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Q. dish 총용량보다 media 적게넣어도 되나요?
웨스턴블랏을 하기위해서 protein을 뽑으려고 하는데요. 사용하는 dish의 총 volume이 10ml인 것을 사용하고 있습니다. 근데 지금 treatment할 시약의 양이 별로 없어서 media에 적정 농도만큼 넣고 10ml이 아닌 더 적게넣어도 될까요? 안되나요? 전체에 깔릴정도만 되면 될까요?ㅜㅜ  
회원작성글 oneday  |  07.20
Q. mouse ESC 분주시 발생한 문제 질문
안녕하세요.   제가 ATCC에서 구입한 mESC(ES-E14TG2a)를 배양하면서 문제가 생겨 질문 남깁니다. 발생한 문제는, 세포를 처음 해동하고 풀었는데, 하루가 지나도 부착되지 않고 부유한 상태로 존재하고 있습니다. 원래 embryonic cell을 배양할때, 분화를 방지하고 세포 부착을 위해 feeder cell을 공동 배양하게 되는데, 저는 이후 실험을 위해 feeder cell을 사용하지 않고, 0.1% gelatine solution [biological industry] 제품과 LIF [sigma] 를 이용하였습니다. Gelatin coating의 경우 제품 사용 정보와 같이 면적에 충분한 solution을 넣었으며, 인큐베이터 (37도씨)에서 1h 정도 보관 후 gelatin solution을 suction하고 media를 넣고 cell을 seeding하였습니다. (혹시나 여기서 gelatin coating에 문제가 생길 수 있는 점이 있다면 말씀 부탁드립니다.) Media 조성에 대해서는, 기존에 나와있는 논문을 그대로 참고하여 다음과 같이 제조하였습니다. KnockOut DMD main media 1) 15% KnockOut Serum Replacement 2) 2 mM L-Glutamin 3) 1 mM MEM NEAA 4) 100 uM beta-mercaptoetanol 5) 1% P/S 6) 1000 unit/ml LIF 7) 1 uM PD0325901 8) 3 uM CHIR99021 ------------------------------------------------ 배지를 제조 하였을때, 전체적으로 색이 많이 노란색을 띄었습니다. 이 점 때문에, 배지가 이상한것이 아닐까 라는 생각을 했는데, 특정 세포를 배양할때 노란색을 띄는 배지를 사용하는 분이 계셨습니다. 그래서 이것도 들어가는 조성이 비슷한 부분이 있어 문제 없다고 판단을 했습니다. (따로 걱정되는 것이 있다면, MEM NEAA같은 경우 100X로 제품을 판매하였는데, 회사 기술정보를 통해, 제품의 농도가 10 mM인것을 확인하고 10배 희석하여 1 mM농도가 되도록 배지를 제조하였습니다. 혹시 기존 제품의 농도가 10 mM이 아니라서 이렇게 배지의 색이 노란색을 띄고, 그로인해 세포에 문제가 생긴것인지 고민해봤습니다. 이 부분에 대해 MEM NEAA가 많이 들어가게 되면, 혹은 적게 들어가게 되면 배지의 pH가 변하는것에 대해 아시는분이 계시다면 조언 부탁드립니다.)   세포 상태의 경우는 드라이 아이스로 배송되자 마자, 액체질소에 보관하였습니다. 혹시 처음부터 세포에 문제가 있었을 가능성도 생각해 보았지만, 현재 배송된지 1달이 흘러버렸고, 판매 업체에서 제공하는 handling protocol을 그대로 따라 하지 않았기 때문에(feeder cell 사용하지 않아야함) 품질 보증을 받을 수 없을것 같습니다.   현재는 세포를 푼지 하루가 지났고, 아직 세포가 부착되어 있지 않아, gelatin coating을 다시 진행하고, 세포를 그대로 새로운 배지로 이동시키려고 합니다. (몇몇 정보를 보았을때는, 세포가 이미 죽었을거라는 글을 보았고, 조금 더 기다려보라는 식의 글을 보았습니다.) 만약 세포를 이동시켰을때도 부착되지 않는다면, 새로 구매를 진행해야 할 것 같은데, 이후 같은 문제가 발생하지 않기 위해, 여러 정보를 알아보고 다시 준비하려고 합니다. 이 글을 읽고 조언 부탁드립니다.   감사합니다.  
회원작성글 백근영  |  07.20
Q. NK cell 배양 중인데 잘 크고 있는건지 봐주실 수 있으신가요~? 첨부파일
처음 NK 를 배양 해보고 있는 사람입니다.  Cell line 이 지금 맞는건지 잘 몰라서 현미경 사진 첨부합니다.  현 항CD16 코팅 처리한 T75 플라스크에 3일째 배양 중이고. IL-2 2000~3000 IU/ml 처리 하였습니다.   5일째 T175 플라스크로 계대 할 예정입니다.  계대하면서 IL-2, IL-15, 항CD56, 항NKp46, 항NKp30 을 배지 처리하여 하려고 합니다.  NK 세포는 따로 KIT 사용 없이 PBMC 해서 PBMC 층만 분리하여  NK 세포 자극제 투여로 배양 중 NK cell 양을 높이려고 합니다. 첨부 사진 봐주시고, 잘 크고 있는건지 피드 한번 부탁드립니다.  감사합니다.   
회원작성글 Derick  |  07.20
Q. LDH assay를 진행하려고 합니다
LDH assay를 진행하려고 합니다 (THERMO 제품으로)   처음해보는 실험인데, 이게 색깔의 변화를 보고 흡광도를 재는 실험이더라고요   제가 96well plate에서 키워서 진행을 하려고 하는데,   이럴경우 그러면 메디아의 색상이 중요한것 같아서    페놀레드를 뺀 메디아를 사용하는 것이 맞는지 문의 드립니다.   그리고 High Glucose, Sodium Pyruvate, L-Glutamine, Phenol Red가 원래 사용하는 메디아의 메인 조성입니다.   여기서 Phenol Red를 빼면 High Glucose, HEPES, L-Glutamine 구성으로 된 메디아 밖에 없는데 셀에 특별한 영향을 줄까요?  
회원작성글 호랑이라  |  07.20
Q. C2C12 Cell culture 중 궁금한 것이 생겨 질문드립니다!
C2C12 Cell culture 중 현미경으로 관찰 하다보니 위처럼 비정상적인 형태가 관찰되어 질문 드립니다.  빈도가 잦지는 않지만 간혹가다 이런 형태가 보이는데 혹시 Contam. 인가요? 아니면 자연스러운 현상인지 궁금합니다.  Media는 DMEM(high) + 10% FBS + 1% PS 사용하고 있습니다.   
회원작성글 헤업미  |  07.20
Q. u0126처리시 ROS 증가? 감소? 의문입니다. 첨부파일
안녕하십니까 먼저 U0126은 항산화 물질로 작용한다고 알고있었습니다. 하지만 밑에 논문에서 가져온 자료를 보면 U0126을 처리한 군에서 형광 세기가 강하게 나온걸로 보아 ROS가 대조군에비해 증가한걸 알수있는데요.. 그림 자료는 MCF7세포에 처리한 상황입니다.. U0126이 왜 이런 결과를 나타낸건지 알려주실 고수분 계신가요??
회원작성글 까오낫  |  07.19
Q. Hek293 계대 시간
3-4일 간격 즉 월요일 목요일 간격으로 하다가 목요일에 시간이 안맞는 일이생겨, 수요일 밤에 하려고 하는데, 괜찮을까요? 다음 계대는 월요일 9시입니다.
회원작성글 바닷가  |  07.19
Q. HS68 cell 모양이 이런이유는 뭐에요? 첨부파일
ㅊhs68 처음 키워보는데 미디어 갈아주려고 현미경으로봤는데 저렇게 모여있고 모양이 다른이유는 뭔가요? 교차오염인가요...? 군데군데 저렇게 뭉쳐있는데 상태가 많이 안좋은건가요? p.n는 24 입니다! 14일에 stock 풀고 다음날 미디어갈아준 후  오늘 미디어 갈았습니다. 미디어를 자주 안갈아줘서그런가요? 
회원작성글 leedayoung  |  07.19
Q. B16 F10세포 멜라닌 생성 저해 실험 sample blank관련 질문드립니다
더운 날씨에 연구하시느라 다들 수고가 많으십니다 ㅎㅎ B16 F10세포로 멜라닌 생성 저해실험 프로토콜을 만들고 있습니다 다른 cell실험의 경우 sample blank에 MTT시약을 넣지 않는다던가의 미처리 시약이 있는데 멜라닌 생성 저해 실험의 경우 sample blank에 처리하지 않는 시약이 무엇인지 모르겠습니다..   저의 경우 sample, cell과 a-MSH 처리 후 10% DMSO가 함유된 1N NaOH를 처리하는 것으로 알고 있는데 sample blank에 어떤 시약을 처리하지 않는 것인지 알려주실 수 있을까요 ?
회원작성글 도비에용  |  07.19
Q. 안녕하세요, hek293에 transfection 효율 관련 질문드립니다.
안녕하세요, 현재 hek293-cas9 세포주에  gfp가 달린 sgRNA expression vector를 transfection하는 실험을 진행하고 있습니다. FACS로 봤을 때 2번의 실험이 모두 25%정도 efficiency를 보이고 있어 efficiency를 높이는 방법을 찾고 있습니다...   세포주는 본 실험을 위해 ATCC사에서 새로 구매한 세포주를 passage 3-5정도로 풀어서 사용하고 있고요. transfection reagent은 lipofectamine 3000을 사용하고 있습니다. 6well에 90%정도 confluency일 때 실험을 진행하고 있고 serum-free media에 24시간 두면 세포가 많이 죽어버려서 현재 serum starvation 없이 진행하고 있습니다. lipofectamine과 DNA를 처리하기 전에 기존 cell media를 새로운 media(DMEM+10%FBS)로 교체하고, opti-mem에 담겨있는 incuation된 lipofectamine+DNA complex를 처리하고 있습니다. 이후 4h에 세포 상태를 한번 보고, 문제가 없으면 media 24h에 새 media(DMEM+10%FBS)로 교체, 이후 3~4day정도에 facs로 transfection된 세포를 얻고 있습니다. sgRNA plasmid는 나노드랍 장비로 purity check시 순도가 높은 것을 확인하였고 plasmid농도는 1ug/ul의 농도로 실험하고 있습니다.   transfection 후 형광현미경으로 확인 시 transfection 효율이 높아보이진 않았는데, 역시 FACS로 측정해보니 약 25~30%정도의 효율을 보이고 있는 것 같습니다. hek293은 transfection이 잘되는 세포로 알고 있는데, 뭔가 제 실험에 문제가 있는 것 같다는 생각이 강하게 듭니다...   혹시 제가 진행하고 있는 프로토콜에서 개선할 수 있는 방법을 조언해주실 수 있으신가요? 감사합니다.
회원작성글 alsgh9712  |  07.19
Q. 천연항생제 추출물
우리나라 항생제 과잉처방으로 인해 부작용 사례가 많이 일어나고 있다 다른 천연항생제로 대처해야 하는 이유를 알리는 목적으로 실험을 진행하는데 천연항생제 추출물을 흡수시킨 페이퍼디스크를 페트리 접시에 밀봉시킨 후에 하루 건조한 이후 세균 배지 위에 올려놓고 증류수 한 방울씩을 떨어뜨려 확산 결과에 따른 세균 억제 반응을 보는 실험이예요 현재 실험 진행 중인데 이번주 금요일 안에 끝내려고 해요..그런데 문제가 3가지가 있어요 첫 번째 , 미리 선생님께서 구매하신 배지를 잘 되나 확인하려고 미리 세균을 접종해봤는데요 ( 선생님이 지구과학선생님이셔서 생명관련 실험은 잘 모르신다고 하셨어요 ) 배양기에 돌려야 하지만 그때 배양기 사용법을 배우기 전이라 그냥 놓고 한 3일 지난 후 확인해봤는데 빨간 점이 여러개 올라왔더라고요.. 원래 미리 찾아봤을 때는 인터넷에서는 하얀 곰팡이 같은게 널게 올라오더라고요 그래야 실험 결과로 페이퍼 디스크에서 몇 지름에 세균억제 작용이 나왔는지도 알 수 있고요 이 세균 배지로 사용해도 될 까요 두 번째 추출물을 만들때 점심시간에 빨리 만들려고 했으나 종이 쳐서 미리 가루 10g과 에탄올 100ml를 섞어 놓고 파라필름을 씌운 다음 체육하고 나서 바로 다음 쉬는시간에 파라필름을 살짝 열어서 다시 섞고 파라필름 덮은 이후 냉장소에 넣어놨어요.. 바로 냉장실에 넣지 않았는데 괜찮을까요 심지어 파라필름을 가장자리부분을 살짝 떼었다가 다시 붙여서 잘 될 지 걱정되요 세 번째 , 선생님께서 항생제 과잉처방을 지적하는 문제를 배경으로 정했기 때문에 항생제로 추출물을 만들어서 대조 해보라고 하셔서 항생제 추출물 페니퍼 디스크는 어떻게 만들어야 하나요.. 참고로 실험은 3일 걸리더라고요 금요일에 방학식이라 그 전에 끝내야 해요 처음 실험을 혼자 진행해보는 거라 너무 막막하고 힘드네요.. 제발 도와주세요ㅠㅠ세특에 들어가는거라 잘 해야 합니다
회원작성글 블루로즈  |  07.19
Q. 물질의 석출현상을 해결할 수 있는 방법이 있나요?
안녕하세요! 현재 암세포에 물질을 처리해 항암효능을 확인하는 실험을 진행하고 있는 석사과정 학생입니다.  다름이 아니라 물질을 처리하였을 때, 석출현상이 발생하는데 이러한 석출 현상을 해결하는 방법을 아시는 분의 도움을 구하고 싶습니다.ㅠㅠ   석출현상을 해결하기 위해 votex, sonicator를 활용해 보았고 항온수조를 통해 온도를 조금 더 높이는 방법도 사용해 보았지만 석출현상이 계속 일어나고 있습니다ㅠㅠ
회원작성글 익명09  |  07.18
Q. C2C12 cell culture 중 무엇인지 궁금합니다.!
C2C12를 cell culture 중 이상한 형태가 관찰되었습니다. 6well 에서 100% 정도 키운 뒤 GM에서 DM으로 교체 후 약 5일이 지났을 때 cell의 사진인데 지금까지 한번도 보지 못한 형태라 질문합니다!
회원작성글 뉴트리아  |  07.18
Q. gardient PCR 결과 3개의 band가 나타납니다.
안녕하세요 석사과정 1년차 학생입니다.. 혼자 해결하려고 해도 방법이 없어서 도움 요청드립니다. gradient PCR 결과이구요 blast 결과 한가지 gene만 증폭이 가능한것을 확인했습니다. product size 157인것을 보면 위 결과사진에서 맨 아랫줄에 있는 밴드가 맞는 것 같은데, 위에 두 줄이 왜 나오는지 모르겠습니다.. 혹시 63도보다 더 높은온도까지 올려서 PCR을 해봐야 할까요?   다른 gene들 PCR에는 전혀 문제가 없어서, meterial 문제는 아닐 것 같습니다. 해결방안이 있을까요?
회원작성글 wnsl1201  |  07.18
Q. transfection 후 cytokine (tgf-beta) 처리 방법
  안녕하세요  제가 현재 transfection 후 tgf-beta 처리하는 실험을 하고 있습니다.   실험 방법으로는, 첫째날에 cell seeding 을 하고, 둘째날에 trasnfection 을 진행하고 셋째날에 tgf-beta를 처리하고 넷째날에 cell을 모읍니다.   그런데 여기서 tgf-beta를 처리할때 o/n 정도 FBS가 없는상태로 두면 더 효율이 높아진다고 본것같아서 진행하려고 하는데,  그럼 transfection 할 때 fbs가 없는 media 만을 이용해서 transfection 을 진행하고 tgf-beta를 처리하는걸까요?    다른 방법을 생각해봤는데 아니면 FBS 있는 media로 transfection을 진행한 후 tgf-beta 처리할때 FBS 없는 media와 함께 넣어주는게 좋을지 고민입니다.  경험자분들 도와주세요.
회원작성글 실험실학생  |  07.18
Q. cell freezing media
안녕하세요 자주 쓰던 cell 말고 새로운 cell을 구입하여 많이 풀어두고 스탁을 잡을 예정인데요 그전 cell은 DMSO:FBS=1:9로 프리징 미디어를 만들어서 스탁을 잡았는데 셀 종류에 상관없이 위 조성대로 만들어서 스탁 잡아도 되는건가요?? protocol을 찾아보니까 freezing media를 팔긴 파는데 그냥 단순히 프리징 용도여서 혼용해도 되는지 여쭤봅니다.. 참고로 새로 풀 cell은 RPTEC/TERT1 OCT2 입니다. 선배한테 배워서 아는 평소 쓰던 셀 말고 처음 구매해봐서 어떻게 해야할지 여기에 조언 구해봅니다ㅜㅜ
회원작성글 두비두밥  |  07.18
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세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
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이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
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