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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Differentiation/Proliferation
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Q. Cell differentiation 과 ROS 의 관련
Cell or C2C12에서 Differentiation 과 ros가 이에 미치는 영향과 요인 작용 signalling 관련 논문이나 자료추천좀 부탁드립니다.
회원작성글 셀어려움  |  2019.08.27
Q. 근육분화실험관련 대답해주실 천사분 계신가요?!!ㅎㅎ
안녕하세요 근육 분화실험을 하고있는 석사1학기차 학생입니당!! C2C12 cell에서 분화실험 하고  면역형광염색법으로 보려고 하는데요. 면역형광염색을 처음해봐서 그러는데 자세한 방법을 알려주실 분 계신가여??! ex) 12well 이나 6well 에서 실험하려구하고요!! blocking에 BSA?가 들어가야하고 항체도 1:200??으로 해야되나??아무튼 다르다고 하는데 자세히,,알려주실분 계신가여?! 저는 참고로 MyHC(myosin heavy chain)을 보려고 합니당!!   그리고 분화실험 한 결과로 mono에서 multinucleated myoblast 세는 방법좀 알려주세요!! 직접 눈으로 세야하나요? 1well 에있는 cell을 다세야되는건가요,,? 공초점현미경사진을 찍고나서 사진을 보고 세는건가요?? 그래프를 그리라고하시는데.. 직접 다 세면 되나요?!   자세히 알려주시면 정말 감사할 것 같아요!!!!  
회원작성글 냥냥냐냐냥냥  |  2019.08.19
Q. CCK-8 실험시 cell supernatant를 사용해도 될까요?
안녕하세요  CCK-8 실험 프로토콜을 보던중 방법적인 측면에서 궁금한점이 생겨셔요. 프로토콜을 보면  1.세포분주 및 배양 2.다양한 농도의 compound 를 각 well에 처리 3.적정시간배양 4.cck  첨가 5.1~4시간후 450nm 에서 측정 이렇게 살아있는 세포가 있는 well에 cck-8첨가 하는 것으로 나와있는데요 제가 궁금한것은 3번단계후 supernatnat를 1.5ml tube에 옮긴뒤 -20도씨에서 보관후 96well plate에 다시 분주후 cck를 첨가해도 되는지에 대한 여부입니다. 제 프로토콜을 정리하자면.. 1. 세포분주 및 배양(24well plate) 2.나양한 농도의 compound 첨가 3. 일정시간 배양 4. cell supernatant 수거, 냉동보관(-20℃) 5. cell supernatant 100ul을 96well plate에 옮긴후 6. cck 첨가  7. 1-4시간후 OD값 측정          이렇게 supernatant 수거후 96wellplate에 분주해서 실험해도 될까요?                     
회원작성글 깨비스콘  |  2019.07.09
Q. osteoblast 분화를 위해 calvarial bones을 사용하는 이유가 궁금합니다.
저는 osteoclast 분화 실험만 한 대학원생입니다. osteoblast 분화 실험을 하려고 공부중입니다. 논문들을 보면 primary ostoeblast 분화를 위해서는 2-5일이 된 mice의  calvarial bones(두개골 뼈)에서 cell을 얻어서 사용한다고 되어있습니다.   제 질문은 osteoclast를 분화할때 cell을 분리하는 방법인 다리뼈에서 분리한 cell로 osteoblast를 분화시킬 수는 없나요??  없다면 이유가 궁금합니다..  
회원작성글 swy  |  2019.07.03
Q. proliferation실험(chmical 처리)
안녕하세요 이제 실험실에 들어온 초보입니다 이번에 cell proliferation 실험을 하게 되었습니다 문제는 cell seeding 은 모두 끝났는데 테스트할 chemical(약품)을 농도별로 처리해야하는데 새 media 100ul와 chemical을 어떻게 처리하시나요? 예를들어 10,20,30 mM 농도 테스트시 어떻게 계산해서 얼만큼의 양을 넣는지 궁금합니다 기본적인 질문이라 죄송합니다ㅠ 지나가시는길에 한마디만 부탁드립니다
회원작성글 듈리  |  2019.06.27
Q. 3T3-L1 cell Differentiation 과정 컨탐 관련 문의 드립니다!! 첨부파일
이 운동성을 가진 까만 애들이 뭘까요...ㅠㅠ (상하 좌우로 움직여 다닙니다 .ㅠㅠ DIM->DPMday1에서 이것들이 보이네요.. mycoplasma 일까요?.. 하 ㅠㅠ  선배님들의 의견을 말씀해주시면 감사하겠습니다!
회원작성글 니나노오  |  2019.06.20
Q. 세포독성 문의
안녕하세요. 화장품 효능평가를 진행하는 연구원입니다. 질문사항이 있어 이렇게 글 씁니다. 동일한 샘플인데 항염세포인 RAW264.7 에서는 세포독성을 보이지 않는데 미백세포인 B16F10과 각질형성세포인 HaCaT에서는 세포독성을 보입니다. 같은 샘플인데 이런 차이가 나타날 수 있는건지 아니면 제가 실험을 잘못한건지 궁금합니다. 제 실험이 잘못된게아니라면 동일샘플이 왜 세포마다 다른지 이유 설명도 좀 같이 부탁드립니다.  
회원작성글 ysa  |  2019.06.19
Q. 시약의 유효기간
학교에서 루미놀 시약을 버리면서 든 생각입니다. 시약을 개봉하지 않으면 exp가 상관없이 사용해도 되나요? 만일 그렇지 않으면 왜 유효기간이 존재하나요?
회원작성글 easte  |  2019.06.18
Q. 3T3-L1 분화 시 샘플 처리 질문 첨부파일
안녕하세요 체지방과 관련하여 실험을 진행하고 있는 대학원생입니다. 분화 조건을 잡고 있는 도중 셀이 전체적으로 잘 분화되고 있는 모습을 보고 아! 드디어 조건이 잡힌것 같다 ㅠㅠ 하고 기뻐했는데 결과를 내야 하는  과정에서 궁금한 것이 생겨 질문드리려 합니다.   제가 첨부드린 파일을 보면.. MDI 분화 유도를 3일 처리한 후 Insulin 만을 첨가한 배지로 2일 처리한 모습입니다. 그런데 분화가 너무 잘되는 경우 나중에 보고자 하는 sample 이 잘 안먹는 경우가 있다고 들은 것 같아서..   1) 현재 분화 유도 5일차인데 지금의 상태에서 sample 처리 해도 상관없을까요? 아니면 FM방식 그대로 8일차까지 DMEM+FBS10% 배지로 갈아준 후 sample 처리 하는게 좋을까요?   2) sample 처리 시 선생님들은 어떤 방식으로 각 well에 처리해주시는지 궁금합니다.   3) 혹시 Lipolysis assay kit 사용해보신 고수님들께.. ㅠㅠ Kit 는 Biovision(K577-100) 사용중에 있는데요. 설명서에 보면 Remove Wash Buffer and replace with 150 µl Lipolysis Assay Buffer. Add 1.5 µl of 10 µM Isoproterenol (final concentration 100 nM) to wells to stimulate lipolysis. Stimulate lipolysis for 1-3 hr. or longer if desired. Collect media. 이런 문구가 나오는데 여기서 Collect media라는 말은 그냥 lipolysis를 촉진시킨 buffer만을 모으라는 말일까요 아니면 바닥에 붙어있는 cell자체까지 다 뜯어서 media에 모으라는 얘길까요 ㅠㅠ.. 저는 그냥 첨가한 lipolysis assay buffer를 다시 collect 하라는 얘기로 보여지는데 사실 이 부분이 너무 헷갈려서 제가 잘 인지한 것이 맞는지 모르겠습니다...고수님들 도와주세요 ㅠㅠㅠ..!
회원작성글 지방이  |  2019.06.10
Q. cell proliferation 실험중입니다. BrdU labeling 시기가 궁금합니다.
안녕하세요 올해 석사 시작한 연구 초보자입니다. 현재 약리학 관련 분야 연구를 하고 있고, 약물 처리시 cell proliferation과 apoptosis를 관찰하고 있습니다. MTT로 약물 농도별 cell viability는 확인하여 viability가 많이 떨어지지 않는 농도를 잡아 BrdU로 proliferation을 확인하는 실험을 하고 있습니다. 제가 연구실 첫 학생이라 이것저것 자세한 것을 여쭤볼 선배가 없는 상황이라 사소한 질문이지만 브릭 선배님들께 도움을 받고자 질문글을 작성하게 됐습니다.   저는 현재 Roche사의 BrdU cell proliferation assay (ELISA) kit을 사용하고 있습니다.  BrdU 실험을 진행하던중 BrdU labeling 시점에 대한 의문이 생겼습니다. 제품 프로토콜을 보면 각 실험 조건에 따른 일정시간의 약물처리 이후 2-24시간동안 BrdU labeling을 하고 이후 과정을 진행하는 것으로 나와 있습니다. 많은 논문에서 제품 프로토콜대로 실험을 진행 한 것도 확인했습니다. 그런데 여기서 의문점이 있습니다. 약물을 처리한 뒤 일정시간이 지나면 각 조건마다 cell 농도의 차이가 나게 될 것입니다. 그 상황에서 BrdU labeling을 하면, 정확히 cell proliferation을 측정하는 것이 아니라고 생각됩니다. cell 농도가 같은 조건에서 BrdU incorporation이 일어나야 정확히 cell proliferation 속도를 비교할 수 있다고 생각됩니다. 혹시나 약물이 apoptosis도 일으킨다면 더더욱 cell proliferation을 제대로 측정하는 것이 아니라고 생각됩니다. 그래서 논문을 더 찾아보니 seeding 이후 일정시간 starvation media를 처리하여 cell cycle을 synchronize시킨 뒤, 약물처리를 하는 동시에 BrdU labeling을 시키는 경우도 있는 것으로 확인했습니다. 그런데 이 경우에도 문제점이 있다는 자료를 찾았습니다. starvation 이후에 10% FBS media를 처리하면 cell proliferation 속도가 급격히 증가할 수 있다는 것입니다. 그래서 약물의 효과를 sensitive하게 잡아낼 수 없는 것 같습니다. 또한 제가 처리한 약물이 처리 즉시 proliferation에 영향을 주는 것이 아니고, 일정시간 뒤에 cell에게 영향을 주는 약물이라면 위 방법으로 약물의 효과를 제대로 보여줄 수 없다고도 생각됩니다.    이미 위에 말씀드린 두가지 방식 모두 실험을 진행했고, 결과를 얻었습니다. 첫번째 방식대로 했을 경우 결과가 매우 좋게 나오지만, 위에 말씀드린 이유 때문에 MTT와 큰 차이가 없는 실험이 되어 proliferation을 정확히 보여주는 데이터가 아닐 것 같습니다. (MTT보다 더 큰 차이가 나타나긴 합니다) 두번째 방식대로 했을 경우 결과값이 만족스럽지는 못 하지만 변화가 측정되긴 합니다. 그러나 이 경우 실제 cell에게 영향을 준 것보다 효과가 미미하게 나오는 것 같아 약물의 효과를 더 잘 보여주는 세팅을 찾고 싶습니다.   BrdU kit이 가격이 상당하기 때문에 제가 하고싶은대로 이것저것 해보며 세팅하기 부담됩니다 ㅠㅠ 선배님들께서는 BrdU를 어떤식으로 진행하시는지 궁금합니다. 제가 현재 생각중인 방법은 첫번째 방식대로 약물 처리 이후 labeling하여 얻은 결과를 같은 조건의 약물을 처리한 MTT 결과나 cell counting 결과로 나눠주는 것입니다. 그런데 이 방식을 사용한 선행논문이 없어 선뜻 진행하기 꺼려집니다. 선배님의 의견 듣고싶습니다. 감사합니다.
회원작성글 ephedra  |  2019.06.08
Q. 3T3-L1 cell 컨탐 관련 문의 드립니다!! (먼지라는 의견들이있어서 ) 다른분들의 의견도 들어보고싶습니다! 첨부파일
1주전 컨탐관련 문의를 했습니다 DIM 처리 과정에서부터 양상을 보였으며, 그 24well중 1well은 폐기를 했습니다. 그러던 다른 23well에서 7well?? 정도에서 같은 양상을 보였으며.,, 그냥 단순한 먼지가 아니라 생각됩니다. 어떤 종류의 컴탐인지 비슷한 양상을 보신분 있나요?
회원작성글 니나노오  |  2019.05.27
Q. 3T3-L1 cell 오염인가요?? 첨부파일
아무리 찾아봐도 비슷한 사례가 없네요 ㅜㅜ.. 이것도 컨탐의 한종류인가요? 어떤게 원인일까요.. 지금 이 현상만 두번짼데.. 비슷한 사례나 아시는 분이 계시면 도움을 부탁드립니다!
회원작성글 니나노오  |  2019.05.23
Q. 섬유아세포 형태
CCD986sk 섬유아세포를 배양 중입니다. ATCC에서 받아서 T25 flask -> T75 flask로 계대한 후 부터 모양이 요상합니다. 컨텀인지 debris인지 헷갈릴 것들이 있고, 매일 배지를 교체해주는데 셀이 좀 떠있습니다. 무엇보다 전에 키우던 CCD986sk랑 형태가 많이 다른 것 같은데... 어떻게 살릴 방법이 없을까요.. 새로 구매할 수 밖에 없을까요? 1. 컨텀인지. 컨텀이라면 무슨 컨텀? (박테리아라고 하기엔 배지가 탁해지거나 변색되지 않고, 세포는 계속 자람) 2. 세포를 seeding 하고 나서 현미경 초점을 위쪽으로 잡으면, 세포 껍질? 같은게 떠있습니다. 이게 뭔가요? 사진은 Hs68 cell인데 RAW264.7 cell을 seeding 했을 때도 다음날 되면 조금 있더라구요.  
회원작성글 coscoscos  |  2019.05.23
Q. 3t3-L1 분화시 지방이 떠다니는듯한 현상이 발생합니다
지방분화 관련 연구중으로 이미 여러번의 실험을 진행하였고 protocol은 set up이 되어있습니다. 실험중에 Passage때문에 분화가 잘 안되는듯하여 새로 ATCC에서 vial 풀어서 passage 5인 상태로 들어갔는데 분화시작하고 이틀차쯤 되니 분화가 뿌옇게 변해있습니다. cell이 죽거나 Contamination인가 해서 살펴보았는데 배지에 기름이 떠다니듯하게 보이구요 insulin 배지로 갈아 줄때는 Cell이 뜯어진 느낌은 아닌데 Cell도 같이 없어진 것처럼 보입니다 . Control로 쓰는 Preadipocyte도 이런현상을 보이기에 분화 자체보다는 Cell 문제나 Incubator 문제로 생각은 하고있는데 이런 비슷한 현상으로 올라온 질문은 있는데 해결 답안은 보이지 않아서 질문을 올려봅니다.
회원작성글 사랑방선물  |  2019.04.17
Q. Autophagy Western blot 조건
안녕하세요! 저도 Autophagy를 공부하고 있는 대학원생입니다. 혹시 Western blot 조건 한번 알수 있을까요? LC3를 보려고 하는데 단백질이 잘 보이지 않습니다. 실험 할때마다 조건에 많은 영향을 받는거 같습니다. 혹시 membrane은 어떤걸 쓰고 있으신가요? (0.45um? or 0.2um?)  그리고 혹시 전기연동 gel에서 내릴 때와 transfer 할때 쓰시는 연동조건 알 수있을까요? ( voltage, mA, time-연동시키는 시간) gel은 몇 %로 만들어서 사용하시나요?
회원작성글 butterfly5..  |  2019.04.15
Q. 지방분화 안된건가요?ㅠ 첨부파일
oil red o염색하기전의 사진입니다. 염색을하고 마지막에 PBS로 염색을 씻어버려서 염색이 안된건지 분화가 안된건지 궁금합니다.   참고로 지방분화kit를 사용해서 지방분화 하였습니다.
회원작성글 ojb  |  2019.04.12
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