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BioLab 장재봉 교수
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 카테고리: 전체 > Laboratory Animals > Blood
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Q. Rat에서 반복채혈 250 microliter
안녕하세요? 저희 연구실에서 새로 개발된 세로토닌 재흡수 차단제의 효능에 대해 연구하고 있습니다. 약을 경구투여하기 전과 경구 투여한 뒤 1시간이 지난 시점에서 250 microliter의 정맥혈이 필요한 실험입니다. 한 개체에서 서로 다른 4 조건의 용량을 투여하고 각각 혈액을 얻어야 하니 약 2주간 8번의 채혈이 필요한 셈입니다. 저희는 반복채혈의 어려움을 미리 고려해서 femroral artery/vein 을 통한 채혈을 시도해 봤는데 어찌 된 것이 시술 직후와 하루 정도 지난 시점에서는 양쪽 모두에서 피를 잘 뽑을 수 있는데 사흘 정도 지나면 femoral artery를 통해 헤파린 샐라인이 주입은 되는데 피를 얻을 순 없었습니다. 튜빙과 femoral artery 의 결합부분이 찢어지거나 하지도 않았구요. 이런 경우 어떤 방법을 고려해 볼 수 있을까요? 한 동물에서 2주에 걸쳐 진행되는 실험 동안 총 8번의 채혈이 필요하며 채혈량은 250 microliter입니다. 확실한 방법이 또 없을까요? Femoral artery/vein 채혈이 계속 실패해서 저희로서는 다른 방법이 쉽게 떠오르지 않고 있습니다.감사합니다.
회원작성글 없음2  |  2012.02.02
Q. rat 혈청(serum) 용혈현상(hemolysis)일어났어요ㅠㅜ
오늘 처음으로 실험실에서 rat 채혈을 해보았습니다.SD Rat 5주령, 복부대동맥에서 5ml 주사기로 채혈하여 BD사 약품처리되지않은 7ml vacuum blood tube에 주사기를 찔러 넣어 채집한 후 (예비실험이라 유통기한이 98년도까지인 걸 사용했답니다 하하...)상온에 약 sample별로 1시간 반~즉시 centrifuge(한일) 3000rpm, 4도 10분 돌리고 나니 혈청이 노랗지 않고 용혈현상이 일어나 핑크빛이 되었습니다ㅠㅜ가장 큰 원인은 뭐일까요? 또 혈청에서 cholesterol, TG, HDL-Cholesterol 보려는데 용혈현상되어도 값이 많이 달라질까요? 
회원작성글 카사블랑카  |  2012.01.13
Q. mouse CBC 측정
안녕하세요마우스 blood로 CBC를 측정해주는 곳을 찾고 있습니다그리고 mouse의 CBC 정상 수치는 얼마인지 알고싶습니다.
blue45do  |  2011.11.29
Q. PB MSC culture 질문
저는 이번에 대학원 진학하는 초보 실험 연구원입니다. 현재 mobilized PBMC 에서 MSC culture를 하고 있습니다. 15% FBS, 1%penstrep, DMEM low glucose media를 이용하여 25T에 1 x 10^6/cm2 로 심었습니다. 그랬더니 둥그런 모양의 microphage 형태의 cell 과 fibroblast 형태의 길다란 cell이 자라고 있습니다. subculture 과정에서 microphage 형태는 제거되고 fibroblast 형태의 순수한 msc만culture된다고 알고 있습니다.  그러나 passage 2 부터 cell 들이 힘 없이 죽어가고 있습니다. 0.25% tripsin EDTA 를 사용하고 있고 tripsin 처리의 문제는 아닌걸로 생각하고 있습니다.  이문제를 해결하기 위해 cell 농도를 낮추기도 해보고 높이기도하고, FBS 농도를 20%로 올려서 culture 하고 있습니다. 현재 이조건으로 배양한지 일주일 정도 지났는데 아직까지는 별 차이가 없어 보입니다. 좀더 지켜봐야 할것으로 보입니다. PB에서 msc culture 해보신분들께서 어떤 방밥으로 culture 하셨는지 자세한  도움주셨으면 감사하겠습니다. ㅠ
회원작성글 심수창  |  2011.11.29
Q. 멸균된 sheep blood
  제가 멸균된 sheep blood 가 필요해서 여러 업체에 문의를 해 보았지만 멸균되지 않은 sheep blood 만 있다고 하네요. 특수한 항생제를 넣고 sheep blood 가 들어간 배지를 만들어야 해서, 멸균된 sheep blood 가 필요한데, 혹시 구할수 있는 방법을 아시는분 계신가요?  감사합니다.
슛돌이  |  2011.10.20
Q. Rat 혈액 추출 후 항 응고 평가시 혈액 및 샘플 처리 핸들링
Rat에서 혈액을 채취하여 항응고제가 포함된 tube에 넣고 cap을 열어 항 응고 효능을 스크리닝할 샘플을 처리한 뒤 잘 혼합되도록 shaking 40분정도 했습니다.그 뒤에 혈액을 분석하려고 보니 어떤 tube는 이미 응고가 진행되어있던 것도 있었고, 또 다른 tube의 혈액은 헤모글로빈이 용출되어 분석이 어렵게 되어버렸습니다.어떤 해결 방법이 있을까요?
회원작성글 SoCoolCool  |  2011.10.07
Q. human plasma
human PBMC에서 RPMI와 함께 1시간 37도55CO2에 키운후, 뜨는셀은 걷어내고 붙어있는 셀에 GM-CSF을 처리 후 4일동안 배양하면 macrophage로 분화한다고 하는데, 어떤 프로토콜에선 human plasma을 배지에 10-20% human plasma을 첨가 한것을 넣어주고 일주일뒤에 macrophage로 분화한다고도 하는데, 가능한가요>??
학생  |  2011.10.06
Q. PBS 관련 질문
기계과 대학원생 이라, bio 쪽은 전혀 모르겠네요. micro channel에서 세포를 분리하는 실험을 진행하려고 하는데요,가장 먼저 적혈구와 백혈구 분리실험을 하려고 합니다.비슷한 논문을 검색해 보니, buffer용액으로서 단순히 PBS 용액을 사용하는 것이 아니라,isotonic solution이라고 해서 PBS에 8.5%의 sucrose와 0.3%의 dextrose (w/v) 를 섞어서 쓰던데, 무슨 차이가 있고, 그냥 PBS를 사용하면 안되는지 궁금합니다.그리고 제 실험에 있어서 전기를 사용해야해서 buffer용액의 conductivity가 중요한데요, 이를 위해서 약 0.01X 농도의 PBS를 사용하려고 하는데, PBS의 농도는 상관없는지 궁금하네요.추가적으로 제가 정확한 방법을 몰라서 그러는데, whole blood에서 적혈구와 백혈구 채득 방법도 상세히 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 형구기  |  2011.10.05
Q. Tryptic Soy Blood Agar Base 써보신분 계신가요?
5% sheep blood plate를 만들어야 합니다. 피를 사서 넣는게 보관이나 그런것들이 불편해서 bd제품 Tryptic Soy Blood Agar Base (cat, 228300,227300)를 사용해 볼까 하는데 사용해보신분계신가요?둘의 차이점을 알면 좀 알려주셨으면 합니다.
장규  |  2011.10.05
Q. human T cell 배양시 배지
안녕하세요human PBMC에서 Treg cell 분리하여 실험하려고 합니다.MACS 에서는 cell 배양에 배지를 Lonza의 X-VIVO15, serum을 human AB serum 사용을 권장하고 있는데요혹시 다른 배지와 혈청 사용가능한가요?일반적으로 위의 조성으로 실험하시는지 궁금합니다.
면역초보  |  2011.10.04
Q. Ficoll로 lymphocyte 분리해서 protein 처리하는 실험에서 질문이 있습니다..
제가 사람 혈액샘플을 가지고 Ficoll로 분리해서 protein 처리를 하는 실험을 하는데요..병원에서 피뽑으러 갔는데 혈액 sample 안굳게하는 항 응고제 종류가 여러가지가 있더라구요..EDTA, 헤파린 등등..근데 이런것들이 나중에 protein 처리하는 실험에 있어서 어떠한 영향을 줄 수 있나요?
잘 들어가라  |  2011.09.26
Q. 혈액에서 얻은 cell로 세포배양하는 방법
mouse에서 심장채혈하여 얻은 whole blood로 buffy coat층만 분리하여mononuclear cell을 culture 하려고 합니다.cell culture을 할 거라 cell에 damage가 적은 방법으로 얻고 싶은데우선 buffy coat층을 얻는거 부터가 힘들다고 하던데PBS로 혈액을 1:2로 희석하여 buffy coat층을 얻어 cell culture하는 방법에 대해자세한 protocol를 알려주세요.혈액에서 DNA를 분리하는 방법은 많이 나와있던데 세포배양에 관한 것은 못 찾겠더라구요배양액은 어떤 배양을 써야하고 culture dish 등 자세하게 부탁드릴게요.ㅠㅠㅠ
회원작성글 123  |  2011.09.19
Q. blood seperation
안녕하세요blood seperation할때 Ficoll을 이용하여 buffy coat층만 얻을려고 합니다.그런데 많은 protocol들이 FBS나 BSA, PBS를 쓰던데 이걸 쓰는 이유가 무엇인지 궁금합니다.그냥 100% 혈액에 ficoll만 쓰면 안되는건지..혹시 아시는 분 답변 부탁드립니다.감사합니다.
궁금이  |  2011.09.09
Q. PBMCs 또는 THP-1 cell 분양 부탁드립니다.
제가 약물에 의한 cytokine 변화를 kit로 봐야 하는데 저의 실수로 mouse가 아닌 human cytokine detection kit을 구입해서 Human macrophage cell이 없는 관계로 실험을 못하고 있습니다.계속 진행할 실험이 아니라 cell을 구입하자고 말씀드리기도 어려워 실험자분들께 요청드립니다.PBMCs 또는 THP-1 cell을 분양해주실 수 있으시면 nhyim23@kiom.re.kr 여기로 연락부탁드립니다.좀 급합니다^^;;
실험자 (대전)  |  2011.08.19
Q. Human PBMC isolation 질문이 있습니다..ㅠㅠ
안녕하세요.제가 피뽑아서 human PBMC 분리해서 protein 처리하고 FACS 찍어보는 실험을 하려고 하는데요..제품은 GE healthcare Ficoll-paque plus입니다.여기 프로토콜을 보면..blood : balanced salt solution : ficoll = 2 : 2 : 3  이렇게 사용하라고 나와있는데요..Q1. balanced salt solution이 꼭 필요한가요?ㅎㅎQ2. 생각보다 ficoll이 많이 사용되는데.. 혹시 다른 비율로 섞어 쓰시는 분 계신가요?ㅠQ.3 1 X 10^7 cell 정도 얻으려면 피를 어느정도 뽑아야하는지 아신다면 답변 부탁드려요..ㅠQ4. 보니까 ficoll 퍼센트가 여러가지있는데요.. PBMC 분리하는데는 그냥 ficoll 그대로 써도 되는건가요?ㅠ 제가 아직 학부생이어서 부족한것이 많습니다..ㅠㅠ
회원작성글 들어가라얍  |  2011.08.10
Q. mouse 혈액 채취 시 질문입니다.
mouse 1마리에서 whole blood, serum을 모두 사용해야 하는 상황입니다.심장채혈을 할 생각인데 헤파린 처리 된 tube에 혈액 모은 뒤 일부만 whole blood로 사용하고나머지는 응고제 넣어서 serum으로 사용 할 생각입니다.그런데 헤파린 처리된 혈액에 다시 응고제를 넣어도 serum을 얻을 수 있을지가 의문입니다.이 방법이 가능한지 아니면 다른 방법이 있는지 알려주세요!!ㅜㅜ혹시 경험 있으신 분이나 알고 계신분들의 조언 부탁드립니다.
질문입니다~  |  2011.07.25
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