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Q. ELISA에서 TNF-a, IL-6가 다르게 나옵니다...
안녕하세요 :) 읽어주신 모든 분들 좋은 데이터가 나오길 바라며 질문 하나 올립니다 현재 MLE-12라는 cell로 독성물질을 평가 실험을 진행 중입니다 ! 그러던 중 ELISA에서 TNF-a와 IL-6가 너무 다르게 나와서 막혔습니다.ㅜㅜㅜ TNF-a는 정말 꼼짝도 안하고 IL-6는 dose-dependent 하게 검출됩니다. 여러번 해도 이와 계속 같은 결과만 나옵니다. 그런데 TNF-a와 IL-6는 같이 움직이는 것 아닌가요...? 여러 pathway들을 찾아봐도 결국 서로 관여하던데 어떻게 이런 결과가 나올수 있는건가요 ㅠㅠ 고수님들 의견 부탁드립니다...ㅠㅠ
회원작성글 tptptp  |  04.25
Q. 안녕하세요 GSH ELISA KIT 단위
안녕하세요 GSH ELISA KIT를 측정했는데 결과값은 나왔는데 Figure에 나타내기 위한 단위를 어떻게 작성해야 할지 잘 모르겠어서 여쭤보려 합니다. 세포 lysate에서 측정한 GSH kit 단위는 ug/ml인데 제가 세포에서 BCA 측정 후 단백질로 나눠줬습니다. BCA 단위는 ug/ml 입니다. 최종 단위는 ug/ug protein 으로 나타내는게 맞는지 궁금합니다ㅠㅠ 제가 물어 볼 선배도 없어서 일주일동안 이것 때문에 구글검색만 몇번째인지 모르겠습니 다. 부탁드립니다.ㅠㅠ
회원작성글 초코딸긔맛  |  04.25
Q. DAB staining 관련 질문이 있습니다 ! 첨부파일
dab staining을 처음 진행하였는데 이미지 분석하는데에 궁금증이 생겨 질문드립니다. 제가 마우스 skin을 떼서 frozen section하여 hair follicle관찰을 위해 dab stainig을 진행했습니다. 여태 형광염색을 했는데 잘 안나와서 툴을 바꿔보았습니다ㅜ 1ab로 ki67을 붙였는데 이미지를 보니, 빨간색 화살표로 가리킨 갈색침전물은 ki67이 발현된 부분이겟죠? 그럼 이부분 말고 아래쪽에 hair follicle부분도 검은색으로 염색이 되었는데 이 부위는 ki67과는 관련없는 그냥 멜라닌 색소 침착?같은 건가요?? 그리고 전반적으로 background도 색이 연하게 떴는데 dab반응 시간을 늘려야되는건가요? 저는 9분정도 반응시키고 갈색으로 바뀐거 확인하고 마운팅하였습니다. dab 초보라 도움 부탁드립니다ㅠ
회원작성글 12312  |  04.25
Q. scFv랑 peptide는 무슨 차이인가요?
천연물을 했지만 어떨결에 재조합단백질에서 일하고 있습니다.   제가 알기로 scFV가 VH, VL에 single chain달려져 있는것으로 알고 있는데 이게 peptide하고 어떤 차이가 있는지 이해가 잘 가지 않아서요.   예시로, insulin과 insulin을 통해 scFV을 만들었다면 어찌되었든 둘다 insulin receptor을 인식해 signal을 보낼텐데 fully (insulin)하고 particle (scFV)무슨 차이가 있는걸까요..?   사이즈가 작아서 인식이 더 잘된다??
회원작성글 뚜비뚜삐  |  04.22
Q. Antibody 용량계산
안녕하세요 처음으로 Antibody를 구매하게 되었습니다.   1.GSTT1 100µg - ELISA Tested Dilution : 3 ng/mL https://www.thermofisher.com/antibody/product/GSTT1-Antibody-clone-2D12-1C9-Monoclonal/H00002952-M02   2.GSTM2 100µg - ELISA Tested Dilution : 0.03 ng/mL https://www.thermofisher.com/antibody/product/GSTM2-Antibody-clone-1E10-Monoclonal/H00002946-M03?imageId=654252   위 두가지를 구매 할 예정이고 ELISA 160TEST를 진행하려고 합니다. 실험에 필요한 용량은 어떻게 계산하면 되나요? 답변 부탁드립니다~
회원작성글 2112  |  04.21
Q. Antibody 용량계산
안녕하세요 처음으로 Antibody를 구매하게 되었습니다.   1.GSTT1 100µg - ELISA Tested Dilution : 3 ng/mL   2.GSTM2 100µg - ELISA Tested Dilution : 0.03 ng/mL   위 두가지를 구매 할 예정이고 ELISA 160TEST를 진행하려고 합니다. 실험에 필요한 용량은 어떻게 계산하면 되나요? 답변 부탁드립니다~    
회원작성글 2112  |  04.21
Q. 사이토카인의 단백질 분해 촉진 기전이 궁금합니다.
악액질과 관련하여 단백질 분해 억제 실험을 계획하고 있습니다. 자료 수집중 '호염증성 사이토카인'  (IL)-1, IL-2, interferon 및 tumor necrosis factor (TNF) 등이 악액질 발생에 가장 중요한 역할을 한다는 연구결과를 확인했습니다. 사이토카인은 근단백 합성을 감소시키며, 단백분해를 촉진시키는 역할을 해서 근육량을 감소시키게 되는 것인데, 이때 어떤 기전으로 단백분해를 촉진시키는지 알아보려고 하였으나 자료가 많지 않아 어려움을 겪고 있습니다. 관련된 조언해주시면 감사하겠습니다..
회원작성글 ssk8235  |  04.18
Q. CTL에 의한 target cell lysis와 necrosis, apoptosis
안녕하세요. T cell의 tumor killing mechanism을 공부하던 중 의문이 생겨 질문 드립니다. 논문에서는 T cell이 killing하는 과정을 target cell이 lysis되었다고 표현하였는데, lysis라면 일반적으로 cell이 터져서 내부 물질이 외부로 유출되는 necrosis로 볼 수 있나요? 저는 지금까지 perforin과 granzyme B, IFN-gamma 및 TNF-alpha, Fas-FasL 등의 pathway가 모두 target cell의 apoptosis를 일으킨다고 알고 있어서, 혼란이 있어 질문 드립니다. * 그리고 혹시 ICAM-1과 LFA-1의 binding도 Fas-FasL처럼 extrinsic pathway로 apoptosis를 유도하나요? Bystander tumor killing 시 이 binding이 activated T cell에 의한 killing에 대해 susceptible하게 만든다고 하는데, 관련 자료를 찾지 못해 추가 질문 드립니다.
회원작성글 dj_hwn  |  04.17
Q. CD11c+F4/80+CD11b+
논문에서 'CD11c+F4/80+CD11b+' 이렇게 나오는데 이게 무엇을 의미하는건가요 marker랑 CD11c+, CD11b+ 가 결합하고 있는것인가요?
회원작성글 haniy  |  04.14
Q. IgG Fc에 특정 물질을 붙이려 하는데요
회의하다가 IgG를 사서 Fc에 binding해보자라는 말을 했는데 여기서 IgG가 어떤 IgG인지 이해가 안가네요.   웨스턴할때 사용하는 항체는 b-actin을 타켓하는 p65를 타켓하든 했는데 갑자기 IgG라하니... 어떤 놈(?)에 대해서 항체인지 이해가 잘 안갑니다.    아니면 마우스든 뭐든 아무거나 찌르고 IgG만 collection만 한 것들을 통칭으로 말하나요?    
회원작성글 뚜비뚜삐  |  04.13
Q. mouse osteocalcin elisa kit 문의
mouse plasma osteocalcin관련 문의드립니다.  N-Mid osteocalcin 과 그냥 osteocalcin 이 무슨 차이인가요?
회원작성글 twosun6  |  04.13
Q. IF 항체와 관련 제품 고르는 것 도와주실분ㅠ 첨부파일
안녕하세요. 3T3-L1 지방세포로 연구 중인 대학원생입니다.    IF를 셋팅 중에 있습니다. 다른 연구실을 통해서 배우고 있는 중이라,  사소한 것 하나하나 물어보기가 쉽지 않네요..    저는 산타크루즈의 UCP1 (E-6): sc-518171 항체를 사용하려고 합니다.  그런데 UCP1 항체 (E-6) FITC (sc-518171 FITC) 라는 항체가 또 있더라고요.    저는 일차 항체를 붙이고, FITC가 붙은 이차 항체를 사용할 예정인데,  혹시 일차 항체도 FITC가 붙은 것으로 사야만 하나요?    그리고, 일차항체는 UCP1 항체 (E-6)를 사용하고 이차항체는 아래 두 제품 중 하나를 사용할 예정입니다.  - Goat Anti-Mouse IgG Antibody, (H+L) FITC Conjugated (Sigma, AP124F) - Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, FITC (A16079, Invitrogen)   또한 MitoTracker 제품도 두 제품 중에 하나를 선택할 예정입니다.  - MitoTracker® Red CMXRos (CST, 9082S) - MitoTracker® Red CMXRos (Invitrogen, M7512)   마지막으로 DAPI DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) (Thermofisher, D1306)   제가 일련의 제품들을 잘 선택한게 맞을까요..?   추가적으로 현재 학교에서 사용중인 컨포칼용 현미경 셋팅 사진을 첨부합니다. 
회원작성글 살려주세요1234  |  04.13
Q. phage display 과정 질문입니다.
phage display 관련 실험을 하기위해서 공부하는 초보 연구원입니다.   phage display관련 자료를 찾아보니  패닝->콜로니 피킹->항원-항체 상호작용->기능적 스크리닝  이순서더라구요. 오늘 교육받은건 패닝 과정입니다. 기본적인 패닝 과정은 알겠는데. 그과정속에 helper phage 작용과정 등  부수적인 과정이 있는데 잘 이해가 되지 않아서요 ㅠㅠ  혹시 조금 자세하게 적은 과정이 있을까해서 질문드립니다.
회원작성글 mito59  |  04.12
Q. ELISA Cytokine IL-1β, IL-6 Sample 처리에 관한 궁금한 점이 있습니다.
안녕하세요 이제 막 입학한 초보 석사입니다.   이번에 ELISA을 통해 HaCaT cell에 drug 처리를 하여 나온 IL-1β, IL-6의 생성량을 보려고 합니다. 하지만 결과는 Standard는 R^2 0.997정도로 잘 나오는 반면 Sample은 Blank와 인접한 결과를 나와서 고민입니다.   Sample assay는 seeding -> starvation 24H -> Treat -> Harvest(media 상등액을 12,400rpm 10min 처리 후 다시 상등액을 -20도에서 보관) 입니다.   ELISA assay는 kit 제조사인 R&D system의 지침대로 진행하였습니다.   ELISA 중 standard와 sample을 96well plate에 넣을 때, Harvest한 media을 원액 그대로 넣어주었는데요.   Bric에서 검색하였을 때, 대부분 Media을 적절한 희석액에 희석 후 사용하셨던데, 희석하지 않고 그냥 사용시 media의 성분에 의해 간섭이 생길수있다는 글을 봤습니다.   혹시 media을 희석하지 않아 ELISA 결과에 문제가 생긴것인지 여쭙고 싶습니다.     아 참고로 media는 DMEM을 사용하였습니다.
회원작성글 pplloo  |  04.11
Q. direct elisa와 indirect elisa 의 차이점 그리고 indirect elisa의 장점이 뭐가요???
direct elisa와 indirect elisa 의 차이점 그리고 indirect elisa의 장점이 뭐가요???  indirect elisa 가 검출하는게 더 증폭된다고는 알고있는데 왜 더 증폭되는지 궁금합니다 좀 자세히 알려주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠ 
회원작성글 대학원 가고 싶어  |  04.09
Q. Lewis lung carcinoma(LLC) tumor tissue에서의 density gradient centrifuge
저는 mouse에 s.c로 injection한 LLC tumor 조직을 gentleMACS로 dissociation 후 그 안에 존재하는 면역세포들을 분석하고 있습니다.  그런데 flow cytometry시 tumor cell에 의해 aquisition 시간이 너무 오래 걸려 leukocytes를 enrichment 시키기 위해 density gradient centrifuge를 진행하고자 하였습니다.  제가 찾아본 protocol 상에서는 Cytiva 사의 percoll 제품을 기준으로  40%-80%, 30%-70%, 44%-67% 등의 조건으로 낮은 농도의 solution에 cell을 re-suspension 후 overlay 하여 centrifuge를 돌리는 것으로 나타나 있는데 실제로 진행해보면 분리가 잘 되지 않아 경험자의 조언을 듣고자 합니다.  지금까지 해본 조건으로는 위 언급한 %의 percoll을 이용하여  1. 325g acc. 5 brake. 5 25min, RT 2. 600g acc. 0 brake. 0 30min, RT 3. 800g acc. 0 brake. 0 30min, RT  로 진행하였는데 모든 cell이 interphase에 모여버리거나 거의 대부분 pellet으로 down 되어 버리는 현상만이 관측되고 있습니다.  해당 tumor cell로 density gradient centrifuge 실험을 해보신 분이 계시다면 tip을 알려주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 Coolzinc  |  04.08
Q. ELISA kit 측정시 사람마다 다른 값이 나와요
제목 그대로 kit 측정시 사람들마다 다른 값이 나옵니다....ㅠㅠ   스텐다드는 항상 나오는데 어떤 사람이 측정하면 -값으로 나오는데 다른사람이 측정하면 +로 검출되거나 N, C 군이 차이가 나지 않았는데 다른사람이 측정하면 차이가 나거나   솔직히 kit protocol이 어려운게 아니고 하라는대로만 하면되는데... 그리고 실험실 온도는 거의 일정하게 유지가 되고있습니다ㅠㅠ 인큐베이터에 넣어 동일한 온도로 반응시켜도 사람마다 차이가 너무 심하게 나는데 어떠한 문제가 가장 클까요 ㅠㅠ? 워시할때 버퍼가 남아있을 가능성도 거의 없습니다 ㅠㅠ
회원작성글 후후리야  |  04.08
Q. IP & IB 진행시 주의할 사항에 대해...
안녕하세요 IP 실험을 training 중인 학생입니다. Training 중이라서 간단하게 Syk protein에 대해 IP를 진행하고 IB로 p-Tyr과 Syk를 detection하려고 하는데요... p-Tyr과 Syk조차도 detection이 안되고 있어요... 다른 과정에서 문제가 있을 수도 있겠지만 IB를 진행하면서 1st Ab 사용시 WB만을 진행할 때와는 다른 주의해야할 사항이 있을까요...?
회원작성글 blak5971  |  04.07
Q. elisa 계산 질문입니다!
안녕하세요 ELISA를 처음 해보는데 값 계산 관련하여 질문드립니다.  protocol 대로 하고(3반복) 450nm에서 측정한 후 standard surve를 그려 흡광도를 대입하여 target sample의 농도를 구했습니다. 문제는 1개의 sample 당 흡광도 값의 차이가 너무 큽니다. 1. wash 할때 멀티 파이펫으로 200ul/well 해서 하는데 이것 때문일까요? 2. 논문에서 보여주는 농도 값은 3반복의 각 농도 값을 평균 낸 값인건가요?  3. 3반복의 값 중 2개의 값이 비슷하다면 2개의 값만으로 평균을 내도 되나요? 4. Versa max spectrophometer 를 사용 중인데 elisa-endpoint / elisa-kinetic 중에 endpoint를 사용하는게 맞나요?      
회원작성글 석사시작  |  04.06
Q. elisa capture antibody
elisa를 시작한지 얼마 안된 사람입니다.... elisa 하고 o.d값을 보면 standard의 4 point 정도의 well만 capture antibody가 well 바깥쪽에만 집중적으로 붙어있어요,....... well에 capture antibody 주입할 때 tapping이랑 vortexing이랑 spin down 잠깐 해서 충분히 골고루 주입했다고 생각하는데 왜 이러는건지 정말 모르겠어요ㅜ well에 주입할때 well 벽면에 팁 끝을 조금 붙여서 바깥쪽으로 흐르게 주입해서 그런걸까요... well에 주입 후 plate tapping이 덜 되어서 그런건지 정말 감이 안잡힙니다. elisa 고수님덜 도와주세용ㅠㅠ
회원작성글 고구마말랭이  |  04.04
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