안녕하세요 선생님들. 불철주야 연구에 매진하시느라 다들 고생 많으십니다.  저는 PBMC 관련 시약 연구, 개발 하고 있는 소상공인 입니다. 어떤 계기로 NK cells  에 관련하여 호기심이 생기기 시작했고, NK cells 을 배양 해보고 싶은 마음에 관련 논문 및 프로토콜 숙지 후 생전 처음 써보는 IL-2를 겁없이 50㎍ 짜리 두개를 덜컥 구매했습니다. (제품 : perrotech 사 Recombinant Human IL-2카달로그# 200-02) -제품 및 IL-2 정보 주신 '지나가는생물학자' 님 감사합니다 :) -  무식하면 용감하다고..ㅠㅠㅠ 나름 관련 공부 한 사람이라는 안일한 생각으로... 구매시 딸려오는 sheet 나 CoA 에 있는 protocol 로 하면 될꺼라는 용기로 시작했는데요. 첫 스탭 부터 막히기 시작하네요ㅠㅠ 각설하고 질문 드립니다.. 도와주세요 선생님들 ㅠ  ----------------------------------------------------------------------------- 제품은 저번 주 에 받고 현 -80(-70set) deep freezer에 넣어놨습니다. 같이온 CoA(sheet) 지 에 있는 Reconstitution 방법에 100mM 의 Acetic Acid 로 녹이는데 0.1-1.0 mg/ml 로 하라고 되어 있습니다. 음... sheet 에 적힌 protocol 은  이게 끝입니다ㅠ   ------------------------------------------------------------------------------ 질문 1번   Sheet 지에 Acetic Acid로 녹이라고 되어 있어서 Perprotech 사에 전화로 문의를 해보니, Acetic Acid로 녹이는게 가장 효율이 좋고, 기타 다른 물질로 녹여서 효과가 안나오는 것은 Claim 처리가 불가하다 라는 답변을 받았습니다.  여러 논문 및 질문 답변 내용은 보통 PBS로 녹이는거 같은데, PBS로 녹여도 상관 없는건가요??    질문2번  최대한 fresh 한 상태의 IL-2 를 사용 하려고 합니다. 50ml 미디어에 한번 넣어줄 만큼 분주 하려고 합니다. 지금 가지고 있는 IL-2의 양은 50㎍ 씩 포장되어 있는 2 바이얼 입니다. (총 100㎍) 하나를 까서 분주 한다고 하고, 50ml 미디어에 한번 넣어줄 만큼씩 IL-2를 분주 한다고 했을때 50㎍ 를 얼마의 PBS 나 Acetic Acid 양으로 녹여야 하고,  얼마의 양으로 분주를 해놔야 할까요? (ml 나 ul 단위로 부탁드립니다.) NK배양 해보신 선생님들 께서 쓰시는 양 말씀 주시면 감사하겠습니다. 해안을 부탁드립니다 선생님들 ㅠㅠ 감사합니다.                

astroglia에 대한 feeder layer를 이용해서 neuron culture를 진행하려합니다.   논문을 보니 이와 관련된 method에서 feeder layer라는 말이 많이 언급되는데 정확하게 이게 뭘 말하는지 이해가 안됩니다....ㅠㅠ   Astroglia cell feeder layer라는게... Astroglia cell을 말하는건지, 아니면 cell을 키운 media를 말하는건지;;  정확하게 어떤걸 말하는걸까요?ㅠ

plate 에서 colony를 pick해서 4ml에 seed를 진행하는데 O/N 후에 2차 pre culture 를 진행하라는데 2차 pre culture은 도대체 어떤건가 싶어서요 보통 seed culture 후 main으로 넘어가는걸로 아는데 pre culture 을 2번이라고 하라고해서요…

안녕하세요. 질문이 있어 글을 남기게 되었습니다.   이건 제가 찍은 cell 사진인데요.. 이 사진이 빛이 너무 세서 컬러처럼 보이는 건지 컬러로 찍은 건지 잘 모르겠습니다.. 이전에 찍은 세포들처럼 완전한 흑백으로 보이지 않아 질문드립니다..

Cell culture subculture ratio 비율이 1:5가 되도록 하고 싶은데,  현재 cell plate가 5판 정도 있습니다.  5판의 세포를 모두 걷어서 centrifuge를 돌린 후, pellet이 만들어지면 거기에다가 media 5ml를 넣고 1ml씩 새로운 plate에 분주하면 될까요? 

안녕하세요 Cell stock을 만들 때 10%FBS를 사용하라고 되어있는데 왜 굳이 10%FBS를 넣는지 아시는 분 계신가요?

DMEM/High Glucose 조성 중 L-glutamine, Glucose, Soduim Pyruvate가 들어가는데 이들 각각의 역할이 무엇인가요?ㅠㅠ

안녕하세요. 학부생입니다. Stock을 어제 풀고 오늘 media change하려고 봤더니 이런 동그란 게 있습니다. 다른 부분들은 괜찮은데 특정 한 부분만 저런 동그란 게 있습니다. 이거 컨탬일까요..?? 초점은 cell이 아닌 저 이상한 부분에 맞췄기에 cell은 사진에 안 보이네요ㅠ

안녕하세요 배지 제작 중 항생제 농도에 대해 궁금한것이 있어 여쭤봅니다. 지금 가지고있는 항생제가 시그마 5000 units penicillin, 5 mg streptomycin and 10 mg neomycin/mL 제품입니다.  보통 세포배양에 100unit/ml으로 많이 사용한다고 하여 저렇게 제작하려고합니다. 또 전체 배지의 1%로 항생제를 첨부한다고 알고있습니다. 따라서 가지고 있는 항생제를 50x로 보면 500ml의 배지원액의 1%는 5ml, 50x짜리를 가지고있으니 100ul를 넣어야 한다는 계산이 나오는데 맞나요?.. 너무 적게 나오는것같아 이상해서 여쭤봅니다.. 다른 글에서는 항생제 100x 짜리로 100ml 배지원액에 첨부할때 1ml넣으면 된다고 해서요..이분 말대로 하면 저희는 10ml을 넣어야 하는건데 혼란스럽네요 ㅜㅜ 답변부탁드립니다..

왕초보 연구원이 처음으로 u87세포를 키우고있는데 seeding할때 75t flask에 3x10^4개를 넣고 7일동안 키웠습니다!   그런데 세포 모양이 변한것 같아서 사진 첨부합니다 (가운데에 동그란..세포?같은것이 생겼어요)     혹시 아시는분 알려주세요 (((((고수님들 제발~~~~~)))))))))도와주세요!!  

이번에 agar를 이용하여 스페로이드 셀을 만들려고 하고 있습니다. 현재 가지고 있는데 agar는 Bacto agar인데, 찾아보니 미생물배양을 할 때 사용한다고 나와있었습니다. 이 agar를 spheroid제작에 사용하여도 될까요>?

A549 세포를 키우고 있었는데요. media change를 하려고 플라스크를 꺼냈는데 배양액 색이 노랗게 변해 있었고, 플라스크를 흔들었을 때 하얗게 흘러 내리는 게 보였어요. 현미경으로 관찰했을 때, 짧은 막대 형태의 세균이 관찰되었습니다.  어떤 세균의 종류인지, 손에서 감염된 건지 등의 감염 경로를 알고 싶습니다.     

MEF cell을 prep하는것부터 해서 culture까지 setup중입니다.   질문드리고 싶은것이 처음에 prep하고 난뒤 4시간후 미디어 change해주고 그다음날 cell stock을 만들어놓고 풀어서 사용중입니다.   그런데 스탁으로 만들어 놓았던 MEF cell을 풀면 뜨는 cell도 많고 계속 미디어 change하며 살려보려해도 꾸준하게 뜨는 애들이 있네요   미디어를 10% FBS DMEM high로 사용하고있는데 serum양을 늘려야할까요  전반적인 MEF cell culture에 관해 조언 부탁드립니다. 

안녕하세요.   corning 사 제품중 Matrigel hESC-qualified Matrix, 5ml vial (Cat #. 354277) 제품 관련하여 문의드리고자 합니다.   iPSC cell culture를 위해 Matrigel coating을 하여 사용하려하는데, Matrigel 농도가 얼만지 확인이 힘들어서요; datasheet에는 dilution factor 가 340이라고 되어있는데, 제품 현재 농도를알아야 저희가 원하는 농도로 dilution 하여 사용할 수 있지 않을까 생각이됩니다. 아무리 찾아봐도 농도를 확인이 힘드네요.  저희는 final conc를 10mg/ml농도로 사용하려합니다.   이부분에 대해 확인 부탁드립니다.   감사합니다.  

안녕하세요. 미세조류의 exopolysaccharide 정량을 위해서  페놀황산법을 이용하여 다당류함량을 정량하려고 합니다.   샘플1ml당 황산 5ml, 페놀 1ml을 첨가하면 되는데 샘플이 동결건조하고 난후의 가루 상태일 때는 어떻게 진행하면 되는지 궁급합니다.   조언 부탁드려요... 감사합니다.

안녕하세요 논문을 보다가 사람의 hepatocyte를 이용해 실험했다는 것을 보고 사람의 hepatocyte를 분리하는 방법에 대해 질문하고 싶습니다 Mouse에서는 살아있는 상태에서 셀분리를 진행하게 되는데 사람은 어떤 방식으로 분리가 진행되는지 질문하고 싶어요!