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BioLab 최수진 교수
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 카테고리: 전체 > Buffer/Reagent
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. In vivo ubiquitination assay buffer 조성 관련 질문드립니다.
안녕하세요,   In vivo ubiquitination assay를 수행하고 있는데 궁금한 점이 생겨 질문 드립니다.   method는 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3149903/ 위의 article 대로 수행하고 있습니다.   제가 궁금한 점은, 본 article에서 beads wash buffer 조성을 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 M NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40 로 사용하시는데요,   제가 생각하기에는 1 M NaCl 이 굉장히 높은 농도라고 생각되고, 저희 lab에서 사용하는 IP buffer나 다른 ubiquitination assay protocol들 에서는 이런 조성을 사용하지 않는것 같아서 질문드립니다.   혹시 beads wash buffer에 높은 농도의 NaCl 이 사용되는 이유가 있을까요?
회원작성글 웨스턴공장매니저  |  04.24
Q. enzyme unit 관련
 glycoprotein을 분석하기 위하여 PNGase F를 사용하여 glycan을 제거하려고 하는 실험을 진행하려고 하는데요, 시약 sheet를 먼저 읽다보니 잘모르는 내용이 있습니다. 프로메가 데이터 시트인데요 맨 마지막 1 IUB miliunit이란 것이 IUB가 IU와 같은 표현인지 다른 단위인지요? 검색을 해보아도 내용이 나온 곳이 없어서 무슨 뜻인지 막막하네요.
회원작성글 melon20  |  04.22
Q. 시약 제조 관련 질문 첨부파일
TBA 시약 제조해야하는데 과정을 잘 모르겠습니다. 조언 바랍니다.    Reagent Diluent: 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 in Tris-buffered Saline (20 mM Trizma base, 150 mM NaCI) pH 7.2-7.4, 0.2 mm filtered   Reagent Diluent 제조해야하는데 그안에 들어가는 TBS제조과정이 처음이라 모르겠습니다.   1L의 TBS를 만들려면 내용물들을 얼마씩 넣어야하나요?  추가로, 0.2mm filtered는 따로 필터를 통해 걸러야하나요?
회원작성글 PWB  |  04.22
Q. estrogen injection 용 희석
mouse에 estrogen 주사를 놓으려하는데 25mg/ml을 oil 에 2번 dilution해서 25ng/100λ 용으로 만들건데 제가 희석을 잘 할 줄 몰라서..계산을 어떻게 해야 하는 건가용...
회원작성글 뜌류링  |  04.22
Q. 시약 제조 의뢰.
  업체에서 생산되고 있는 기존 10% Neutral Buffered Formalin(10%NBF)가 아닌 업체에 저희가 갖고 있는 10% NBF 제조방법대로 제조 의뢰하고 싶습니다.    혹시 시약제조하는  업체를 알고 계신가요?  
회원작성글 HS.LEE  |  04.19
Q. 혼합 분말을 녹였을때 부피 변화 계산 질문드려요.
안녕하세요. 혼합분말을 도가니에 섞고 고온에서 녹였을때 부피가 확 줄어버리는데 이때의 부피를 예상해서 계산 가능한가요?? 선배님들. 교육좀 부탁드립니다.ㅜㅜ
회원작성글 양맘마  |  04.19
Q. 몰농도계산 도와주세요ㅜ
안녕하세요. 몰농도 계산이 되지 않아서 도움을 요청드립니다. 버퍼를 만들려고 하는데, Tirs 150mM을 50ml에 녹이려고 합니다. Tirs의 질량은 121.14g이라고 나와있습니다. 제가 책을 다 찾아보고 인터넷으로 찾아본 결과 아래의 식을 찾았는데 이게 맞는지 확신이 없습니다. 1. 넣을g=150mM(원하는 몰 농도) x 50ml(원하는 양) x 121.14g(질량)=908550g 이렇게 계산하는 것이 맞나요? (단위가 잘못된거 같은데ㅠ 어디가 잘못된건지 잘 모르겠습니다) 2. Tris-Hcl 150mM (pH7.4)이라고 써있는데 먼저 Tris를 녹이고 Hcl로 pH를 맞추면 되는거죠? 3. 가루를 먼저 넣고 DW를 넣어야하나요? 아님 DW를 먼저 넣고 가루를 넣어야 하나요?   답변해주시면 너무 감사드리겠습니다.ㅠ
회원작성글 청포도  |  04.19
Q. 3M sodium acetate solution을 만들려고 합니다
3M sodium acetate solution (pH 7.0)을 만들고자 합니다 실험실에 anhydrous sodium acetate랑 glacial acetic acid가 있어서 이것들로 만들려고 하는데 recipe을 보니 glacial acetic acid는 pH 맞추는 용도로 사용하는 것 같더라구요 혹시 glacial acetic acid를 DW에 희석시킨 뒤 사용해도 상관없을까요? glacial을 사용하면 후드에서 solution을 만들어야될거 같은데 실험실 사정상 그게 조금 번거로울거같아서 후드에서 glacial acetic acid를 DW에 희석시킨 뒤에 나와서 solution pH를 맞춰야 될 것 같아서요 만약 희석시켜서 사용하는게 가능하다면 얼마나 희석시켜서 사용하는 것이 좋을까요?  acetic acid를 처음 써봐서 기초적인 부분이지만 잘 모르는 것이 많습니다. ㅠㅠ
회원작성글 디디둔둔  |  04.15
Q. chloroform하고 trizol을 같은 폐액통에 버려도 되나요??
chloroform하고 trizol을 같은 폐액통에 버려도 되나요?? 잘 모르겠어서 물어봅니다..
회원작성글 soor  |  04.14
Q. 농도 계산을 조언 부탁드려요ㅜㅜㅜ
potassium ferricyanide  K3[Fe(CN)6] 99.5% 사용해서 1N 용액을 만들고 싶은데 말하는 감자임을 극심히 느끼고 있습니다. 여기에 똑똑하시고 멋진 분들 만은 것 같아서 질문 올려요 감자에게 도움의 손길 부탁드려요..ㅠㅠ 증류수100ml에 몇g 넣으면 될까요??
회원작성글 모지리  |  04.14
Q. 농도 계산이 안되어서 질문 드립니다ㅠ
안녕하세요.  솔루션을 만들다가 도저히 계산이 안되어서 질문드립니다.  0.5% trypsin+ 1X PBS를 1ml 만들려고 합니다. 근데 제가 가지고 있는것은, 0.5% trypsin(X10)짜리와 10X PBS를 가지고 있습니다. 도와주세요ㅠ
회원작성글 청포도  |  04.14
Q. Rat OGTT시 사용하는 Glucose
안녕하세요 저는 의료기기개발 연구소에 있는데 Rat에게 glucose를 경구투여 후  혈당측정을 하려고 합니다. 근데 바이오쪽 관련된 사람이 1명도 없어서 정보 찾는데 너무 어려움이 크네요. Rat 혈당 실험시 보편적으로 쓰는 glucose는 뭘쓰는지 궁급합니다. 현재 저희가 가지고 있는것은 시그마에서 구매한 D-(+)-Glucose인데요. 이 파우더에 대한 정보도 안나와있어서 이것으로 실험진행해도 되는지도 모르겠어요. 보편적으로 쓰는 포도당과 판매처를 알수 있을지 선생님들 제발 도와주세요,, 그리고 당뇨 모델Rat을 사용하고 계시는 분들은 인슐린 주사를 지속적으로 투여하면서 사육하고 계신지도 궁금합니다. 감사합니다  
회원작성글 밍찌  |  04.12
Q. 단백질 라벨링에서 색소사용 관련 질문드립니다
단백질 tamra로 라벨링 진행중에 색소의 양을 너무 많이 집어넣었는데 free dye제거 시 제거가 될까요 정량보다 색소를 많이 넣으면 결과에 문제가 생기나요
회원작성글 공찌  |  04.12
Q. 0.1M phosphate buffer (pH7.0) 만드는 방법 이게 맞을까요?
안녕하세요 0.1M phosphate buffer (pH7.0)을 만드려고 합니다.  phosphate buffer가 sodium/potassium이 있다고 들었는데 논문에는 phosphate buffer라고만 적혀있어 potassium으로 만드려고 합니다. 0.1M potassium phosphate Dibasic(K2HPO4)와 0.1M potassium phosphate Monobasic (KH2PO4) 를 섞어가면서 7.0을 만들면 될까요? 어떤 질문에는 물을 섞으라는 말이 있어서 헷갈려서 올려봐요..!  저는 저 둘을 조금씩 섞어가면서 pH를 맞춘다고 이해했습니다.   
회원작성글 닝난ㅇㅇ웅  |  04.10
Q. 4% PFA 제조 Protocol 중 궁금한 것이 있습니다.
안녕하세요! 이제 조금씩 실험을 하려고 하는 예비석사생입니다. 이번에 IHC를 연습하면서, 기존에 선배님들이 만들어 두신 4% PFA를 제가 다 사용해버렸습니다. 죄송해서 이번주에 제가 만들어 볼려고 하는데요. 브릭 회원분들이  Protocol를 한번 확인해주시고, %에 대한 개념을 정리하는데 도움을 주셨으면 합니다.   [4% PFA protocol] 1. DW 170ml를 Glass beaker에 담고, Hot plate에서 60℃로 가열하고 수동 or 자석교반기를 사용하여 저어준다. 2. 계속 저으면서, Paraformaldehyde Powder  8g 가열된 DW에 넣는다. 이후 60℃로 유지하고 이물질 위해 윗면을 덮어준다. 3. 8N NaOH 200ul를 더한 후, Solution이 clear해지길 기다린다. 4. 가열을 중단하고, 10X PBS 20ml를 더한다. 그 후 6N HCl을 한 방울씩 더하며 pH to 7.2가 되도록 조정한다 5. 생성된 Solution을 Filter로 Particle을 거른 후 냉장보관한다.   [의문점] Q1. 10X PBS를 20ml를 넣어주라고 하는데 행위의 목적은 무엇인가요? 해당 Volume이 어떻게 산출된 것인지도 궁금합니다. Q.2 밑에 제시한 PFA % 계산법 중 오류가 있는지 확인하고 싶습니다.  → PFA % 계산 법 : Total volume에 비례하는 PFA Powder g Total volume = (DW + NaOH + PBS + HCl)  EX)8 /[170+ 0.2 + 20 + ?] = 약 4%   - 8: PFA powder  - 170: DW  - 0.2: NaOH - 20: PBS - ?: HCl
회원작성글 사나래  |  04.10
Q. ELISA 간섭물질( SDS-PAGE sample buffer)
안녕하세요, 이번에 맡은 프로젝트를 진행하던중 문제가 생겨 질문 남깁니다. 제가 monomer로 dimer를 합성하여 ELISA에 쓰려고 하는데요, 한번 합성한 후 page에서 band를 확인해보니 monomer가 monomer상태가 아닙니다. 뭉쳐져있는것처럼 보였어요. 당연히 dimer도 제대로 합성되지 않았습니다. 그래서 뭉쳐진 monomer를 풀어주려고 하는데 sds, DTT가 ELISA에 간섭하는 물질이기에 다른 물질이 있는지 알고싶습니다. 1. ELISA에 간섭을 주지 않는 oligomer, dimer를 monomer로 풀어주는 성분이 있나요?   2. mercaptoethanol은 ELISA에 영향을 미치는지 알고싶습니다. 감mercaptoethanolmercaptoethanolmercaptoethanol  
회원작성글 dhwl9191  |  04.08
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