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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. DAB 염색과 immunofluorescence staining을 동시에 할 수 있나요?
현재 박테리아에서 단백질간 인터렉션을 보기위해 형광항체를 이용해서 더블 스테이닝을 하고 있습니다.그런데 하나의 타겟 단백질과 결합을 하면 다음 타겟 단백질의 항체가 결합하지 못 합니다.첫 번째 항체가 다음 항체의 결합을 방해하는 것으로 판단하여 1차로 결합시킨 단백질을 DAB염색으로 침전만 남긴체 때어내고 다음 과정을 진행하려는 실험계획을 세웠습니다.프로토콜을 찾아봐도 각각의 방법은 있는데 동시에 진행한 방법에대해서는 찾을 수가 없었습니다.그래서 이 방법 자체에 오류가 있는 것인지를 알고 싶고 혹시 이 방법으로 결과를 얻으신 분의 조언이나 이방법이 포함된 논문이 있다면 추천받고 싶습니다.조언 부탁드립니다.
작성자  |  2014.06.14
Q. IHC- IL-1 alpha, TLR-2 실험실에서 하시는 분 계신가요?
기술적으로 여쭈어 볼게 있어서 그런데 답글 남겨 주시면 깊이 감사드리겠습니다 ^^
성현우  |  2014.05.31
Q. 세포 고정 후 pbs에 보관해도 되나요?
cell monolayer로 키운 뒤에 메탄올이나 4% PFA로 fix 한 뒤PBS로 wash하고 PBS 담은 채 4도씨 냉장고에 보관해도 되나요?가능하다면 어느정도까지 보관가능할까요?cell > fixation > 1'Ab 처리 (4도씨 O/N) > 2' Ab 처리실험일정 상 하루 정도 더 밀릴 거 같아서 세포를 보관해야되는데fix 후에 pbs에 보관해도 될지, 아니면 2차 Ab를 혹시 O/N을 해도 될지...고민입니다ㅠㅠ
고정  |  2014.05.08
Q. inflammation 관련 질문입니다 (An-ti inflammation drug)
안녕하세요~항염증제 관련해서 실험을 하려는데요대부분 COX-2를 억제하는 기전의 항염증제가 대부분이더군요AP-1이나 NF-kB등 여러 항염증관련 인자들이있는데 이들을 억제하는 물질을 찾아서 억제한것을 확인한다면 항염증제로 가능성이 있는것아닌가요?왜 주로 COX-2 억제제(아스피린)를 항염증제로 사용하는것인가요?천연물의 특정 성분을 가지고 항염증제 가능 실험을 하려고합니다 이와 관련 실험하고계신분 있으시면 조언좀 부탁드립니다..
회원작성글 질문자  |  2014.04.25
Q. b16 cell로 항암실험 관련 조언부탁드립니다.
현재 b16 cell로 항암실험이 진행중입니다.cell량은 1x10^4으로 s.c injection을 진행 하였으며, tumor grow를 지켜보고 있습니다.대략 1주일 정도가 지나면 tumor의 성장이 보여 그때부터 약물을 경구투여 하고 있는중인데..negative와 차이를 보이지 않습니다.약물의 경우 NK - cell의 활성을 도와주는 약물인데 혹시 b16 cell 말고 다른 항암효과를 볼 수 있는 암세포는 없을까 하여 물어봅니다.
바리  |  2014.04.01
Q. 혈관생성에 관여하는 것들 CD31, vWF, VEGF 등 잘 아시는 분?
Neovascularization, angiogenesis  를 확인하려고 할때제목의 3가지 중 아무거나 하나만 봐도 무방할까요?아니면  어떠한 기작과 path way 에 따라서 봐야할게 다르기에  전부 봐야하는지..일단 VEGF 는 항체가 준비되어 있어서  바로 쓰면 될 것 같은데..나머지 2개에 대한 부분도  같이 확인을 해야할지,  그리고 하나만 한다고 할때 저기서 어떤걸 이요하는게  가장 좋을 지도 (감도가 더 좋다던가.. 좀더 확실하다거나.. 기타 등등)좀 알려주세요.  논문 찾아봐도  뭐가 더 좋다고는 안나오네요..
dd  |  2014.03.28
Q. IHC용 coated slide 추천해주세요
정말 간단한 staining 실험을 하고있습니다. frozen section한 brain  slice를 muto pure chemicals라는 일본 회사에서 만든 silane coating 된 slide glass에 mount 해서 사용했습니다.많이들 쓰더라구요..그런데 상당한 양의 sample을 mount 해서 막상 실험하려니washing 부터 조직들이 떨어져 나가기 시작합니다. 다른 사람들한테 물어보니 coating 된 slide는 조직 절편 올려놓기만해도 절대 안떨어진다는데..전 hot plate에 말리기 까지 하는데도 계속 떨어지네요..심지어 1시간 이상 38도에 말린뒤에도 조직이 떨어져요...사람들이 slide glass 유통기한이 지났거나 불량품일거라고 하는데..당체 겁나서 실험을 못하겠어요..확실하게 잘 붙는 slide 추천좀 해주세요.. 아니면 coating 방법이 있다면 알려주세요..
steinbrane  |  2014.03.12
Q. rat brain으로 파라핀 만드는 방법좀 알려주세요..다른조직은해봤음..
rat brain으로 파라핀 만드는 방법좀 알려주세요..다른조직은 해봤어요장기쪽이랑 대장 피부조직까지 다해봤느데뇌는 첨해보는데뇌할때 주의할점 없나요? 통상적으로 전 탈수시키고 투영화시키고 파라핀 입히고 섹션합니다.뇌도 똑같이하면될까요?뇌할때 관류고정 시켜야하나요 아니면 뇌를 적출시 pbs에 담구고 피가 빠지길 기다려볼까요..연습용이라 생쥐를 죽이긴 그렇고 죽은쥐를 가지고 실험해보려고합니다.꼭 퍼퓨전해야할지요.. 파라핀은 에탄올에 여러번 담구자나요.. 70프로때 빠져나가지않을까 조심스레 추측해보는데 어떤가요?
초보  |  2014.02.25
Q. Microglia marker Iba-1/Ox-6/RT1B/CD11b 의 정확한 차이점이 궁금합니다.
우선. 연구원분들 모두 연말에도 연구에 몰두하시느라 수고가 많으십니다..제가 Rat brain IHC 중 궁금한 점이 생겨 질문을 올리게 되었습니다.Microglia marker 로써 Iba-1/Ox-6/RT1B/CD11b 등 많은 Marker 가 쓰이고 있는데,Microglia 에 발현되는 단백질 중 다른 부분들이라는 것은 알겠는데요..염색시에 나타나는 결과에서 정확한 차이점을 모르겠습니다.혹자는 Iba-1은 발현되는 Microglia 전체를 잡고,Ox-6는 Activation 된 microglia 를 잡는다고 하던데요..논문이나 자료를 찾아보면 Iba-1도 activation 된 microglia를 잡는다고 써져 있더군요..하지만 염색시 나타나는 결과를 보면 OX-6 positive microglia는 Iba-1 Positive 보다그 수가 굉장히 적더군요...그래서... 너무 헷갈리네요..;;각각의 marker 의 정확한 차이를 잘 모르겠습니다.혹시 이 차이를 정확히 (부정확하더라도..ㅠㅠ) 아시는 선배님들 계시다면 도와주세요...;; ㅠㅠ
석사rat  |  2013.12.24
Q. 면역세포(림포사이트)를 이용한 염색을 하려고 합니다~ 제발 도와주세요~
지금 lymphocyte 를 이용한 실험을 처음 접하는 사람입니다.지금 혈액에서 lymphocyte(림포사이트)를 분리한 후 ICC를 실행하려고 준비중에 있습니다.하지만 림포사이트는 둥둥- 부유해서 자라는 세포라서 ICC를 어떡해 해야 할지 감이 안잡히네요.chamber slide에도 림포사이트를 키워봤지만 하나도 붙지 않고,그렇다고 연구실에 cytospin이 있는 것도 아니라서 이용할 수도 없어서요.림포사이트를 coverslip (또는 slide)에 붙일 수 있는 방법을 아시는 분은 제발 알려주세요.더불어 림포사이트를 이용해서 ICC를 잘 할 수 있는 팁도 알려주시면 감사하겠습니다.꼭 좀 도와주세요!ㅠㅠㅠ
히융히융  |  2013.12.19
Q. ETBR로 Immunocytochemistry 하려고 하는데 protocol 검색이 잘 안되네요.. 혹시 아시는분?
단백질 aggregation 내에 DNA가 존재하는 것 같아 immunocytochemistry로 확인하고 싶어요.그래서 ETBR로 ICC하면 일반적인 red파장에서 볼 수 있다는 얘길르 들어서protocol을 찾아보았는데죄다 Agarose gel 예기뿐.. 혹시 ETBR로 ICC하는 방법 아시는 고수님 계신가요? 계시면 방법좀 알려주세요~ 부탁드려요g
ETBRICC  |  2013.11.29
Q. IFN를 제외한 면역증강 실험
안녕하십니까 저는 면역증강분야를 공부하고 있는 석사생입니다.제가 맡은 샘플을 실험하던중 의문점이 생겨 이렇게 글을 올려 도움을 요청하고자 합니다. Cell 은 raw cell을 사용하였구요, NO 와 cell viability를 보기위해 실험을 하엿습니다. 그런데 IFN과 제 샘플을 같이 처리하였을때와 샘플만 처리한 단독군의 수치가 동일하게 나왔습니다.해서 굳이 IFN을 처리하지 않아도 되는가 싶었습니다. 면역실험에서는 기본적으로 cell의 activation을 위해 IFN을 처리하는데저처럼 이런 경우에는 IFN을 처리하지 않아도 실험에 무리가 없는지,IFN을 꼭 사용하여 면역실험을 해야한다면 단독군이 왜 튀는지  알고싶습니다. 많은 코멘트들 꼭 부탁드립니다.
이슬기  |  2013.09.30
Q. Immunocytochemistry 용 PSD-95 antibody
cultured neuron에서 PSD-95 staining을 하려고 합니다. abcam, Synaptic sy 등을 이용했을 때 좋은결과를 얻지 못해서 다른 제조사 antibody를 알아보고있습니다. 추천 부탁드립니다.
PSD-95  |  2013.09.25
Q. Immunocytochemistry
Immunocytochemistry를 해보려구 하는데요. 맨 끝과정에 mount라고 있던데..정확히 몬질 모르겟어요...설명좀 부탁드려요
학생  |  2013.08.21
Q. IHC시 슬라이드 건조 조건
IHC를 수행하고 있는 연구원입니다. 전에는 paraffin으로 하다가 최근에 cryostat이 들어와서 frozen section을 하는데요..정말 힘듭니다.. 조직이 자꾸 망가지네요.. 제 생각엔 슬라이드를 말리는 과정에서 조직이 망가지는 것 같아서요...섹션까지는 별 무리가 없는 것 같은데 슬라이드에 조직이 잘 붙게 하기 위해서 파라핀 때 처럼 38도 hot plate에 올려서 말립니다.(30분에서 1시간 가량) 그 다음에 PBS에 담가서 OCT를 제거하고 슬라이드에 조직만 남게 한다음 ..면역반응을 수행을 합니다. 그런데 면역반응이 일어나고 안일어나고는 차치하더라도 조직이 너무 심하게 자꾸 망가져서요..처음엔 조직이 큼직한 구멍이 있는 것 같더니 요새는 조직 자체가 심하게 망가져있네요..중간 과정에서 조직이 부분적으로 마르는 경우가 있기는 한데...실험할 때 슬라이드가 한 번 물에 젖고 나면 다시는 말리면 안되는지도 알고 싶습니다. 항체 반응 하기 전에는 말려도 상관 없다고 들었던 것 같은데 , 제 생각엔 자꾸 말렸다 젖었다 그러면 조직이 상할 것 같아서요.. 글고 저는 차가운 aceton이나 methanol  에 슬라이드를 고정을 안했는데.. 그거 왜 하는 건가요?  어차피 조직은 샘플링할 때 4% PFA에 고정을 해야 하는데 굳이 슬라이드를 또 고정하는 이유는 먼가요?참 그리고.. 저는 주로 BSA로 blocking solution과 antibody dilution buffer를 만들어 써 왔는데..normal serum을 쓰는 게 좋다고 하더라구요..그럼 normal serum은 2차 antibody의 host와 같은 걸 써야 하는 건가요? 아니면 2차 항체의 target이 아닌 것이라면 아무거나 써도 되나요?(물론 cross reactive가 있는 것 끼리는 피하구요.)
stainer  |  2013.08.12
Q. pig embryo에서 ICC가 잘 안됩니다.
제가 돼지 난자에서 ICC 를 하고 있는 학생인데요.결과가 잘 안나와서요.. 저의 실험에 문제점을 잘 모르겠어서한번 봐주세요.1. Fixation : 4% PFA , RT 20min2. Washing : 0.1% PVA+PBS 3times, 10min3. Permeabilization : 0.5% Triton-X + PBS, 39'C 20min4. Washing : 0.5% Triton-X + 0.5%BSA + PBS 3times5. DNA denaturation (1st Ab: 5mC) : 4N HCl, RT 30min 이 과정은 안티바디 특성상 꼭 필요하기 때문에 HCl  처리를 함6. Blocking : 1% BSA + PBS, 39'C 1h7. Waching : 0.5% Triton-X + 0.5%BSA + PBS 3times8. 1st Ab 4'C overnightt9. Blocking : 1% BSA + PBS, 39'C 1h10. 2nd Ab 39'C 1h11. Washing : 0.1% PVA+PBS 3times, 10min이렇게 하고 mounting 을 하는데 나중에 형광을 확인해보면 전혀 detection이 되지 않아요.. 이 프로토콜로 원래 잘됐었는데 안티바디도 원래 쓰던걸로 새로 주문했는데왜 염색이 안되는지 궁금합니다..ICC 많이 해본 분들 도움좀 주세요 ㅜㅜ
교활한아이  |  2013.08.01
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