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오늘 1
Q
안녕하세요. qPCR로 RAW 264.7 cell에서 IL-1β 발현을 보고 있는 중인데, 자꾸 Ct 값이 흔들립니다.. 그래서 fold increase 값을 계산했을 때도, LPS 발현 정도가 700~3000 정도까지 차이가 나요ㅠㅠ RAW data들을 보면 유독 아무것도 처리안한 NT의 Ct 값이 27~31정도로 흔들려서 fold 값을 계산했을 때 차이가 많이 나는 것 같은데 혹시 이유를 알 수 있을 까요? NT가 흔들리는 거면 cell 상태의 문제일까요? DNA는 현재 2 ㎕씩 1 step으로 넣고 있는데 2 step까지 넣어야 할까요? 혹시 비슷한 경험 있으셨던 분들 답변 주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ
24.03.30
1. Standard mix 4종 표준물질 Lot No. 라벨 보관 조건 CoA 함량(%) 채취량 용매(Acetonitrile) SCN Stock.(ug/mL) A 실온, Light sensitive 0.9810 2.6 25 102.024 B 0~ 10도 0.9850 2.4 25 94.560 C 2~8도 0.9800 2.5 25 98.000 D 0~10도 0.9970 2.4 25 95.712 E 2. Result of content analysis by HPLC A B C D E mean 10.522 103.207 30.132 69.672 982.157 교수님이 개인적으로 표준물질에 대한 HPLC를 하고 오셔서 저에게 라벨링 요청을 하셨습니다. 학부생인 저로써는 처음 하는 일이라 선배님들의 도움이 절실한 상황입니다. 표준물질은 적갈색의 분말입니다. 각각의 표준물질을 weighing을 해서 A: 0.0026g, B: 0.0024g, C: 0.0025g, D: 0.0024g, E: 0.0110g이 측정 되었습니다. 예) 표준물질 E 11 x 1/100 x 1000 = 110ug/mL 이 나왔고 이에 해당하는 HPLC mean 값이 982.2 110 x 0.9822 = 108.042ug/mL 라는 결과식이 나온다고 배웠습니다. 여기서 질문이 있습니다. 첫번째로 1.5ml microtube 11개(적갈색) 와 5ml microtube 20개(노라색)를 가지고 오셨습니다. 각각이 무엇이며, 라벨링을 할때 조제일자와 농도 표시를 하면 되는것인지 여쭤봅니다.
24.03.29
안녕하세요 현재 연세대학교에 근무중인 연구원입니다. 이번에 클로닝 간 사용할 벡터가 필요하여 분양을 알아보고 있는데, 혹시 아래와 같은 BBR1 ori 계열의 클로닝 벡터를 가지고 계신 분이 있다면 연락을 요청드려도 괜찮을까요? - pBBR1MCS-2, pBBR1MCS-5, pSEVA434, pSEVA251, etc. 저희 연구실에는 아래와 같은 플라스미드 등을 보유하고 있으며 맞교환으로 필요하신 분이 계시다면 메일로 연락주시면 감사하겠습니다. 연구자원으로 민감하실 수 있는 부분을 고려하여 header의 중재를 통해 잘 커뮤니케이션 하도록 하겠습니다. - pACYC184 - pBBR-lux - pDS132 - pEGFP - pBAD18 - pBAD24 - pET-28a - pET-28b - pET-28_EGFP - pGST-parallel2 - pHIS-parallel1 - pKT25 - pmCherry-C1 - pUT18C - pUHE21-2 E.mail : yonghyun09@yonsei.ac.kr 감사합니다.
안녕하세요 건강기능식품회사에서 진세노사이드 3종(Rg1, Rb1, Rg3) 분석하고있습니다. 그런데 요번에 우황청심원처럼 씹어먹는 환제 제품의 진세노사이드를 분석할 일이 생겼습니다. 환제는 처음 분석해봐서 전처리를 어떻게 해야할지 잘 모르겠습니다... 현재 분말시료 분석할 때 사용하는 전처리 과정은 다음과 같습니다. - 환류추출기용 둥근플라스크(24/40)에 시료 약 2 g을 취하고 70% MeOH 50 mL를 가해 75℃ 조건에서 1시간동안 환류추출한다. 추출액의 상징액을 50 mL conical tube에 옮겨담고 15분간 원심분리(3.000 rpm)한 후 상징액을 감압농축기용 둥근플라스크(29/42)에 옮겨담는다. 원심분리하고 남은 침전물을 50 mL의 70% MeOH을 이용하여 회수하고 앞선 추출에서 남은 침전물과 함께 다시 1시간동안 환류추출한다. 추출액의 상징액을 50 mL conical tube에 옮겨담고 15분간 원심분리(3.000 rpm)한 후 상징액을 앞서 받은 둥근플라스크에 옮겨담는다. 감압농축기를 이용하여 60℃ 조건에서 감압농축한다. 농축된 둥근플라스크에 초순수증류수 10 mL로 회수한 후 0.45 μm syringe filter로 여과하여 HPLC 분석의 시험 용액으로 사용한다. 이렇게 분말시료 하듯이 전처리를 해도 될지 아니면 다른 방법이 있는지 궁금합니다. 환제 진세노사이드 분석해보신 분 계시면 전처리를 어떻게 하셨는지 질문드립니다!
아미노산이 얼마나 보존되어있는지 확인할려고 하는데 어떤 사이트를 사용하는 것이 좋을지 의견 듣고 싶습니다. 사진처럼 나오는 프로그램이 어떤것인지 아시는 분 있을까요?? 그리고 그 외에도 추천하시는 사이트 or 프로그램 있으면 알고 싶습니다. ㅠㅠ
논문에서 enrichment를 진행한 샘플에서 DNA를 추출한 후에 해당 DNA를 사용해 qPCR을 진행했다고 합니다 biomarker로 사용한 유전자의 카피수를 확인한 결과를 넣었는데 다양한 미생물이 섞여있는 컨소시엄에서 한가지 유전자만을 증폭하려고 하는 경우에 DNA를 사용해서 qPCR을 하나요? 유전자의 발현정도를 확인하기 위해서는 mRNA를 사용해 qPCR을 진행한다고 알고 있는데 DNA를 사용해서 유전자의 발현 정도를 확인할 수 있나요?
염모제의 주성분확인시험건으로 시험 의뢰 기관에 여러 컬러의 염모제를 요청했는데요, 그 중 한 컬러에서 1개의 주성분만 불검출 되었다고 연락이 왔습니다. 시험은 KFCC 방법에 따라(첨부파일 참고) TLC로 진행했습니다. 전개용매 (KFCC) 발색제 (KFCC) 이소프로필에테르•아세톤•이소프로판올혼합액(10:1:1) 초산에칠•벤젠•초산혼합액(10:10:2) 초산•벤젠혼합액(1:1) p-디메칠아미노벤즈알데히드•묽은염산용액(0.5 → 100) ※ 확인해야 될 성분 : 4-NITRO-O-PHENYLENEDIAMINE(p-니트로-o-페닐렌디아민) (같은 성분이 다른 컬러에서는 검출이 확인되었습니다. 워낙 함량이 적어서 검출이 안 된건가 싶기도 합니다.) 본사가 일본인데 일본 시험 기관에서는 염모제의 주성분확인시험을 LC로 한다며 구체적인 제시를 할 수는 없지만 아래와 같은 대안을 말해줬습니다. ● 전개 용매 : 전개 용매에 알코올계를 조합해봐라(에탄올이 또는 메탄올). 사용하고 있는 유기 용매와는 약간 성질이 다르기 때문에 분리할 수 있는 가능성이 있다고 생각된다. ●발색제 : 요오드로 바꿔봐라. Q1. 대안에 따르면 전개용매는 알코올계를 조합해보라고 하는데 기존 전개용매를 참고해 어떤 조합 및 비율로 하면 좋을까요? Q2. 전개용매는 그대로 놔두고 발색제만 바꿔도 검출이 될 확률이 높은가요? Q3. 이외 다른 방법이 있을까요? 직접 실험을 하는것도 아니고 의뢰기관에 전개용매 또는 발색제를 명확하게 제시해줘야 하는 상황인데 제가 이쪽으로 아는 것이 없어서 검색하던 중 이곳에 문의하게 되었습니다. 혹시 조금이라도 도움을 주실 수 있는 분 계실까요?...
안녕하세요. 제가 현재 Enzyme을 활용하여 실험 중 biotin과 ATP가 결함되어 형성되는 biotin-AMP의 형성을 추출하여 LC-MS 분석을 통해 관찰하고자 하는 실험을 진행중인데 잘 진행이 되지 않아 관련 실험에 대해 질문하고자 글을 올립니다. enzyme의 반응 과정 중 intermediate인 물질인대 해당 step에서 quenching하여 LC-MS 분석 및 추출을 위한 실험에 대해 해보셨거나 reference를 아시는 분 계신가요..?
안녕하세요 두개의 gel을 동시에 로딩하고 각각 B-actin과 FYN항체를 붙여보는 실험을 진행 중 입니다. 분명 Transfer와 blocking, 1차 항체 처리까지 잘 된것을 확인하고 2차 항체를 처리했습니다. 그런데 중간에 잘 되고 있나 확인하기 위에 shaker위에 있는 membrane이 담긴 통을 열어보니 membrane 끝까지 잘 내려가 있던 마커가 이렇게 쪼그라져 있었습니다. 뭐가 문제인걸까요.. las기계에서 detection은 문제 없을까요??
안녕하세요 MTT assay 중 질문이 있습니다. 해당 실험 중 Control의 경우 drug treat 대신 drug을 녹였던 용매를 넣어줘야 하는 걸로 아는데, 제가 샘플들을 녹인 용매는 DMSO로 10mM으로 stock을 제조한 후 media로 serial dilution 해서 사용하고, well에는 10uL씩 로딩입니다. 이때, control에는 어떤 농도의 DMSO를 drug 대신 넣어줘야 하는지 궁금합니다. 추가적으로 sample: cell o / drug o / MTT o blank: cell x / drug x / MTT o control: cell o / dmso o / MTT o 상단에 있는 부분도 맞는 지 확인해주시면 감사드리겠습니다. 감사합니다.