.29
Q. qPCR dilution series
저 qPCR 관련해서 하나만 물어볼게요. Dilution series가 너무 낮다고 하는데, 제가 1:5, 1:50 1:500으로 하거든요. 다들 몇으로 진행하시나요?
회원작성글 hihithere  |  03.28
Q. pcr -> 디솔팅 -> 농도측정 이 순서가 맞나요?
pcr 완료후 디솔팅 농도측정 순서가 맞나요?   그럼 만약 pcr 완료후 디솔팅을 바로 하지 않으면 냉장고에 어느정도기간동안 넣어놔도 문제가 없나요?   디솔팅 후에는 냉동보관 맞지요?
회원작성글 룰루랄라라라  |  03.27
Q. PCR후에 loading
PCR 이후에 sample을 4도씨에 주말동안 keeping 후 loading 해도 결과에 영향이 있을까요?
회원작성글 별헤는밥  |  03.25
Q. pcr기기 일반세균 잠복기
제품을 멸균한 후 1차검사로 일반세균을 검사합니다. 그리고 잠복기가 있을 수 있어 14일이 지난 후 2차 일반세균 검사를 합니다. pcr기기를 이용하게되면 잠복기 상관없이 14일을 기다리지 않고 바로 검사해도 잠복기인 세균들을 잡아 낼 수 있나요??
회원작성글 시데  |  03.25
Q. 전기영동시 밴드휘어짐 현상
안녕하세요 실험하고있는 대학생입니다.  T-Vector cloning 이후 colony PCR 진행하였는데 전기영동시 밴드가 휘어지는 현상이 발생하여 원인을 알고싶어 질문드립니다. 
회원작성글 두두장  |  03.24
Q. fusion PCR...
시퀀스가 약 800 정도 겹치는 두 fragment를 하나의 band로 합칠수 있을까요?? 프라이밍은 몇 bp까지 될까요...? ㅜㅜ  도와주세요 ㅜㅜ
회원작성글 하핫호홋  |  03.22
Q. PCR돌리고 gel에 전기영동한 값 오류
PCR을 돌리고 gel에 전기영동한 값에서 맨 밑에 band가 생기는 이유와 10번 lane에 선이 안 생기는 이유가 궁금합니다... 원래는 2000bp에만 선이 생겨야 합니다. 모든 조건은 동일하게 진행하였고, 1번은 marker, 2~5번은 3월11일에 open 한 KCTC 5012, 6~9번은 3월 18일에 open한 KCTC 5012 (plate의 균이 죽은것으로 추정), 10~13번은 2월 7일에 open 한 KCTC 3314입니다. marker는 4람다, 나머지는 다 10람다씩 넣었습니다.  
회원작성글 juiceju3  |  03.22
Q. PCR 결과가 이상해요..ㅠ
PCR을 하고 나서 UV로 결과를 보았는데요 GAPDH를 보았을 때, DW까지도 라인이 관찰됩니다.. 또한 gDNA를 관찰했을 때 가느다란 잡밴드만 가득했습니다.. 혹시 gel을 잘못 만들었거나 DW의 컨텀을 의심해보는 것도 맞을까요?
회원작성글 별헤는밥  |  03.21
Q. Colony PCR이 안되는 polymerase도 있나요?
이전에 TaKaRa exTaq으로 colony PCR을 여러번 수행 한 경험이 있습니다. 그런데 새로운 랩에서 colony PCR을 수행하는데 band가 안뜹니다. polymerase는 enzynomics의 nTaq 이고, colony에서 band가 아예 뜨지 않아 purified vector를 넣어보아도 PCR band가 관찰되지 않습니다.   Mixture - total volume 20ul nTaq : 0.2ul 10x buffeer : 2ul dNTP : 2ul primer : 1ul each Template : 1ul or colony picking DDW : up to 20ul   PCR cycle 1. cell lysis : 95°C, 5min 2. denaturation : 95°C, 30s 3. anealing : 62°C, 1min 4. elongation : 72°C, 3min cycle x 30 [2-4] 5. final elongation : 72°C, 5min 6. end : 4°C     Tm값 정확하고, elongation time 넉넉합니다. 같은 조건으로 standard Taq PCR 했을 때는 분명 잘 떴었는데.. DMSO 10%도 첨가해보았지만 결과는 마찬가지였습니다.   enzynomics의 nTaq을 조금 더 찾아보니 Thermal stability: Half life of 40 min at 95℃ 라고 표기가 나오는데 혹시 colony PCR이 안되는 Taq도 있나요? Half life of 40 min at 95℃ 이면, 충분한거 아닌가요?   궁금합니다..
회원작성글 DMEMFBS  |  03.20
Q. real time pcr negative에 cq 값이 안뜨는 방법없나요?
real time pcr을 하는데요 ntc 에 cq 값이 38정도 뜨는데요 아예안뜨게 하는 방법은 없나요 어쩔때에는 안뜨는데 어떨때에는 뜹니다. 
회원작성글 일어나자  |  03.18
Q. PCR gel에 전기영동한 값이 이상한 이유가 궁금합니다
1번 lane은 marker고 2~5번 lane은 dna 추출한 것을 pcr돌리고 10람다씩 넣은 것인데요, 똑같은 10람다를 넣었는데도 두께와 선명도가 다른 이유, 그리고 5번 lane에 2000bp 외에도 희미한 선이 보이는 이유가 궁금합니다 ㅠㅠ
회원작성글 juiceju3  |  03.18
Q. PCR 과정 중 negative 증폭 질문..
안녕하세요. 요새 자꾸만 negative control 에서 주기적으로 증폭이 발생해서.. 실험이 계속 딜레이가 되고 있습니다. negative가 증폭될 때 마다, 파이펫을 닦고(내부청소까지..) 모든 시약을 교체하면(D.W, premix, primer) 안뜨다가 또 몇번 실험하면 다시 증폭되는 현상이 발생하더라구요..   클린벤치 안에서 실험이 진행중이고 척추동물 범용프라이머를 사용중입니다 제 실험스킬에 의심이 되는 부분이 있는데,,   1. 1.5ml tube에 있는 template DNA을 파이펫으로 분주할 때, 파이펫 실린더 부분이 튜브 벽(튜브 입구쪽)에 닿는데.. 혹시 이런 과정이 negative  증폭에 영향을 줄 수 있는지요..?   2. 제가 cocktail 을 만들때, primer -> premix -> D.W 순서로 분주후 섞고, PCR tube를 모두 열어놓은 상태에서 Cocktail을 용량에 맞추어 분주하고, 실험군에는 template를 넣고 negative는 D.W를 다시 분주하는 방법을 하는데, 이 과정에서도 문제가 될 수 있을까요? (sample->negative control->positive control 순서로 만든 후 실험합니다.)        
회원작성글 Minkymaste..  |  03.17
이전  01 02 03 04 05 06 07 08 9 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고