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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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Q. 항염증 실험에서 nf-kb와 jak/stat 차이.
lps로 유도하는 항염증 실험에서 raw264.7 셀에 어떤 샘플을 쳤는데  웨스턴실험에서  NF-κB 및 MAPK 에서는 샘플처리에서 감소경향이 보이지않았는데 jak/stat에서는 감소경향이 잘 보였는데  차이점이 무엇인가요??  부탁드립니다.
회원작성글 fungui  |  2022.11.10
Q. PC3 subculture
안녕하세요 초보 대학원생입니다.. 혹시 pc3 cell 키우시는 분들 subculture ratio 및 주기가 어떻게 되세요? 감을 잡기가 어려워서요 ㅠㅠ
회원작성글 팡이  |  2022.11.10
Q. Hemocytometer cell counting 에서 dilution factor 질문
Hemocytometer cell counting 방법에서 평소에 10 ul cell + trypan blue 10 ul 섞어서 10ul 양을 사용하면 dilution factor 를 2 로 생각해서 계산을 하잖아요. 그런데, 생각해보니 왜 처음에 10ul cell 따서 섞은거에 대해서는 total cell 을 counting 할 때 무시하는 건가요? 만약에, 100ul cell + trypan blue 900 ul 섞고난 뒤 10ul 양으로 hemocytometer 측정을 한다고 가정하면 dilution factor 가 어떻게되는건가요?
회원작성글 사라다가나  |  2022.11.10
Q. 셀 카운터로 cell counting
Cell harvest 하여 media 10 ml에서 cell 10 ul와 트립판블루 10 ul을  서로 합하여 10 ul을 따서 cell counter로 세포의 수를 계산 한 결과,    4 X 10^6 cells/ml이 나왔습니다.    여기서 60파이 디쉬에 4 X 10^5 cell을 seeding 하고 싶은데  어떻게 해야되는지 모르겠습니다 ㅜㅜ 부탁드립니다.   
회원작성글 카스테랑  |  2022.11.09
Q. Western blot 하는데 smik milk
40ml에 5% skim milk 만드려고 하면 power가 몇그람 들어가야 하나요
회원작성글 밈ㅁ미미미  |  2022.11.08
Q. (사진 첨부)primary cell 상태 보시고 조언을 구하고자 합니다 ㅠ
48Well, X40  48-Well, X100(X40과 동일한 부분 확대)   안녕하세요  어제도 셀 모양과 관련해서 글을 올렸는데 감사하게도 한분이 답변 해주셨지만,  명쾌히 해결이 되지 않아서 다시 글을 올리게 되었습니다.  우선 사진은 Passage 5인 휴벡입니다. *Passage 5-6까지만 사용합니다.  subculture를 하면서 처음에는 매끈한 동그라미 모양이였지만, 점점 셀이 떼지지 않고 뗐을때 모양도 자글자글한 동그라미 모양으로 변하기 시작했습니다. passage 3인 셀도 마찬가지입니다 ㅠㅠ  플라스크에서는 큰 차이를 보지 못하는데 반면 웰 플레이트에 시딩 한 이후 10h 뒤에 확인했을 때 자글자글한 동그라미 모양으로 아직 붙어있지 못한 셀들이 많았습니다. 또한, 셀 주변으로 일그러져있는 먼지 모양을 한 것들이 많이 생기기 시작했는데 확대를 했을 때 움직이는건 잘 모르겠어서 이게 컨탐인지 아니면 셀 상태가 좋지 않아서 이런건지 조언을 구하고자 다시 올리게 되었습니다.  우선 HEPES로 Washing을 해준 다음 Trypsin edta 처리는 인큐베이터 안에서 3분으로 진행합니다 *떨어지지 않은게 많을 땐 4분까지도 합니다. (근데 이때 이미 셀이 자글자글한 동그라미 상태입니다)  그런다음 전동파이펫으로 TNS를 넣고 5-6번 흘려서 모서리에 셀을 모으고 1000rpm 3min 센트리를 돌리는데 여기서 셀 다운이 한 80% 정도 되고 나머지 20%는 상층액에 둥둥 떠있습니다. 이게 셀 상태가 좋지 않다는 것을 의미한다고 알고 있는데 셀 관리도 36-48h 에 한번 프레쉬한 미디아로 바꿔가면서 키우는데 어느 스텝에서 셀이 상태가 안좋아지는 지 모르겠습니다..  셀은 항상 카운팅 후 50X10^4-80X10^4 175cm^2에 키우고 있고, 센트리 후 1000파이펫으로 1ml씩 넣어가면서 풀어주고 있습니다. 어제 답변으로는 블루팁에 의해 셀이 스트레스를 받을 수 있다고 해서 1ml은 파이펫으로 풀어주고 나머지 볼륨은 전동파이펫으로 살살 풀어줬습니다.    인큐베이터 물은 항상 3차 증류수이며, 문을 열고 닫는 횟수는 좀 많은 편입니다. (세포를 다루는 실험실이라 실험실 인원 전원이 사용하고 있습니다) 제 셀의 경우 제 칸을 따로 사용중에 있고 셀도 최대한 안쪽에 넣어두고 있습니다. 최근에 다른 칸에서 곰팡이종류로 보이는(셀에 검정색 먼지?같은게 붙어있음) 컨탐이 일어나긴 했지만 제가 쓰는 두칸에서 같은 종류의 컨탐은 보이지 않았습니다. 실험할 때 알코올도 굉장히 많이 쓰고 실험전 uv도 30분에서 1시간 정도 켜두고 있습니다. 아 그리고 미디아 상태도 깨끗하고 보통 2-3일에 한번씩 다 써서 거의 새 상태입니다.    정말정말 도움이 필요합니다 ㅠ 읽어주셔서 감사합니다!       
회원작성글 사고치는뚝딱이  |  2022.11.08
Q. coculture하는 이유가 궁금합니다.
실험 reference를 찾던 중에 co-culture하는 논문을 찾게 되었는데요. cell에 LPS나 IL-1B 등의 물질을 처리하여 염증을 유발하는 방법이 아닌, macrophage와 함께 co-culture하는 이유가 있을까요?  두 방법의 차이점이 궁금합니다! 뭐.. 예를 들어 co-culture을 해야하는 상황 or 하지 못하는 상황 등이 있는 것인지 하여서요..왜 우리 실험실에서는 co-culture 방법을 사용하지 않는지.. 궁금하여요..
회원작성글 gamja  |  2022.11.08
Q. Cell morphology 봐주실 분 계신가요 ㅠ
안녕하세요  휴벡 키우는데 있어서 모양변화에 대해 궁금한게 있어서 글을 남기게 되었습니다.    휴벡 Passage2를 처음 받아서 풀었을때는 저런게 없고 깔끔하게 셀만 있었는데  한번 계대할 때 stock 만들고 풀어보니까 저렇게 셀 모양이 변해있습니다. *사진은 Passage 3상태입니다.   그래서 몇가지 질문을 하려고 하는데요  실험실 내 휴벡을 다루는 선배가 없어서 모든 걸 처음부터 공부해야 하는 상황이라  정말 죄송스럽지만 자세하게 설명해주시면 감사하겠습니다!    1. x40(첫번째 사진)으로 보이는 검은색 점들은 데드 셀들인가요?  2. X100(두번째 사진) 2-1. (파란색 동그라미) 셀 주변에 점같은게 보이는데 배율을 올려봤을때 움직이거나 늘어나는 경향은 보이지 않는데 컨탐인지 아니면 셀이 죽으면서 내용물이 나온 것인지 궁금합니다.  2-2. (연두색 동그라미) 셀 옆에 셀이 아닌 것들이 붙어있는데 X200(세번째 사진) 확대해보았을 때 저렇게 생겼고 저것 또한 늘어나거나 움직이는 경향이 없는데 저게 왜 생기는지 무엇인지 궁금합니다. 교수님께서는 저게 생기면 안된다고 하셨는데 컨탐이라고 하시진 않아서 브릭 통해 찾아보고 있는데 단지 죽은 셀들이 붙어있는건지 혹은 먼지인지 궁금합니다.  2-3. (빨간색 동그라미) 다른 셀 모양과 다르게 옆구리가 터진 듯한? 모양을 하고 있는 셀들이 있는데 이게 APOPTOSIS가 진행되고 있는 셀인지 궁금합니다.    3. subculture를 하면서 hepes로 washing 해주고 trypsin edta 4ml 3min으로 셀을 떼주는데  3-4min이 지나도 떨어지지 않는 셀들은 상태가 좋지 않은 셀들인지 궁금합니다.  또한, primary cell이라 전동파이펫 사용해서 펠렛을 풀어주기보다는 파이펫으로 풀어주고 있는데  버블이 생기는게 셀 모양이 영향을 끼치는지 궁금합니다!    질문이 많아서 너무 죄송합니다 ㅜ 답변 가능한 질문에만 답변해주시는 것만으로도 감사하게 생각하겠습니다! 아 셀 관리는 36-48h이 지나기 전 항상 EBM-2+FBS+growth media cocktail (EGM-2)로 Media change 해주고 있습니다.   
회원작성글 사고치는뚝딱이  |  2022.11.07
Q. 세포를 동결보존 했을때의 영향
 세포를 동결보존했을 때, 세포에 가해지는 영향은 전혀 없나요?   아무런 영향 없이 보존을 오래할 수 있는거에요/??  궁금합니댱..하핳
회원작성글 shu  |  2022.11.06
Q. 클린벤치에서 media filtering 하라는게 무슨 뜻인가요?
raw 264.7 세포 배양시  ① DMEM용액 230mL의 PH 농도를 HCl을 이용하여 7.2로 맞춘다. ② 완성한 DMEM Media를 Meddia bottle에 담는다 ③ 그 후 클린벤치에서 Media filtering을 한다 과정이 있는데 클린벤치에서 media filtering을 하라는게 무슨 뜻인가요
회원작성글 Taerang061..  |  2022.11.05
Q. C2C12 6well plate seeding 중 well 가장자리가 뜯어집니다ㅠ
C2C12로 이제 막 실험 중인 학생입니다. 6well plate에 seeding 하는데 media change suction 중 cell 이 well 에서 자꾸 뜯어집니다. suction한 부분이 뜯어지는 거면 저의 테크닉 문제이지만 suction 한 반대 부분 가장자리가 뜯어집니다.  저희 실험실에서 저뿐만 아니라 다른 선배도 그럽니다. 자세한 실험 방법은 C2C12 passage number 12, 2*10^5 cells/well, suction 시 blue tip->white tip 순으로 끼워서 진행했습니다. 무엇이 문제였을까요ㅜㅠ 도와주세요 선생님들ㅠㅠ
회원작성글 뉴트리아  |  2022.11.05
Q. Endothelial cell culture 시 잘 안자라는 이유 알려주세요!!
iPSC에서 Endothelial cell로 분화시켜 배양중입니다. 0.2% Gelatin coating 해서 키우는데 cell을 seeding 한지 몇일이 지나도 doubling 된다는 느낌이 없이 cell이 길어지기만 하고 cell 수가 많아지지 않습니다. cell density가 낮은데 낮은 상태로 변화가 없어요... 왜 cell division이 안되는거같죠?? 이유를 아시는 분이 있을까요??
회원작성글 스벤  |  2022.11.04
Q. hemocytometer 세포수 카운팅, 각 칸 간의 오차(세포수 차이)
새포 배양 실험에서 세포 수를 hemocytometer를 사용해서 카운팅하는데, 홈에 세포를 주입하고 현미경으로 세보니까(4칸) 위의 두칸보다 아래의 두칸이 각각 100개 정도 더 많았어요. 이러면 칸 간의 세포수 차이, 오차율이 10퍼센트가 넘어서 좋지 않다고 생각해서 몇 번을 다시 해봤는데 계속 위나 아래가 훨씬 크거나 작더라고요...그리고 4번 정도 다시 만들어서(트리판 블루랑 믹스) 했는데 갈수록 세포가 뭉쳐서 세기가 어려워지고... 파이펫팅은 저번 실험에서 그랬던 것처럼 항상 주의깊게 하는데(저번 실험은 오차가 10퍼 이내였어요) 왜 이런 결과가 나왔을까요? 저렇게 편향적으로 세포가 분주?되고 갈수록 세포가 뭉치는 이유가 대체 뭔가요?ㅠㅠ
회원작성글 강아지구름  |  2022.11.03
Q. 96well plate
안녕하세요, 새로온 실험실에 mtt assay 를 하려고 96well 에 cell seeding을 하였는데요 treat 하려고 보니 세포가 뭉쳐있는 모양입니다. (seeding 할때 남은 cell 을 디쉬에 깔았는데 그것은 잘 흩어져 있습니다.)    96well plate 는 개별 포장된것이 아니고 몇개씩 묶어져서 비닐에 담아서 라벨이 다른 박스에 엄청 많이 있습니다.  혹시 96well 이 cell culture 용이 아닌것도 있을까요? 도움좀 주세요~
회원작성글 pretty  |  2022.11.03
Q. b16f10 cell 질문입니다.
b16f10을 키우고있습니다. DMEM + 10%FBS에서 처음 thawing하고 2일 incubation 후에 2%FBS로 바꿔서 serum starvation해주는데 이때만해도 cell이 잘 자랍니다. 그리고 subculture를 96well, 6well에 깔아주는데 부착이 안되고 거의다 뜨네요 stock, subculture 둘중에 뭐가 문제일까요?
회원작성글 쿠지비키  |  2022.11.03
Q. 박테리아 배양 중 오염
박테리아종인 Bacilus subtilus와 Geobacilus Thermophilus를 유도배양하고 있는데 배양 중 배양액이 매우 탁해지며 거품이 많이 일어나는 현상이 생기면서 균주 배양이 제대로 안되고 있습니다. 활성도 떨어지고 spore로 형성도 되지않는거 같습니다. 오염이 된거 같은데 해결 방법이 있을까요? 배양액에 항생제를 사용한다는데 위 균주 배양시에 같이 사용 할 수 있는 항생제가 있을까요. 선생님들의 고견을 부탁드립니다.        
회원작성글 stanley  |  2022.11.02
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