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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Differentiation/Proliferation
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Q. 신경줄기세포 분화에 관한 질문
NE4C라는 신경줄기세포를 분화하고 있습니다. 분화 7일차이고, 2일마다 RA를 포함한 MEM alpha로 배지를 갈아주고 있습니다. 그런데 문제는, 배지를 최대한 조심히 갈아줌에도 불구하고, 문제는 floating cells들이 dish에서 육안으로 보일정도로 많다는 것입니다. 원래 분화하면서 많은 세포들이 사멸하기도 한다는 것을 압니다만, 다른 줄기세포 분화과정에서는 잘 볼 수 없을정도의 floating cells이 분화하는 중에 계속 보여서 여쭤봅니다.   원래 신경줄기세포가 이런것인지, 아니면 어떤 문제가 있어서 이런것인지 알수 있을 까요?
회원작성글 차록  |  2019.03.21
Q. 3T3-L1 입니다 ㅠㅠ 첨부파일
안녕하세요 이제 막 대학원생이 된 학생입니다,,3T3-L1 을 분화 중인데요 현미경으로 세포를 보다가 이상한 점을 발견하여 질문드립니다,, 사진에 보이는 큰 원으로 된 세포?는 왜 그런것인가요...? 실험을 진행 해도 될까요???한 두개도 아니고 너무 많이 보여서... 작은 것도 있고 과하게 큰것도 보입니다 ㅠㅠ감사합니다..!
회원작성글 사브레  |  2019.02.22
Q. 신경돌기 (neurite) 측정방법 아시는분?
안녕하세요. 신경세포로 독성평가중인 대학원생입니다. 이번에 배아줄기세포로 신경전구세포(NPCs)를 분화시켰고, 신경돌기 생성까지 확인하였습니다. 다른 논문들에 보면, 신경독성의 한 지표로 신경돌기의 길이를 측정하는 것이 있었는데요. 일일히 신경돌기의 길이를 측정할 수 있지만, 이건 너무 막노가다 수준의 일이라서요.. 혹시 자동으로 뉴라이트의 길이를 측정해줄 수 있는 프로그램 알고계신분 계신가요??
회원작성글 초원잉  |  2019.02.19
Q. 신경줄기세포 marker
Neural stem cells의 대표적인 marker가 nestin과 sox2라고 알고 있습니다.PCR을 돌렸을 때, 해당 2개의 marker가 비슷한 level을 보여야 되는거 아닌가요?sample의 nestin과 sox2의 발현량 차이가 많이 납니다.그 이유를 알 수 있을까요?
회원작성글 차록  |  2019.02.13
Q. 신경세포 신경돌기(neurite) 길이 측정방법
안녕하세요.신경세포로 독성평가중인 대학원생입니다.이번에 배아줄기세포로 신경전구세포(NPCs)를 분화시켰고, 신경돌기 생성까지 확인하였습니다.다른 논문들에 보면, 신경독성의 한 지표로 신경돌기의 길이를 측정하는 것이 있었는데요.일일히 신경돌기의 길이를 측정할 수 있지만, 이건 너무 막노가다 수준의 일이라서요..혹시 자동으로 뉴라이트의 길이를 측정해줄 수 있는 프로그램 알고계신분 계신가요??
회원작성글 초원잉  |  2019.02.12
Q. peritoneal macrophage inactivation isolation질문입니다
복강에서 대식세포를 뽑을하는데 프로토콜보면 염증반응을 유도하는 물질을 같이 넣어서 3~5일 후 뽑던데 저는 inactivation된 것들을 뽑고 싶습니다쥐 희생후RPMI만으로 뽑아도 충분한 수율이 나울지 혹은 뽑히는과정에서 일부 ACTIOVATION이 되도 INACTIVATION된 마크로파지를 뽑을수 잇는 방법이 잇는지 궁금합니다
회원작성글 신박한초보자  |  2019.02.08
Q. 3T3-L1 지방세포 분화 첨부파일
안녕하세요?3T3-L1 cell 을 분화유도하고 분화유도를 억제하는 약물을 처리한 후 oil red o staining을 진행한 시험 결과입니다.시험 결과가 잘 좋은 것 같지는 않지만첨부된 분화 사진을 보시고 분화가 진행된 것인지 확인해 주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 신양22  |  2019.02.05
Q. 조직 brdu staining에서
안녕하세요지금 조직에서 brdu staining을 진행하고 있습니다. brdu원리가 cell ​proliferation 과정에서 DNA 복제시 T를 labeling된 U가 대체하여 brdu antibody로 표지한다고 알고있는데, 어떻게 apoptosis 확인을 하는거죠? 찾아보니까 drosophila에서 apoptosis에 의한 compensatory 작용으로 ​proliferation 발생한다고 하던데 이게 맞는건지 잘 모르겠습니다 
회원작성글 빌루  |  2019.01.17
Q. CCK 처리 후 IC50이 시간에 따라 증가
안녕하세요 실험결과에 대해 궁금하여 이렇게 올립니다.96well에 cell seeding 하고 drug를 처리, ccK를 측정했는데요CCK 처리하고 1hr 뒤에 IC50이 2.15uM이였는데 2hr뒤에 측정하니 IC50이 3uM이 되었습니다.cell이 증식이 빨라서 이런건가요? 잘모르겠어서 이렇게 올립니다..ㅜㅜ많이 부족하지만 답변 부탁드립니다.
회원작성글 dreamjw021..  |  2019.01.13
Q. Wil2-ns cell에대 묻고싶습니다.ㅠㅠ
이 wil2ns cell은 human B cell로 spleen에서 가져온 cell 인데 일단 골수에서 immauture cell에서 spleen으로 오면서mature cell이 되는거 같은데  그래서 wil2ns cell 은 mature cell라 생각하고있었습니다....B cell 논문을 보면서 좀 혼란스러운게  B reg나 activating  B cell들이 있더라고요...B cell의 위치에 따라 달라 지는건지 아니면 다른 셀들에 의해서 B cell이 바뀐건지 설명 해주시면 감사하겠습니다.그리고 제가 가지고 있는 wil2ns cell은 상황에 따라 B cell이 달라지는거인가요?너무 허접한 질문이겠지만 정말 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 juice  |  2018.12.14
Q. T cell differentiation 시 anti-IFN-γ anti-IL-4 Ab 는 왜 넣어주는건가요??
Th17 분화에 anti-CD3 mAb나 anti-CD28 mAb 은 cell stimulation을 위해 넣어주는거로 알고있는데anti-IFN-γ anti-IL-4도 같은 이유로 넣어주는건가요?
회원작성글 플레이트  |  2018.11.05
Q. T cell differentiation 질문있습니다.
안녕하세요. 이제 막 걸음마 단계를 떼고있는 초보입니다..실험을 이해하는데 있어서 약간 헷갈리는 부분이 있는데Th17로의 differentiation을 유도하기 위해 CD4+T cell 에 plate-bound anti-CD3 mAb,anti-IFN-γ Ab , anti-IL-4 Ab , recombinant TGF-β , and recombinant IL-6을 처리 했다고 나와있는데,이런 처리를 해주면 Th17뿐만 아니라 다른 T cell로도 분화가 될까요??Th17 분화된 정도가 10%정도밖에 되지않는다고 나와서요..나머지는 다른 T cell로 분화된건지 분화되지않고 CD4+ T cell로 남아있는건지 궁금합니다...splenic CD4 + T-cells were stimulated with plate-bound anti-CD3 mAb (0.5 μg/ml; BD Biosciences, San Jose, CA), soluble anti-CD28 mAb (1 μg/ml; BD Biosciences), anti-IFN-γ Ab (2 μg/ml; R&D Systems, Minneapolis, MN), anti-IL-4 Ab (2 μg/ml; R&D Systems),recombinant TGF-β (2 ng/ml; R&D Systems), and recombinant IL-6 (20 ng/ml; R&D Systems) for 3 days.다른질문인데다음 FACS 자료인데 아래에 Th17이라고 써있는것은 무엇을 의미하는건가요??둘중 한가지만 답변해주셔도 정말 머리숙여 감사드립니다...!
회원작성글 플레이트  |  2018.11.03
Q. PKC412 질문있습니다.
PKC412(=midostaurin) 관련해서 질문있습니다.논문에서는 PKC412가 FGFR3억제제라고 나와있는데 실제로는 PKC412가 tyrosine kinase 부분을 억제하는 FLT억제제라고 알려져있다고 알고 있습니다. FLT가 RTK이고, FGFG3도 RTK인 점을 생각한다면 PKC412가 FGFR3에 작용할 때 FLT에 작용하는 것과 같이 tyrosine kinase부분을 억제해서 FGFR3 억제 효과를 나타낸다고 생각하면 될까요?설명부탁드립니다. 감사합니다. 
회원작성글 qwerty11  |  2018.10.28
Q. ALP assay (cell proliferation test)에 대해 질문있습니다.
제가 합성한 뼈 재료에 대해 세포를 이용하여 ALP assay를 통해 cell proliferation test를 진행하려고 합니다.제가 재료과 학생이다 보니 생물학 실험에 대한 정보가 부족해서 다양한 논문을 알아보고 있는데 생물학을 전공하시는 분들에게는 당연하게 생각되는 방법이라 그런지 어떻게 assay를 진행하는지 정보가 부족하네요.제가 합성한 재료는 수십-수백 마이크로 사이즈의 입자인데 이 입자들에 대해 어떻게 alp assay를 진행해야하는지 도움을 받고 싶습니다.Well plate 바닥에 입자를 단순히 뿌려놓고 위에 media에 풀어져 있는 cell을 seeding 하면 바닥에 있는 입자들이 media에 의해 풀리면서 cell이 well plate 바닥에 깔려 자라게 될 것 같아요.이렇게 되면 그냥 세포가 well plate 바닥에 깔려 자라게 되는건데 재료에 붙어서 자라서 얼마나 더 잘 분화되는지 보는 proliferation test가 정확히 진행이 안될 것 같더라고요.또, long term ALP assay data를 뽑으려면 media 교체를 주기적으로 해야하는데 media 교체를 위해 suction 하면 파티클이 있는 경우 입자가 제거되어 proliferation을 더 진행할 수 없는 거 아닐까요?또한 이 입자를 이용하여 특정한 scaffold를 제작하고 이 scaffold에 대한 proliferation test도 진행해보고 싶은데 특정한 scaffold를 만들면 scaffold가 well plate 전체를 덮고 있는 것이 아니라 well plate 바닥에 깔려 자라는 세포도 존재하게 되고 이렇게 되면 scaffold 만의 영향을 보기 어려운 것 아닌가요?보통 proliferation test를 진행하시는 분들은 어떻게 재료를 처리하여 진행하는지 궁금합니다.마지막으로, ALP assay 마지막에 흡광도를 측정하는데 scaffold가 있거나 well plate 바닥에 재료가 잔뜩 깔려있으면 plate reader기로 흡광도는 당연히 측정을 못할텐데, 모든 chemical을 처리하고나서 마지막에 plate 각각에 있는 solution을 일정량씩 96 well plate에 옮긴 후에 측정을 하는 것인가요?기본 배경지식이 부족해서 질문이 많네요. 죄송합니다 ㅠㅠ질문을 정리하면1. 입자에 대한 proliferation test를 진행하려면 어떻게 입자를 처리해야하는가2. 입자가 존재하는 경우 media exchange를 어떻게 하는가3. Scaffold에 대한 proliferation test를 하려면 어떻게 해야하는가4. 입자와 scaffold가 있는 경우 absorbance를 어떻게 측정하는가도움주시면 감사드리겠습니다!
회원작성글 Cesium Kim  |  2018.10.26
Q. 세포를 형광 항체등 marker 없이 확인 할 수 있는 방법이 있을까요???
 Capsuling한 Cell이 particle안에 잘 들어갔나 확인하고 싶은데, 형광 현미경은 있는데 Ab는 없는 상황인데참고로 Cell은 직접 키우는게 아니라 위탁 받은것이라 대략 적인 크기만 알고 정확히 어떤 종류, 상태인지는 알지 못 합니다. 만약 (Ab를 사게된다면 확인할수 있을지도 모르겠네요.) 다만 신경계통 세포로만 알고 있는데 어렵지 않게 쓸 수 있는 범용 세포 염색 시약이 있을까요?? 만약 H&E 이나 giemsa시약을 구매하여 염색한다면 시약만 가지고 염색이 가능할까요? (Slide 고정은 할 수 없고 spindown을 해야합니다)가능하면 현미경으로 확인하면 좋치만 여의치 않다면 다른 방법이 있을지...  생물학 전공자분들 부탁드립니다. 
회원작성글 JC5316  |  2018.10.23
Q. chondroctye pellt culture시 pellet이 풀려요
안녕하세요.제가 mesenchymal stem cell에서 chondrocyte로 분화를 하고 있는데 요즘 pellet으로 분화를 들어가서 2~3일만 지나면 pellet이 조금씩 풀리는 것 처럼 상층부에 실타래가 보입니다. 전에는 위와 같은 증상이 보이지 않았는데 요즘들어 많이 발생하고 있습니다. 분화 시약은 전과 동일하게 사용하고 있구요. 14일 정도만 지나도 pellet이 증식하는게 아니라 점점 줄어드는 것을 볼수가 있습니다. 혹시 이유를 아시는 분 계신가요?분화시약으로는 DMEM, 1% penicilin streptomycin,  ITS, ascorbate-2-phosphate, dexamethasone, TGF-b를 사용하고 있습니다.고수님들의 도움이 필요합니다 도와주세요~ㅜㅜㅜ
회원작성글 vtml  |  2018.10.17
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